定量聚合酶链反应的研究进展与临床应用
关键词：
随着热稳定DNA多聚酶的发现，聚合酶链反应(PCR)技术发生了革命性的飞跃，使得其应用于临床成为可能，为医学检验及其研究提供了新的手段。已用于临床的PCR方法至今大都为定性分析，既无标准对照，也无质控，其最终产物用电泳法鉴定容易产生非特异性条带，结果重复性差，可靠性低，因而给临床诊断带来混乱。由于定性没有量化指标，所以无法用于疾病随访和疗效观察。如何提高灵敏度和稳定性，并能对样品中的DNA和RNA进行定量分析是迫切需要解决的课题。
一、目前临床采用的几种PCR定量测定方法
1.固体捕获技术的运用。(1)PCR-酶联化学发光法：Marrin等[1] 用固相捕获技术和酶联化学发光方法进行PCR定量。所有的反应均在微孔板上进行。由于引物上标有生物素，因而PCR产物上也标有相对量的生物素，它能定量地被链霉亲和素包被的微孔板捕获，然后用一荧光素标记的寡核苷酸探针杂交，加入碱性磷酸酶标记的抗荧光素抗体，再加入化学发光底物，用发光仪检测其光信号，与标准曲线对照定量DNA或RNA。(2)荧光标记引物法：Londgraf等[2] 将一对引物分别标记生物素和荧光素 ......
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