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关键词：
建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型，用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测大鼠血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量，用原位杂交法观察肺、心、脑、肾等器官bFGF mRNA的表达,以探讨bFGF在慢性低氧性肺动脉高压肺血管重建中的作用机制。
材料与方法 (1)雄性Wistar大鼠30只，体重250～300 g, 随机分为低氧组(15只)及对照组(15只)。低氧组参照孙波报道的方法复制低氧性肺动脉高压大鼠模型。大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔内麻醉(50 mg*kg-1 )。自右颈外静脉插管经右心房,右心室至肺动脉,用多导生理仪测定平均肺动脉压(mPAP)。取右肺、脑、肾脏、心脏用10%中性甲醛缓冲液固定。石蜡包埋，连续切片，分别作HE、弹力纤维染色及原位杂交。从肺动脉采血3ml，离心后取血清贮存于-20℃待测。(2)用ELISA法测定血清bFGF含量。人重组bFGF Sandwich ELISA 药盒为美国R&D Systems公司产品，灵敏度为1 pg*ml-1 。按说明书操作,用酶联免疫检测仪在波长450 nm测定光密度值，绘制标准曲线，求得样品bFGF相对含量。(3)反义寡聚核苷酸探针按Kitadai等[1] 报道的序列参照大鼠bFGF互补脱氧核糖核酸(CDNA)修改，序列为3′，ggc, ctc, ctg, ccg, ccg, ccg, cgg, agg, ggt, ggg5 。探针由美国Cybersyn公司合成，用高效液相色谱仪(HPLC)纯化。用地高辛(DIG)-寡聚核苷酸3′末端标记药盒标记。原位杂交参照宝灵曼公司的DIG检测试剂盒说明书进行。杂交前用RNA酶处理切片或用PBS代替标记探针作阴性对照。
统计学处理：数据以两均数比较, t检验。
结果 1.血清bFGF含量及肺动脉压的检测见附表。
附表 mPAP、右心室肥厚指数、血清
bFGF含量的变化(x ±s)
| 组别 | 鼠数 | mPAP (kPa) | RV/ (LV+S) | 血清bFGF (pg*ml-1 ) |
| 对照组 | 15 | 2.1±0.2 | 0.23±0.02 | 6.3±1.0 |
| 低氧组 | 15 | 4.0±0.5 | 0.33±0.02 | 35.9±23.5 |
| P值 | <0.01 | <0.01 | <0.005 |
2.组织学及原位杂交结果：光镜下观察HE染色切片显示低氧3周大鼠肺小动脉平滑肌细胞增生、肥大、管腔狭窄，弹力纤维染色示：血管中层肥厚(图1，2)。原位杂交对照组大鼠肺、脑、心、肾等脏器bFGF mRNA几乎无表达(图3)。低氧组大鼠肺小动脉内皮细胞，平滑肌细胞及血管外膜细胞bFGF mRNA表达为阳性，尤以平滑肌细胞染色最强(图4)。而脑、肾、心bFGF mRNA表达无变化。
讨论 我们的研究表明，慢性低氧组大鼠mPAP明显升高，右心室肥厚。弹力纤维染色示：肺小动脉中层增厚。HE染色示：平滑肌细胞肥大，细胞外基质增加，说明慢性低氧已导致肺小动脉结构的重建及肺动脉高压的形成。
一般认为bFGF生物调节作用是以局部旁分泌或自分泌形式而实现。但近年来的研究表明，正常人血清存在少量的bFGF。某些肿瘤如肾、肺、脑的恶性肿瘤血清bFGF明显高于正常人[2] 。我们的研究发现，低氧3周大鼠血清bFGF含量明显高于对照组。说明bFGF确存在于血循环中，并可能起到一定的生理作用。原位杂交发现低氧3周大鼠肺小动脉bFGF mRNA表达明显增强，而心、脑、肾等重要器官bFGF mRNA表达无明显变化，说明血清bFGF来源于肺组织。
血循环中bFGF升高是否能发挥生理调节作用尚不清楚。据文献报道，完整的内皮细胞可能为bFGF作用于血管平滑肌的机械屏障，内皮细胞还能合成肝素样bFGF抑制剂，以阻止bFGF生物效应的发挥[3] 。低氧状况下，肺血管内皮细胞受损，肺血管壁bFGF mRNA表达增加，局部合成bFGF增加，以旁分泌或自分泌形式起作用。此外，部分bFGF可进入血循环，由于低氧使肺组织内血管内皮细胞受损，内皮细胞对bFGF屏障作用消失, bFGF因而能发挥生物效应, 促进血管平滑肌细胞增殖，肥大，从而调节肺血管的重建。但对其他器官及组织影响较小。
参考文献
1Kitadai Y, Bucana CD, Ellis LM, et al. In situ mRNA hybridization technique for analysis of metastasis-related genes in human colon carcinoma cells.Am J Pathol，1995, 147:1238-1247.
2Li M ,Yoshida H, Aramaki Y, et al. Improved enzyme immunoassay for human basic fibroblast growth factor using a new enhanced chemiluminescence system. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 193:540-545.
3Edelman ER, Nugent MA, Smith LT, et al. Basic fibroblast growth factor enhances the coupling of intimal hyperplasia and proliferation of vasa vasorum in injured rat arteries. J Clin Invest, 1992，89:465-473.
本课题受国家“九五”攻关科研基金资助(基金编号：96-906-02-17)
(收稿：1998-01-12 修回：1998-05-31)
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