汉滩病毒截短核蛋白在大肠杆菌中表达及其抗原分析*
肾综合征出血热病毒|重组核蛋白|免疫印迹试验|间接酶联免疫|吸附试验,汉滩病毒截短核蛋白在大肠杆菌中表达及其抗原分析*,关键词:
关键词:肾综合征出血热病毒;重组核蛋白;免疫印迹试验;间接酶联免疫;吸附试验
摘要 目的 体外克隆表达肾综合征出血热病毒部分核蛋白编码基因,筛选病毒核蛋白在人体体液应答中的主要抗原决定簇区,以期获得高质量核蛋白抗原,为研制新型HFRS基因工程诊断试剂奠定基础。
方法 利用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶酶切的方法分离汉滩病毒76-118S片段部分编码基因(SA、SB和SC),并分别克隆入T7原核表达载体,在大肠杆菌中表达;免疫印迹试验和酶联免疫吸附反应分析重组抗原活性。
结果 截短核蛋白得到有效表达,分子量分别约为4.5KD(rSA)、25kD(rSB)和15.5kD(rSC),Western-blot分析表明25kD截短核蛋白具有较好的抗原活性;粗提抗原Dot-ELISA方法检测HFRS患者血清结果与IFA法一致;25kD重组小片段抗原与抗HFRSV单克隆抗体5H5、B11及H7可发生特异性反应。
结论 汉滩病毒核蛋白的主要抗原决定簇主要集中在氨基端;原核表达的截短核蛋白在HFRSV感染的血清学诊断中具有一定的价值。
EXPRESSION OF TRUNCATED REGIONS OF THE SGENOME SEGMENT OF
HANTAAN VIRUS INE.COLI AND THE ANTIGEN OF THE RECOMB INANT PROTEINSWang Changjun TangJiaqi Pan Xiuzheng et al
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