多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型
撒亚莲, 华映坤, 严新民, 董虹, 沈涛 , 云南省第一人民医院临床基础医学研究所 云南省昆明市 650032
宋建新 , 云南省第一人民医院临床检验中心 云南省昆明市 650032
贾玲 , 云南省第一人民医院肿瘤科 云南省昆明市 650032
通讯作者 : 撒亚莲, 650032, 云南省昆明市金碧路157#, 云南省第一人民医院. sa_yl@yahoo.com.cn
电话: 0871-3638454 传真: 0871-3619076
, http://www.100md.com
收稿日期: 2005-04-07 接受日期: 2005-04-09
摘要
目的 : 用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer，CIK)细胞，并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化.
方法 : 用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞，rhIFN-g，rhIL-2，Anti-CD3mAb共孵育.分别在第0，4，7，10，13 d计细胞数，并通过流式细胞术检测细胞免疫表型.
结果 : 大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-g，IL-2，Anti-CD3mAb共孵育4，7，10，13 d，细胞数分别增加2.69±0.9，14.1±3.7，23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+，CD4+，CD8+和CD3+CD16+ CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%，(31.5±5.8)%，(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%，(48.0±6.3)%，(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%.
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结论 : rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，体外增殖力强，是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.
撒亚莲, 华映坤, 宋建新, 严新民, 贾玲, 董虹, 沈涛. 多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型. 世界华人消化杂志 2005;13(13):1592-1594 1 培养第13 d的CIK细胞，×200.
2.2 CIK细胞体外扩增情况 在培养第1-3 d细胞没有明显增殖.4-5 d可观察到细胞呈团、集落样生长，数量明显增多.在培养4，7，10，13 d细胞数量分别增加2.7±0.9，14.1±3.7，23.0±5.0和31.2±3.0倍.
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2.3 CIK细胞的免疫表型 在培养第13 d，CD3+，CD4+，CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞分别从(62.8±7.6)%，(31.5±5.8)%，(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%，(48.0±6.3)%，(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%(图2).
图 2 (PDF) 培养13 d的CIK细胞免疫表型. A: CD3+/CD4+; B: CD3+/CD8+; C: CD3+/CD16+/CD56+.
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3 讨论
CIK细胞是一组非MHC和非T细胞受体限制性的免疫活性细胞，其主要效应细胞是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群[5-6].CIK细胞是目前认识到的细胞毒活性最强的免疫效应细胞，回输体内后达到杀灭癌细胞、抑制肿瘤生长及清除残留微小病灶的作用[7-8].由于CIK细胞对正常人体细胞、免疫系统没有任何毒副作用，而且对多重耐药的肿瘤敏感.因此，CIK细胞过继免疫治疗被公认为继手术、放疗、化疗之后的第四种新型肿瘤治疗模式之一.我们在体外通过rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb联合诱导活化大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，探讨了其增殖能力以及免疫表型的变化，为临床肿瘤患者过继免疫治疗提供理论依据.
在培养第1 d 加入rhIFN-g，预诱导细胞表达IL-2受体、促进细胞增殖及分泌细胞因子.次日加入rhIL-2 和Anti-CD3mAb联合诱导促进T淋巴细胞增殖并加强T淋巴细胞的细胞毒作用.健康状况下，外周血CIK细胞大约为1-5%，而我们的研究表明，大肠癌患者外周血单个核细胞在rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb联合作用下培养13 d，细胞数量增加31.2倍，CD3+CD16+CD56+T细胞扩增近23倍.可以看出，CIK细胞是一种增殖活力强的免疫效应细胞.据报道，其他细胞因子IL-1，IL-2，IL-7，IL-12，IL-15等[9-10]的不同组合也可诱导单个核细胞为CIK细胞.但我们的操作方法简便，且细胞因子rhIFN-g，rhIL-2为上市药品.总之，本文联合应用多种细胞因子活化大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，其体外增殖力强，是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.该研究为临床开展大肠癌患者CIK细胞过继免疫治疗奠定理论基础.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Peeters M, Haller DG. Therapy for early-stage colorectal cancer. Oncology 1999;13:307-315
2 Blattman JN, Greenberg PD. Cancer immunotherapy: a treatment for the masses. Science 2004;305:200-205
3 Yamaguchi Y, Ohshita A, Kawabuchi Y, Ohta K, Shimizu K, Minami K, Hihara J, Miyahara E, Toge T. Adoptive immunotherapy
, 百拇医药
of cancer using activated autologous lymphocytes-current status and new strategies. Hum Cell 2003;16:183-189
4 Schmidt-Wolf IG, Negrin RS, Kiem HP, Blume KG, Weissman IL. Use of a SCID mouse/ hum an lym phoma model to
evaluate cytokine- induced killer cells with potentantitum or cell activity. J Exp Med 1991;174:139-149
5 Wang FS, Liu MX, Zhang B, Shi M, Lei ZY, Sun WB, Du QY, Chen JM. Antitumor activities of human autologous
, 百拇医药
cytokine-induced killer (CIK) cells against hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo. World J Gastroenterol
2002;8:464-468
6 Linn YC, Hui KM. Cytokine-induced killer cells: NK-like T cells with cytotolytic specificity against leukemia. Leuk
Lymphoma 2003;44:1457-1462
7 Hongeng S, Petvises S, Worapongpaiboon S, Rerkamnuaychoke B, Pakakasama S, Jootar S. Generation of CD3+
, 百拇医药
CD56+ cytokine-induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cells. Int J Hematol 2003;77:175-179
8 Schmidt-Wolf IG, Lefterova P, Mehta BA, Fernandez LP, Huhn D, Blume KG, Weissman IL, Negrin RS.
Phenotypic characterization and identification of effector cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer
cells. Exp Hematol 1993;21:1673-1679
, 百拇医药
9 Zoll B, Lefterova P, Csipai M, Finke S, Trojaneck B, Ebert O, Micka B, Roigk K, Fehlinger M, Schmidt-Wolf GD, Huhn
D, Schmidt-Wolf IG. Generation of cytokine-induced killer cells using exogenous interleukin-2, -7 or-12. Cancer
Immunol Immunother 1998;47:221-226
10 Li Y, Huang SL, Wu YF, Wei J, Bao R, Zhou DH. Expansion of CIK/NK cells from cord blood by using different combinations
of stem cell factor, FLT3 ligand and interleukin 2, 7, 15 in vitro. Zhongguo Shiyan Xueyexue Zazhi 2004;12:350-354
编辑 张海宁, 百拇医药( 撒亚莲, 华映坤, 宋建新, 严新民, 贾 玲, 董 虹, 沈 涛)
宋建新 , 云南省第一人民医院临床检验中心 云南省昆明市 650032
贾玲 , 云南省第一人民医院肿瘤科 云南省昆明市 650032
通讯作者 : 撒亚莲, 650032, 云南省昆明市金碧路157#, 云南省第一人民医院. sa_yl@yahoo.com.cn
电话: 0871-3638454 传真: 0871-3619076
, http://www.100md.com
收稿日期: 2005-04-07 接受日期: 2005-04-09
摘要
目的 : 用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer，CIK)细胞，并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化.
方法 : 用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞，rhIFN-g，rhIL-2，Anti-CD3mAb共孵育.分别在第0，4，7，10，13 d计细胞数，并通过流式细胞术检测细胞免疫表型.
结果 : 大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-g，IL-2，Anti-CD3mAb共孵育4，7，10，13 d，细胞数分别增加2.69±0.9，14.1±3.7，23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+，CD4+，CD8+和CD3+CD16+ CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%，(31.5±5.8)%，(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%，(48.0±6.3)%，(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%.
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结论 : rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，体外增殖力强，是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.
撒亚莲, 华映坤, 宋建新, 严新民, 贾玲, 董虹, 沈涛. 多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型. 世界华人消化杂志 2005;13(13):1592-1594 1 培养第13 d的CIK细胞，×200.
2.2 CIK细胞体外扩增情况 在培养第1-3 d细胞没有明显增殖.4-5 d可观察到细胞呈团、集落样生长，数量明显增多.在培养4，7，10，13 d细胞数量分别增加2.7±0.9，14.1±3.7，23.0±5.0和31.2±3.0倍.
, http://www.100md.com
2.3 CIK细胞的免疫表型 在培养第13 d，CD3+，CD4+，CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞分别从(62.8±7.6)%，(31.5±5.8)%，(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%，(48.0±6.3)%，(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%(图2).
图 2 (PDF) 培养13 d的CIK细胞免疫表型. A: CD3+/CD4+; B: CD3+/CD8+; C: CD3+/CD16+/CD56+.
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3 讨论
CIK细胞是一组非MHC和非T细胞受体限制性的免疫活性细胞，其主要效应细胞是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群[5-6].CIK细胞是目前认识到的细胞毒活性最强的免疫效应细胞，回输体内后达到杀灭癌细胞、抑制肿瘤生长及清除残留微小病灶的作用[7-8].由于CIK细胞对正常人体细胞、免疫系统没有任何毒副作用，而且对多重耐药的肿瘤敏感.因此，CIK细胞过继免疫治疗被公认为继手术、放疗、化疗之后的第四种新型肿瘤治疗模式之一.我们在体外通过rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb联合诱导活化大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，探讨了其增殖能力以及免疫表型的变化，为临床肿瘤患者过继免疫治疗提供理论依据.
在培养第1 d 加入rhIFN-g，预诱导细胞表达IL-2受体、促进细胞增殖及分泌细胞因子.次日加入rhIL-2 和Anti-CD3mAb联合诱导促进T淋巴细胞增殖并加强T淋巴细胞的细胞毒作用.健康状况下，外周血CIK细胞大约为1-5%，而我们的研究表明，大肠癌患者外周血单个核细胞在rhIFN-g，rhIL-2和Anti-CD3mAb联合作用下培养13 d，细胞数量增加31.2倍，CD3+CD16+CD56+T细胞扩增近23倍.可以看出，CIK细胞是一种增殖活力强的免疫效应细胞.据报道，其他细胞因子IL-1，IL-2，IL-7，IL-12，IL-15等[9-10]的不同组合也可诱导单个核细胞为CIK细胞.但我们的操作方法简便，且细胞因子rhIFN-g，rhIL-2为上市药品.总之，本文联合应用多种细胞因子活化大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞，其体外增殖力强，是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.该研究为临床开展大肠癌患者CIK细胞过继免疫治疗奠定理论基础.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Peeters M, Haller DG. Therapy for early-stage colorectal cancer. Oncology 1999;13:307-315
2 Blattman JN, Greenberg PD. Cancer immunotherapy: a treatment for the masses. Science 2004;305:200-205
3 Yamaguchi Y, Ohshita A, Kawabuchi Y, Ohta K, Shimizu K, Minami K, Hihara J, Miyahara E, Toge T. Adoptive immunotherapy
, 百拇医药
of cancer using activated autologous lymphocytes-current status and new strategies. Hum Cell 2003;16:183-189
4 Schmidt-Wolf IG, Negrin RS, Kiem HP, Blume KG, Weissman IL. Use of a SCID mouse/ hum an lym phoma model to
evaluate cytokine- induced killer cells with potentantitum or cell activity. J Exp Med 1991;174:139-149
5 Wang FS, Liu MX, Zhang B, Shi M, Lei ZY, Sun WB, Du QY, Chen JM. Antitumor activities of human autologous
, 百拇医药
cytokine-induced killer (CIK) cells against hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo. World J Gastroenterol
2002;8:464-468
6 Linn YC, Hui KM. Cytokine-induced killer cells: NK-like T cells with cytotolytic specificity against leukemia. Leuk
Lymphoma 2003;44:1457-1462
7 Hongeng S, Petvises S, Worapongpaiboon S, Rerkamnuaychoke B, Pakakasama S, Jootar S. Generation of CD3+
, 百拇医药
CD56+ cytokine-induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cells. Int J Hematol 2003;77:175-179
8 Schmidt-Wolf IG, Lefterova P, Mehta BA, Fernandez LP, Huhn D, Blume KG, Weissman IL, Negrin RS.
Phenotypic characterization and identification of effector cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer
cells. Exp Hematol 1993;21:1673-1679
, 百拇医药
9 Zoll B, Lefterova P, Csipai M, Finke S, Trojaneck B, Ebert O, Micka B, Roigk K, Fehlinger M, Schmidt-Wolf GD, Huhn
D, Schmidt-Wolf IG. Generation of cytokine-induced killer cells using exogenous interleukin-2, -7 or-12. Cancer
Immunol Immunother 1998;47:221-226
10 Li Y, Huang SL, Wu YF, Wei J, Bao R, Zhou DH. Expansion of CIK/NK cells from cord blood by using different combinations
of stem cell factor, FLT3 ligand and interleukin 2, 7, 15 in vitro. Zhongguo Shiyan Xueyexue Zazhi 2004;12:350-354
编辑 张海宁, 百拇医药( 撒亚莲, 华映坤, 宋建新, 严新民, 贾 玲, 董 虹, 沈 涛)
