pH值调节-超滤法适合转移因子的工业生产
技术支持者：河南中泰药业有限公司生化室主任 朱天新 任晚琼
在转移因子的制备中，通过反复冻融可促使细胞完全破碎，使转移因子充分释放，从而提高产品的收率。匀浆液冻融次数越多，转移因子溶液中多肽的浓度就越高。但是，冻融次数并非越多越好。中泰药业有限公司的科研人员研究发现，对匀浆液冻融3次，采用pH值调节-超滤的提取方法，能提高多肽的收率，制备的溶液各项指标也符合规定。此法生产周期短、收率高，适于转移因子的工业化生产。
转移因子是一种主要介导细胞免疫的淋巴因子。它可使供体细胞的免疫性转移至受体正常的淋巴细胞，使其具有供体的细胞免疫性。无种属特异性是转移因子的重要特征。临床上其主要被用于先天和后天免疫功能低下，细菌、病毒等感染性疾病(如慢性乙型肝炎、气管炎、流脑等)的辅助治疗。
在该项研究中，技术人员取新鲜的猪脾脏，经清洗，去脂肪、筋膜等杂质，绞碎后加入适量注射用水，用高速组织捣碎机捣碎(12000转/分钟，1分钟3次)，经检测无完整的细胞后，加入适量的注射用水，搅拌后将匀浆平均分成3份，分置于500毫升血清瓶中，于-20℃冷冻。冻透后，在常温下解冻，分别冻融0、3、5次，再将各冻融次数的浆液分别平均分成两份。解融的料浆经4000转/分钟离心35分钟后取上清液备用。
转移因子的提取方法分为：Laurence法(A法)，即直接将上清液置于透析袋中，于4℃用等体积的注射用水透析24小时，抽取注射用水再透析24小时，收集合并透析液。pH值调节-超滤法(B法)，即取上清液用1摩尔/升的盐酸调pH值为5.0,4000转/分钟离心35分钟，对上清液再用1摩尔/升的氢氧化钠调pH值为7.0，4000转/分钟离心35分钟，对上清液用无石棉的澄清滤板过滤、澄清，澄清液用截留相对分子质量为5000的中空纤维超滤器超滤，收集滤出液即可。
研究人员对所得溶液进行体外吸收、蛋白质、高分子物质、活性、多肽及核糖含量等检测。结果表明，由A法提取的采用3种冻融次数的转移因子溶液，其高分子物质(相对分子质量大于6000)的含量均超过5%。虽然该法不需离心、超滤设备，但生产周期长，产品中高分子物质含量难以控制，多肽或核糖的浓度也达不到要求。在用B法提取的转移因子溶液中，从3次冻融的匀浆液中提取的转移因子各检测指标均合格。由于采用了两步pH值调节步骤，可除去大部分杂蛋白质，使澄清、超滤易于进行。同时由于采用了截留相对分子质量为5000的超滤装置，从而将高分子物质控制在规定的范围内。, http://www.100md.com(朱天新；任晚琼)
在转移因子的制备中，通过反复冻融可促使细胞完全破碎，使转移因子充分释放，从而提高产品的收率。匀浆液冻融次数越多，转移因子溶液中多肽的浓度就越高。但是，冻融次数并非越多越好。中泰药业有限公司的科研人员研究发现，对匀浆液冻融3次，采用pH值调节-超滤的提取方法，能提高多肽的收率，制备的溶液各项指标也符合规定。此法生产周期短、收率高，适于转移因子的工业化生产。
转移因子是一种主要介导细胞免疫的淋巴因子。它可使供体细胞的免疫性转移至受体正常的淋巴细胞，使其具有供体的细胞免疫性。无种属特异性是转移因子的重要特征。临床上其主要被用于先天和后天免疫功能低下，细菌、病毒等感染性疾病(如慢性乙型肝炎、气管炎、流脑等)的辅助治疗。
在该项研究中，技术人员取新鲜的猪脾脏，经清洗，去脂肪、筋膜等杂质，绞碎后加入适量注射用水，用高速组织捣碎机捣碎(12000转/分钟，1分钟3次)，经检测无完整的细胞后，加入适量的注射用水，搅拌后将匀浆平均分成3份，分置于500毫升血清瓶中，于-20℃冷冻。冻透后，在常温下解冻，分别冻融0、3、5次，再将各冻融次数的浆液分别平均分成两份。解融的料浆经4000转/分钟离心35分钟后取上清液备用。
转移因子的提取方法分为：Laurence法(A法)，即直接将上清液置于透析袋中，于4℃用等体积的注射用水透析24小时，抽取注射用水再透析24小时，收集合并透析液。pH值调节-超滤法(B法)，即取上清液用1摩尔/升的盐酸调pH值为5.0,4000转/分钟离心35分钟，对上清液再用1摩尔/升的氢氧化钠调pH值为7.0，4000转/分钟离心35分钟，对上清液用无石棉的澄清滤板过滤、澄清，澄清液用截留相对分子质量为5000的中空纤维超滤器超滤，收集滤出液即可。
研究人员对所得溶液进行体外吸收、蛋白质、高分子物质、活性、多肽及核糖含量等检测。结果表明，由A法提取的采用3种冻融次数的转移因子溶液，其高分子物质(相对分子质量大于6000)的含量均超过5%。虽然该法不需离心、超滤设备，但生产周期长，产品中高分子物质含量难以控制，多肽或核糖的浓度也达不到要求。在用B法提取的转移因子溶液中，从3次冻融的匀浆液中提取的转移因子各检测指标均合格。由于采用了两步pH值调节步骤，可除去大部分杂蛋白质，使澄清、超滤易于进行。同时由于采用了截留相对分子质量为5000的超滤装置，从而将高分子物质控制在规定的范围内。, http://www.100md.com(朱天新；任晚琼)