松茸发酵物中抗癌成分的提取与作用的研究
http://www.100md.com
参见附件。
胡尚勤 (重庆师范大学生命科学学院，重庆，400047)
摘要：为进一步开发利用松茸，采用松茸深层液体发酵生产,丙酮乙醚萃取法提取其中抗癌的有效成分松茸菌多糖。并对其中抗癌成分松茸菌多糖进行了抑菌试验和抗癌试验。研究结果表明，该物质有明显抑菌作用和抗癌作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为31mm，对S-180, B16和肝癌细胞的抑制率分别为47.7%、75.4%和80.6% 。同时，用发酵方法生产比野生和人工栽培松茸的周期短、产量高。为松茸的进一步开发利用提供了理论依据。
关键词 ： 松茸菌 ， 发酵， 抗癌物质， 提取，分析
Studies of test and extraction of anti-cancer matter of the fermentative Production by using Tricholoma matsutakeSP.
Hu Shangqin (College life Sciences , Chongqing Normal University, Chongqing 400047)
A bstract : The anti-cancer matter of the liquid submerged fermentative production by used the Tricholoma matsutake sp. For the go a step further develop and utilize ,the experiments of the anti-cancer and bacteriostasis is used by this matters . The result shows that diameter of greatest bacteriostasis is 31mm , and the rate of restrain is 47.7%,75.4%,and 80.6% ,for the S-180 ,B16 ,and cancer cells of the liver . The Period is short, yield is high . The proved theory according to the go a step further develop and utilize of the T.Kamasuke .
Key words: Tricholoma matsutake sp, Fermentation , Anti-cancermatters, extraction，analysis
自从T. Kamasuka 发现金针菇子实体中提取的多糖对小鼠瘤有明显抑制作用的报道以
后，人们对食用菌，特别是对金针菇抗癌作用的研究十分活跃[1]，尤其日本开始较早且深入。然而对松茸由于该菌尚不能象其他食用菌那样完全进行人工栽培，只能靠野生菌的子实体作资源的原因，致使松茸开发利用受到限制，所检索的有关文献资料中发现已有菌多糖如灵芝、香菇、茯苓多糖及抗癌[2,3,4]的介绍，但是有关松茸深层液体发酵方法生产抗癌物质的研究报道尚少。本研究旨在采用松茸菌进行深层液体发酵并提取其中有效成分松茸菌多糖(TME)，并对其进行抑菌实验和抗癌实验，不仅解决了松茸菌自然的资源不足打开了方便之门，而且为寻找抗癌物质，多渠道地攻克癌症，提供了新方法和理论依据。
1、材料和方法
1.1材料
1.1.1菌种 松茸菌(Tricholoma matsutake SP.)由重庆师范大学应用微生物研究所提供。实验动物及癌细胞由第三军医大学提供。
1.1.2培养基 ：马铃薯葡萄糖(内江葡萄糖)培养基(PDA)[5]
1.1.3药品试剂：丙酮，乙醚，蛋白酶，硫酸，苯酚和测试所需各种药品试剂等。
1.1.4仪器设备：发酵罐(5L,10L)，透析袋(Dialysis tubing visking 20/32，44110-05,1446Fc9994A13),恒温振荡培养器、培养箱，无菌室及超净工作台等。
1.2.方法
1.2.1菌种活化培养 将松茸菌接种到PDA固体斜面培养基上，24-25℃培养5d。
1.2.2液体种培养 将活化培养好的松茸菌制成菌丝，接种到250mL三角瓶PDA液体培养基中，每支斜面种接种3瓶，24℃振荡培养3d。
1.2.3 液体振荡培养 将250mL的三角瓶液体接种到500 mL三角瓶24℃振荡培养4d
* 重庆市教委课题，渝教高(2003)14号
(转速110r/min)。
1.2.4 进行10L发酵罐发酵 用PDA液体培养基，将培养基121℃灭菌30min，冷却到30℃时，接种三级种子，接种量为2%，25℃通气发酵培养5d。
1.2.5 收集菌丝体和发酵液 发酵结束时，过滤或离心分别收集菌丝体和发酵液。
1.2.6 抗癌物质(松茸菌多糖TME)的提取工艺 (图表请参见附件word文档)
离心 浓缩 透析袋 浓缩
过滤 发酵液 上清液 浓缩上清液 透析液 浓发酵物 (90℃以下) 透析
60℃干燥粉碎 1：50水煮 浓缩
菌丝体 菌丝体干粉 抽提液 浓缩抽
过筛(80目) 抽提
离心 5℃，95%乙醇 丙酮、乙醚
缩液 上清液 沉淀物 提取物(TME1)。
沉淀12h 洗涤、干燥
离心 透析袋 浓缩 离心 95%乙醇(5℃) 丙酮、乙醚
提液 上清液 透析液 浓缩液 上清液 沉淀物
透析 沉淀12h 洗涤、真空干燥
提取物(TME2) ......
胡尚勤 (重庆师范大学生命科学学院，重庆，400047)
摘要：为进一步开发利用松茸，采用松茸深层液体发酵生产,丙酮乙醚萃取法提取其中抗癌的有效成分松茸菌多糖。并对其中抗癌成分松茸菌多糖进行了抑菌试验和抗癌试验。研究结果表明，该物质有明显抑菌作用和抗癌作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为31mm，对S-180, B16和肝癌细胞的抑制率分别为47.7%、75.4%和80.6% 。同时，用发酵方法生产比野生和人工栽培松茸的周期短、产量高。为松茸的进一步开发利用提供了理论依据。
关键词 ： 松茸菌 ， 发酵， 抗癌物质， 提取，分析
Studies of test and extraction of anti-cancer matter of the fermentative Production by using Tricholoma matsutakeSP.
Hu Shangqin (College life Sciences , Chongqing Normal University, Chongqing 400047)
A bstract : The anti-cancer matter of the liquid submerged fermentative production by used the Tricholoma matsutake sp. For the go a step further develop and utilize ,the experiments of the anti-cancer and bacteriostasis is used by this matters . The result shows that diameter of greatest bacteriostasis is 31mm , and the rate of restrain is 47.7%,75.4%,and 80.6% ,for the S-180 ,B16 ,and cancer cells of the liver . The Period is short, yield is high . The proved theory according to the go a step further develop and utilize of the T.Kamasuke .
Key words: Tricholoma matsutake sp, Fermentation , Anti-cancermatters, extraction，analysis
自从T. Kamasuka 发现金针菇子实体中提取的多糖对小鼠瘤有明显抑制作用的报道以
后，人们对食用菌，特别是对金针菇抗癌作用的研究十分活跃[1]，尤其日本开始较早且深入。然而对松茸由于该菌尚不能象其他食用菌那样完全进行人工栽培，只能靠野生菌的子实体作资源的原因，致使松茸开发利用受到限制，所检索的有关文献资料中发现已有菌多糖如灵芝、香菇、茯苓多糖及抗癌[2,3,4]的介绍，但是有关松茸深层液体发酵方法生产抗癌物质的研究报道尚少。本研究旨在采用松茸菌进行深层液体发酵并提取其中有效成分松茸菌多糖(TME)，并对其进行抑菌实验和抗癌实验，不仅解决了松茸菌自然的资源不足打开了方便之门，而且为寻找抗癌物质，多渠道地攻克癌症，提供了新方法和理论依据。
1、材料和方法
1.1材料
1.1.1菌种 松茸菌(Tricholoma matsutake SP.)由重庆师范大学应用微生物研究所提供。实验动物及癌细胞由第三军医大学提供。
1.1.2培养基 ：马铃薯葡萄糖(内江葡萄糖)培养基(PDA)[5]
1.1.3药品试剂：丙酮，乙醚，蛋白酶，硫酸，苯酚和测试所需各种药品试剂等。
1.1.4仪器设备：发酵罐(5L,10L)，透析袋(Dialysis tubing visking 20/32，44110-05,1446Fc9994A13),恒温振荡培养器、培养箱，无菌室及超净工作台等。
1.2.方法
1.2.1菌种活化培养 将松茸菌接种到PDA固体斜面培养基上，24-25℃培养5d。
1.2.2液体种培养 将活化培养好的松茸菌制成菌丝，接种到250mL三角瓶PDA液体培养基中，每支斜面种接种3瓶，24℃振荡培养3d。
1.2.3 液体振荡培养 将250mL的三角瓶液体接种到500 mL三角瓶24℃振荡培养4d
* 重庆市教委课题，渝教高(2003)14号
(转速110r/min)。
1.2.4 进行10L发酵罐发酵 用PDA液体培养基，将培养基121℃灭菌30min，冷却到30℃时，接种三级种子，接种量为2%，25℃通气发酵培养5d。
1.2.5 收集菌丝体和发酵液 发酵结束时，过滤或离心分别收集菌丝体和发酵液。
1.2.6 抗癌物质(松茸菌多糖TME)的提取工艺 (图表请参见附件word文档)
离心 浓缩 透析袋 浓缩
过滤 发酵液 上清液 浓缩上清液 透析液 浓发酵物 (90℃以下) 透析
60℃干燥粉碎 1：50水煮 浓缩
菌丝体 菌丝体干粉 抽提液 浓缩抽
过筛(80目) 抽提
离心 5℃，95%乙醇 丙酮、乙醚
缩液 上清液 沉淀物 提取物(TME1)。
沉淀12h 洗涤、干燥
离心 透析袋 浓缩 离心 95%乙醇(5℃) 丙酮、乙醚
提液 上清液 透析液 浓缩液 上清液 沉淀物
透析 沉淀12h 洗涤、真空干燥
提取物(TME2) ......
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