病理技术课件.ppt
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2005年8月26日
参见附件(2612kb)。
病理技术在医学科研中的应用
病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的有尸体解剖，大体标本的制作、制片技术(石腊切片、冰冻切片、火棉胶切片、半薄切片、超薄切片)组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。
作为实验技术人员大量的工作是病理制片技术，即常规病理切片，特殊染色，以供给教学、科研、临床活检诊断之用。
第一章
病理技术的应用范围
> 帮助临床查明死因(原因不明的死亡)
> 手术后病变标本，以明确诊断(临床活检)
> 提供教学、科研的资料
第一节 组织制片的概述
组织制片技术的应用，从1665年由HOOk发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片；后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。
组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。因此，组织制片技术是教学、医学和科研中不可缺少的一个组成部分。
第二节 制片的种类
1、组织切片法
任何组织切片必须依靠切片机将组织切成薄片(厚度以μm计)，再进行染色而得到结果。在切成薄片以前必须设发使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。渗透到组织中的支持剂(物质)有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。冰冻组织切片发是直接利用快速冷冻法进行切片。
2、组织非切片法
不用切片机，不经过切片手续而制成组织切片的方法，包括整体封藏法、浮片洁、压碎法和组织直接印片法。这些方法操作简单而快，可根据制片的需要进行选择使用。
第三节 制片方法的程序
组织切片法制作过程中的各种操作
1、取材与固定
取材是根据实验的目的和要求及病变程度而合理取得组织材料。固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察研究之用，固定剂同时具有硬化细胞组织的作用，使制片便于进行。
2、洗涤与脱水
洗涤是把渗入组织中的固定剂洗去，防止染色中的结晶产生。脱水是驱除组织中的水分，以利于透明和浸蜡。
3、透明与浸蜡(透蜡)
> 脱水后的组织中水分已被透明可代替，而有利于浸蜡。
> 浸蜡的目的是使组织有一定的硬度而有利于切片和细胞组织保持一定的生活时状态。
4、包埋与切片
用石蜡和其他包埋剂将组织包绕一定的形状以便于切片。将包埋好的组织块用切片机切成一定的厚度(以μm计)。
5、贴片(展片、捞片)和染色
> 将已切妥的切片在温水中展平整后用载玻片贴上，稍晾赶后再烤片。
> 染色可使细胞和组织被染上不同的颜色而产生一定的折射率，便于显微镜观察。
6、封 片
切片染色后用胶类物质将其封固，以利于长期保存。
二、 组织切片的主要程序
1.标本切开或取厚块→组织固定→固定后处理→(石腊切片法)脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→脱蜡→各级乙醇→水洗→常规染色或特殊染色→脱水→透明→树胶封片
2.标本切开或取厚块→组织固定(冰冻切片法)→冰冻切片→粘片→乙醇固定及水洗→常规染色→脱水→透明→树胶封片。
第二章
固定、固定液和取材
第一节 组织固定方法
在制作组织切片的过程中，首先将组织充分固定后才能进行制片，尤其对石蜡切片，这是不可少的重要步骤。
1、固定的意义
就是使要观察的组织构造尽量接近于它生前的正常状态。
2、组织固定的目的
1)迅速防止组织，细胞的死后变化，防止自溶与腐败，以保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。
2)使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，以保持它原有的结构与生活时相仿。
3)使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
4)固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬义，便于制片。
5)防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。
6)经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辩认。
由于固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液，其固定液的量一般不少于组织块总体积的4倍以上。
3、固定剂的性质和条件
为了能够达到固定的目的，必须具备以下的性质和条件：
1)迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织形态不至于有较大变化。
2)固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。
3)使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变。
4)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形。
5)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
6)能使细胞内的成分(蛋白质)凝固或沉淀下来。
7)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。增加媒染作用和染色能力。
8)使组织变硬，适于制片，但又不使材料太坚硬而松脆。
9)使组织充分固定，便于保存。
第二节 介绍几种常见固定液
用以固定组织的药剂，称为固定液(fixative)。
固定剂有简单固定剂(液)和混合固定剂两类。作为较好的固定液，首先有强渗透力，能迅速地渗入组织内部；其次不会使组织过渡收缩或膨胀，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不溶性物质；最后能使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的亲和力。
一、简单(单纯)固定液
1、甲醛(Formeldehyde)
甲醛(福尔马林)为一种无色气体，溶于水成为甲醛水溶液，甲醛是一种还原剂，极易挥发旦有强烈刺激性气味。在平时常用的甲醛浓度为10%，这是指以10ml甲醛加入90ml的水配成的，此液实际上只有4%的甲醛，习惯常用这浓度。
甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。但经乙醇脱水时收缩很大，它能使组织硬化并增加组织的弹性。固定厚度适当的组织，较为适宜。因早醛为非沉淀性固定剂，它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可与蛋白质化合，对脂肪，神经，及髓鞘的固定很好，也可固定高尔基体、线粒体，又是复糖的保存剂，使肝糖元变为微细的颗粒团。
使用甲醛固定的陈旧组织，以多血的赃器如脾、肝等，较易发生黑色或棕黑色的沉淀，称甲醛色素。
2、乙醇(Ethyl alcohol)
乙醇为无色液体，可以水在任何比例下混合。它是一种还原剂，很易被氧化为乙醛，在变为醋酸，所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。
用于固定时以80%-95%的浓度为好 ......
病理技术在医学科研中的应用
病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的有尸体解剖，大体标本的制作、制片技术(石腊切片、冰冻切片、火棉胶切片、半薄切片、超薄切片)组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。
作为实验技术人员大量的工作是病理制片技术，即常规病理切片，特殊染色，以供给教学、科研、临床活检诊断之用。
第一章
病理技术的应用范围
> 帮助临床查明死因(原因不明的死亡)
> 手术后病变标本，以明确诊断(临床活检)
> 提供教学、科研的资料
第一节 组织制片的概述
组织制片技术的应用，从1665年由HOOk发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片；后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。
组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。因此，组织制片技术是教学、医学和科研中不可缺少的一个组成部分。
第二节 制片的种类
1、组织切片法
任何组织切片必须依靠切片机将组织切成薄片(厚度以μm计)，再进行染色而得到结果。在切成薄片以前必须设发使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。渗透到组织中的支持剂(物质)有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。冰冻组织切片发是直接利用快速冷冻法进行切片。
2、组织非切片法
不用切片机，不经过切片手续而制成组织切片的方法，包括整体封藏法、浮片洁、压碎法和组织直接印片法。这些方法操作简单而快，可根据制片的需要进行选择使用。
第三节 制片方法的程序
组织切片法制作过程中的各种操作
1、取材与固定
取材是根据实验的目的和要求及病变程度而合理取得组织材料。固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察研究之用，固定剂同时具有硬化细胞组织的作用，使制片便于进行。
2、洗涤与脱水
洗涤是把渗入组织中的固定剂洗去，防止染色中的结晶产生。脱水是驱除组织中的水分，以利于透明和浸蜡。
3、透明与浸蜡(透蜡)
> 脱水后的组织中水分已被透明可代替，而有利于浸蜡。
> 浸蜡的目的是使组织有一定的硬度而有利于切片和细胞组织保持一定的生活时状态。
4、包埋与切片
用石蜡和其他包埋剂将组织包绕一定的形状以便于切片。将包埋好的组织块用切片机切成一定的厚度(以μm计)。
5、贴片(展片、捞片)和染色
> 将已切妥的切片在温水中展平整后用载玻片贴上，稍晾赶后再烤片。
> 染色可使细胞和组织被染上不同的颜色而产生一定的折射率，便于显微镜观察。
6、封 片
切片染色后用胶类物质将其封固，以利于长期保存。
二、 组织切片的主要程序
1.标本切开或取厚块→组织固定→固定后处理→(石腊切片法)脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→脱蜡→各级乙醇→水洗→常规染色或特殊染色→脱水→透明→树胶封片
2.标本切开或取厚块→组织固定(冰冻切片法)→冰冻切片→粘片→乙醇固定及水洗→常规染色→脱水→透明→树胶封片。
第二章
固定、固定液和取材
第一节 组织固定方法
在制作组织切片的过程中，首先将组织充分固定后才能进行制片，尤其对石蜡切片，这是不可少的重要步骤。
1、固定的意义
就是使要观察的组织构造尽量接近于它生前的正常状态。
2、组织固定的目的
1)迅速防止组织，细胞的死后变化，防止自溶与腐败，以保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。
2)使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，以保持它原有的结构与生活时相仿。
3)使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
4)固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬义，便于制片。
5)防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。
6)经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辩认。
由于固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液，其固定液的量一般不少于组织块总体积的4倍以上。
3、固定剂的性质和条件
为了能够达到固定的目的，必须具备以下的性质和条件：
1)迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织形态不至于有较大变化。
2)固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。
3)使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变。
4)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形。
5)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
6)能使细胞内的成分(蛋白质)凝固或沉淀下来。
7)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。增加媒染作用和染色能力。
8)使组织变硬，适于制片，但又不使材料太坚硬而松脆。
9)使组织充分固定，便于保存。
第二节 介绍几种常见固定液
用以固定组织的药剂，称为固定液(fixative)。
固定剂有简单固定剂(液)和混合固定剂两类。作为较好的固定液，首先有强渗透力，能迅速地渗入组织内部；其次不会使组织过渡收缩或膨胀，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不溶性物质；最后能使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的亲和力。
一、简单(单纯)固定液
1、甲醛(Formeldehyde)
甲醛(福尔马林)为一种无色气体，溶于水成为甲醛水溶液，甲醛是一种还原剂，极易挥发旦有强烈刺激性气味。在平时常用的甲醛浓度为10%，这是指以10ml甲醛加入90ml的水配成的，此液实际上只有4%的甲醛，习惯常用这浓度。
甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。但经乙醇脱水时收缩很大，它能使组织硬化并增加组织的弹性。固定厚度适当的组织，较为适宜。因早醛为非沉淀性固定剂，它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可与蛋白质化合，对脂肪，神经，及髓鞘的固定很好，也可固定高尔基体、线粒体，又是复糖的保存剂，使肝糖元变为微细的颗粒团。
使用甲醛固定的陈旧组织，以多血的赃器如脾、肝等，较易发生黑色或棕黑色的沉淀，称甲醛色素。
2、乙醇(Ethyl alcohol)
乙醇为无色液体，可以水在任何比例下混合。它是一种还原剂，很易被氧化为乙醛，在变为醋酸，所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。
用于固定时以80%-95%的浓度为好 ......
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