抗乙肝转移因子去病毒工艺新视点——超滤法去除猪细小病毒简便有效
本报北京讯 记者马艳红报道记者 日前从武汉海特生物制药股份有限公司获悉，该公司与武汉大学医学院联合开展的“去除抗乙肝转移因子中病毒”的工艺研究经过生产实践表明，超滤法是去除抗乙肝转移因子原液中猪细小病毒(PPV)的一种简便有效的去病毒工艺技术，而且用滤鹤榉值南喽苑肿恿孔魑橹こ?br>膜完整性的指标简单可靠。
随着生物制药技术的发展，许多动物组织和器官成为制药的原料。然而这些原料都存在安全性问题，主要是动物源性病毒对原材料的污染或潜在污染，以及在生产过程中其它病毒的污染。为了保证药品的安全性，在控制原材料质量的同时，研究生产过程中去除或灭活病毒工艺，对药品的安全性起着十分重要的作用。
据了解，由于各种制品原料来源不同，其生产工艺、理化性质及生物活性也不相同，因此，去除或灭活病毒的工艺也不相同。目前国内外常用的方法有巴氏德消毒法、干热法、有机溶剂或去污剂法(S/D法)、膜过滤法、低pH值孵育法、光化学法、辐照法和色谱法等。这些方法各有特点，而超滤法则是一种机械过滤法，操作简单，重现性好，在国外已经得到应用，但超滤法去除病毒工艺在我国还缺乏实验研究。
该公司技术部部长汤华东在北京接受记者采访时说，抗乙肝转移因子系从经乙型肝炎疫苗免疫的猪淋巴和脾脏中提取的生物活性物质，因此，有潜在污染猪源性病毒的可能，如PPV、伪狂犬病毒、口蹄疫病毒等。这些猪源性病毒对温度、pH值等因素敏感性不尽相同，其中PPV为ssDNA病毒，无包膜，直径20~23纳米，是这几种病毒中最小的病毒，也是目前已知的最小动物病毒之一，对热有一定耐受性。根据这几种病毒的大小及特征，他们利用美国Pall公司截留相对分子质量为5000的超滤膜，在进压0.14兆帕、回流压0.07兆帕和进压0.2兆帕、回流压0.1兆帕的条件下，对去除抗乙肝转移因子原液中具有代表性的直径为20～23纳米、耐热的PPV的效果和超滤膜的清洗方法、超滤膜的完整性检查方法进行了研究。结果表明，在抗乙肝转移因子原液中加入1/9体积病毒滴度为7.4LgTCID50/毫升的PPV，经超滤后，滤过液中未检测到PPV，经盲传3代，亦未发现特异性细胞病变。滤过液中各组分相对分子质量均小于10000，表明超滤膜完整。
研究证实，超滤法可有效去除PPV，且改变超滤压力及循环次数对结果无影响。由于PPV粒子小于其它病毒，因此在该条件下，超滤法理论上可以去除其它比PPV大的病毒。
该公司质保部部长欧阳怡还指出，超滤法去除病毒工艺中很重要的因素是滤膜完整性及膜残留病毒的清洗效果。研究中，用0.4摩尔/升的氢氧化钠溶液循环清洗超滤膜并使其保留10小时，可灭活残留在膜中的病毒；研究人员同时采用测定滤过液组分相对分子质量的方法验证了膜的完整性，3批供试品相对分子质量均小于5800，表明超滤膜完整，结果可靠。研究者对该公司56批样品进行回顾性验证，凡滤过液组分相对分子质量符合要求、超滤膜完整的产品，病毒检定结果均为阴性，表明用滤过液组分相对分子质量作为监测膜完整性的指标简单可靠。, http://www.100md.com
随着生物制药技术的发展，许多动物组织和器官成为制药的原料。然而这些原料都存在安全性问题，主要是动物源性病毒对原材料的污染或潜在污染，以及在生产过程中其它病毒的污染。为了保证药品的安全性，在控制原材料质量的同时，研究生产过程中去除或灭活病毒工艺，对药品的安全性起着十分重要的作用。
据了解，由于各种制品原料来源不同，其生产工艺、理化性质及生物活性也不相同，因此，去除或灭活病毒的工艺也不相同。目前国内外常用的方法有巴氏德消毒法、干热法、有机溶剂或去污剂法(S/D法)、膜过滤法、低pH值孵育法、光化学法、辐照法和色谱法等。这些方法各有特点，而超滤法则是一种机械过滤法，操作简单，重现性好，在国外已经得到应用，但超滤法去除病毒工艺在我国还缺乏实验研究。
该公司技术部部长汤华东在北京接受记者采访时说，抗乙肝转移因子系从经乙型肝炎疫苗免疫的猪淋巴和脾脏中提取的生物活性物质，因此，有潜在污染猪源性病毒的可能，如PPV、伪狂犬病毒、口蹄疫病毒等。这些猪源性病毒对温度、pH值等因素敏感性不尽相同，其中PPV为ssDNA病毒，无包膜，直径20~23纳米，是这几种病毒中最小的病毒，也是目前已知的最小动物病毒之一，对热有一定耐受性。根据这几种病毒的大小及特征，他们利用美国Pall公司截留相对分子质量为5000的超滤膜，在进压0.14兆帕、回流压0.07兆帕和进压0.2兆帕、回流压0.1兆帕的条件下，对去除抗乙肝转移因子原液中具有代表性的直径为20～23纳米、耐热的PPV的效果和超滤膜的清洗方法、超滤膜的完整性检查方法进行了研究。结果表明，在抗乙肝转移因子原液中加入1/9体积病毒滴度为7.4LgTCID50/毫升的PPV，经超滤后，滤过液中未检测到PPV，经盲传3代，亦未发现特异性细胞病变。滤过液中各组分相对分子质量均小于10000，表明超滤膜完整。
研究证实，超滤法可有效去除PPV，且改变超滤压力及循环次数对结果无影响。由于PPV粒子小于其它病毒，因此在该条件下，超滤法理论上可以去除其它比PPV大的病毒。
该公司质保部部长欧阳怡还指出，超滤法去除病毒工艺中很重要的因素是滤膜完整性及膜残留病毒的清洗效果。研究中，用0.4摩尔/升的氢氧化钠溶液循环清洗超滤膜并使其保留10小时，可灭活残留在膜中的病毒；研究人员同时采用测定滤过液组分相对分子质量的方法验证了膜的完整性，3批供试品相对分子质量均小于5800，表明超滤膜完整，结果可靠。研究者对该公司56批样品进行回顾性验证，凡滤过液组分相对分子质量符合要求、超滤膜完整的产品，病毒检定结果均为阴性，表明用滤过液组分相对分子质量作为监测膜完整性的指标简单可靠。, http://www.100md.com