人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建
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马巍. 刘淼. 杨广笑. 王全颖
hNGF基因.重组腺伴随病毒(rAAV).基因转移
参见附件(247kb)。
马巍. 刘淼. 杨广笑. 王全颖
西安交通大学第一医院骨科. 西安华广生物工程有限公司. 西安华广生物工程有限公司 陕西西安710061 .
【关键词】
hNGF基因. 重组腺伴随病毒(rAAV). 基因转移
【发表年期页】
2004,3; 226-228
【摘要】
目的为了研究人神经生长因子(hNGF)基因导入急性脊髓损伤(SCI)模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴随病毒(AAV)载体。方法将hNGF外源性核酸片段插入AAVshuffer质粒pSSHGNeo的KpnⅠBamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHGNeo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012PFU?mL-1。结论成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒(rAA
马巍. 刘淼. 杨广笑. 王全颖
西安交通大学第一医院骨科. 西安华广生物工程有限公司. 西安华广生物工程有限公司 陕西西安710061 .
【关键词】
hNGF基因. 重组腺伴随病毒(rAAV). 基因转移
【发表年期页】
2004,3; 226-228
【摘要】
目的为了研究人神经生长因子(hNGF)基因导入急性脊髓损伤(SCI)模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴随病毒(AAV)载体。方法将hNGF外源性核酸片段插入AAVshuffer质粒pSSHGNeo的KpnⅠBamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHGNeo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012PFU?mL-1。结论成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒(rAA
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