人脑源性神经营养因子重组腺伴随病毒的制备
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马东亮. 胡海涛. 王建明. 任惠民.
人脑源性神经营养因子.腺伴随病毒.磷酸钙共沉淀法.斑点杂交.
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马东亮. 胡海涛. 王建明. 任惠民. 刘勇. 杨广笑.
西安交通大学医学院人体解剖学教研室. 西安交通大学第二医院眼科. 西安华广生物工程公司 陕西西安710061 . 陕西西安710004 . 陕西西安710025.
【关键词】
人脑源性神经营养因子. 腺伴随病毒. 磷酸钙共沉淀法. 斑点杂交.
【发表年期页】
2003,5; 0
【摘要】
目的 构建并产生人脑源性神经营养因子(humanbrain derivedneurotrophicfactor ,hBDNF)重组腺伴随病毒(adeno associatedvirus,AAV)载体。方法 将目的基因hBDNF插入载体质粒pSSHG Neo的EcoRI BamHI位点,构建重组质粒pSSHG Neo/hBDNF。用腺病毒辅助质粒pFG14 0代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80 %融合的14 3细胞系,包装AAV hBDNF。经蔗糖梯度离心法纯化、斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果 重组病毒AAV hBDNF滴度约为4 .86×10 14 颗粒?L-1。结论 成功制备了重组病毒AAV hBDNF ,为神经退行性疾病基
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