人正常肾组织全长cDNA文库的构建及鉴定

http://www.100md.com 成瑜. 李旭. 陈葳. 赵乐. 杨玉琮

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     成瑜. 李旭. 陈葳. 赵乐. 杨玉琮

    西安交通大学第一医院医学实验中心. 西安交通大学第一医院医学实验中心 陕西西安710061 .

    【关键词】

    肾组织. cDNA文库. 全长

    【发表年期页】

    2004,3; 217-219

    【摘要】

    目的构建人正常肾组织的cDNA文库并鉴定文库质量。方法运用mRNA5′末端的模板转换方法以powerscript逆转录酶进行转录,在mRNA的5′末端添加一段5′oligo做为延伸后的模板,从而富集全长cDNAs。扩增后的cDNAs经sfiⅠ酶切、柱层析洗脱,重组于λTripIEx2载体并包装后,测定滴度、重组率,扩增文库。随机挑取8个噬菌斑行PCR反应扩增插入片段。结果构建的cDNA文库滴度为2.6×106pfu?mL-1,重组率95%,扩增后滴度达9×1011pfu?mL-1。8个插入片段长度为0.7～2.0kb。结论构建的人正常肾组织cDNA文库为高效全长的cDNA文库,符合cDNA文库的要求,可以用探针、抗体等做

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