银杏叶注射液的内毒素检查
【摘要】 目的 考察银杏叶注射液的细菌内毒素检查法的可行性并进行研究。方法 参考《中国药典》2000年版附录细菌内毒素检查法。结果 银杏叶注射液3倍稀释液用灵敏度0.5EU/ml鲎试剂做细菌内毒素检查。结论 用细菌内毒素检查法对银杏叶进行内毒素检查是可行的。
【关键词】 银杏叶注射液；细菌内毒素检查法；TAL
【Abstract】 Objective To investigate the feasibility of bacterial endotoxin test for yinxingye injection and to perform the test.Methods To refer to bacterial endotoxin test in appendix of china pharmacopoeia,edition 2000.Results Becterial endotoxin could be detected in 3 times dilution of yinxingye injection by limulus lysate with a sensitivity of 0.5EU/ml.Conclusion Bacterial endotoxin test for yinxingye injection is feasible.
【Key words】 yinxingye injection；bacterial endotoxin test;limulus lysate
银杏叶注射液主要含银杏叶提取物，可用于治疗脑血栓、脑血管痉挛、冠心病、心肌梗死，效果良好[1]。家兔法热源检查剂量按家兔体重5ml/kg注射，目前尚未见银杏叶注射液的细菌内毒素检查法的文献报道。由于细菌内毒素检查法具有简便、快捷、灵敏度高等特点，越来越多的药品品种原来规定的热源检查项，将逐渐被细菌内毒素检查项所取代。本实验对银杏注射液用细菌内毒素检查法替代家兔法的可行性进行研究，并对3个批号的药品进行检查。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 XW-80A型漩涡混合器，上海医科大学仪器厂；BHW-IV型电热恒温水浴锅，北京市医疗设备厂；其他一切所需材料均按药典实验要求准备。
1.1.2 药品与试剂 银杏叶注射液：本院制剂，批号：040814、040907、041010；鲎试剂(TAL)：湛江安度斯生物有限公司，批号：0303115；细菌内毒素工作标准，中国生物制品检定所，批号：20030702；细菌内毒素检查用水(BET水)，批号：040816。
1.2 方法与结果
1.2.1 细菌内毒素的限值(L)和最大有效稀释倍数(MVD)的计算[2]计算公式：L=K/M,MVD=L/λ；
注：K按给药途径细菌内毒素致热阈剂量，规定的K值为5.0EU/kg；M热原检查剂量；λ鲎试剂灵敏度标示值(EU/ml)。
银杏叶注射液每小时输入量120ml，按普通人60kg体重计算，则M=2ml/kg/h;L=K/M=5/2=2.5EU/ml;MVD=L/λ=5。
1.2.2 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2000年版2部细菌内毒素检查法复核灵敏度，结果根据公式：灵敏度测定值(λc)=lg-1(∑X/4),可计算出λc=0.421∈(0.5λ，2λ)，符合灵敏度要求。
1.2.3 干扰试验的预试验 本试验从原液开始考察，即以BET水将3批经热源检查合格的样品原液分别用BET水按1、2、3、4、5、6倍稀释，即得阴性对照系列(NPC)，阳性对照系列(PPC)。将各样品按NPC同样倍数稀释，使每一个稀释液都含有2λ标准内毒素。以上两个系列每稀释度做两管，λ=0.5EU/ml的TAL进行试验，结果3倍的稀释液对TAL未产生干扰作用。结果见表1。
1.2.4 供试品干扰试验 见银杏叶注射液3倍稀释液溶解内霉素工作标准，与鲎试剂进行凝胶化反应。结果见表2。
表1 干扰试验的预试验 略
表2 供试品干扰试验结果 略
根据公式 Es∈(0.5λc,2.0λc),3个批号的Et分别为0.595，0.421，0.595∈(0.5Es,2.0Es),银杏叶注射液3个批号在3倍稀释后均不干扰试验，可以用细菌内毒素检查法对供试品进行细菌内毒素检查。
1.2.5 银杏叶注射液的细菌内毒素检查法 按《中国药典》2000年版2部的细菌内毒素检查法在最大有效稀释倍数下检查。结果见表3。
表3 银杏叶注射液内毒素检查结果 略
3 讨论
细菌内毒素检查法放置时保温温度在25℃～41℃之间[3]，一般为37℃，随着温度的升高，TAL的灵敏度越高，延长保温时间也可提高TAL的灵敏度，增加假阳性。
鲎试剂灵敏实测值与标示值因生产厂家不同而可能产生差异，从而导致两种完全不同的检验结果[3]，试验时应注意对试验用鲎试剂的选择。
银杏叶注射液对TAL有干扰，但对供试品稀释3倍，选用0.5EU/ml的TAL对3批银杏叶注射液进行干扰试验，无抑制/增强作用。
内毒素复溶后应置漩涡混合器振荡15min，以后每稀释一步需混合30s，振摇不充分就直接进行试验，则内毒素效价比国际参考标准内毒素低50%～75%[3]。影响对照结果，误以为试验失败。
作者单位：1 530021 广西南宁，广西财经学院卫生所
2 530021 广西南宁，广西壮族自治区人民医院药剂科
(编辑：黄 杰), http://www.100md.com(陈小华 韦红英 潘江东)
【关键词】 银杏叶注射液；细菌内毒素检查法；TAL
【Abstract】 Objective To investigate the feasibility of bacterial endotoxin test for yinxingye injection and to perform the test.Methods To refer to bacterial endotoxin test in appendix of china pharmacopoeia,edition 2000.Results Becterial endotoxin could be detected in 3 times dilution of yinxingye injection by limulus lysate with a sensitivity of 0.5EU/ml.Conclusion Bacterial endotoxin test for yinxingye injection is feasible.
【Key words】 yinxingye injection；bacterial endotoxin test;limulus lysate
银杏叶注射液主要含银杏叶提取物，可用于治疗脑血栓、脑血管痉挛、冠心病、心肌梗死，效果良好[1]。家兔法热源检查剂量按家兔体重5ml/kg注射，目前尚未见银杏叶注射液的细菌内毒素检查法的文献报道。由于细菌内毒素检查法具有简便、快捷、灵敏度高等特点，越来越多的药品品种原来规定的热源检查项，将逐渐被细菌内毒素检查项所取代。本实验对银杏注射液用细菌内毒素检查法替代家兔法的可行性进行研究，并对3个批号的药品进行检查。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 XW-80A型漩涡混合器，上海医科大学仪器厂；BHW-IV型电热恒温水浴锅，北京市医疗设备厂；其他一切所需材料均按药典实验要求准备。
1.1.2 药品与试剂 银杏叶注射液：本院制剂，批号：040814、040907、041010；鲎试剂(TAL)：湛江安度斯生物有限公司，批号：0303115；细菌内毒素工作标准，中国生物制品检定所，批号：20030702；细菌内毒素检查用水(BET水)，批号：040816。
1.2 方法与结果
1.2.1 细菌内毒素的限值(L)和最大有效稀释倍数(MVD)的计算[2]计算公式：L=K/M,MVD=L/λ；
注：K按给药途径细菌内毒素致热阈剂量，规定的K值为5.0EU/kg；M热原检查剂量；λ鲎试剂灵敏度标示值(EU/ml)。
银杏叶注射液每小时输入量120ml，按普通人60kg体重计算，则M=2ml/kg/h;L=K/M=5/2=2.5EU/ml;MVD=L/λ=5。
1.2.2 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2000年版2部细菌内毒素检查法复核灵敏度，结果根据公式：灵敏度测定值(λc)=lg-1(∑X/4),可计算出λc=0.421∈(0.5λ，2λ)，符合灵敏度要求。
1.2.3 干扰试验的预试验 本试验从原液开始考察，即以BET水将3批经热源检查合格的样品原液分别用BET水按1、2、3、4、5、6倍稀释，即得阴性对照系列(NPC)，阳性对照系列(PPC)。将各样品按NPC同样倍数稀释，使每一个稀释液都含有2λ标准内毒素。以上两个系列每稀释度做两管，λ=0.5EU/ml的TAL进行试验，结果3倍的稀释液对TAL未产生干扰作用。结果见表1。
1.2.4 供试品干扰试验 见银杏叶注射液3倍稀释液溶解内霉素工作标准，与鲎试剂进行凝胶化反应。结果见表2。
表1 干扰试验的预试验 略
表2 供试品干扰试验结果 略
根据公式 Es∈(0.5λc,2.0λc),3个批号的Et分别为0.595，0.421，0.595∈(0.5Es,2.0Es),银杏叶注射液3个批号在3倍稀释后均不干扰试验，可以用细菌内毒素检查法对供试品进行细菌内毒素检查。
1.2.5 银杏叶注射液的细菌内毒素检查法 按《中国药典》2000年版2部的细菌内毒素检查法在最大有效稀释倍数下检查。结果见表3。
表3 银杏叶注射液内毒素检查结果 略
3 讨论
细菌内毒素检查法放置时保温温度在25℃～41℃之间[3]，一般为37℃，随着温度的升高，TAL的灵敏度越高，延长保温时间也可提高TAL的灵敏度，增加假阳性。
鲎试剂灵敏实测值与标示值因生产厂家不同而可能产生差异，从而导致两种完全不同的检验结果[3]，试验时应注意对试验用鲎试剂的选择。
银杏叶注射液对TAL有干扰，但对供试品稀释3倍，选用0.5EU/ml的TAL对3批银杏叶注射液进行干扰试验，无抑制/增强作用。
内毒素复溶后应置漩涡混合器振荡15min，以后每稀释一步需混合30s，振摇不充分就直接进行试验，则内毒素效价比国际参考标准内毒素低50%～75%[3]。影响对照结果，误以为试验失败。
作者单位：1 530021 广西南宁，广西财经学院卫生所
2 530021 广西南宁，广西壮族自治区人民医院药剂科
(编辑：黄 杰), http://www.100md.com(陈小华 韦红英 潘江东)