植入前遗传学诊断
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2005年11月4日
2.2PGD的诊断方法
2.2.1PCR技术在PGD的应用
PCR技术主要应用于单基因缺陷遗传病的诊断，如β-地中海贫血、血友病等，目前采用PCR进行PGD诊断有极体和卵裂球单个细胞分析两种方法。PCR技术能扩增样本中少量甚至痕迹量的DNA。因此吸取1—2个卵裂球细胞做遗传学检查首先就选择了PCR技术。1989年Handside取出单个卵裂球细胞，运用PCR技术成功扩增了Y染色体特异重复序列。在1990年Handside报道了用PCR技术对有高风险DMD(假性肥大型肌营养不良)患者的夫妇进行PGD后诞生的首例健康女婴。
尽管PCR在PGD中起了重要的作用，但PCR对单个细胞扩增失败率高。由于获得细胞数目极少，而致使对单个细胞只能作一次分析，不能重复实验结果。因此，许多的研究改变了PCR方法，用于控制扩增失败。如采用引物延伸预扩增技术(PEP)，以随机引物对单个细胞基因组进行全基因扩增，使对单个细胞进行多位点分析成为可能。
2.2.2荧光原位杂交(FISH)在PGD中的应用
荧光原泣杂交是用荧光标记的DNA探针与细胞核内或染色体中特定的DNA序列反应，用荧光显微镜可观察到诊断结果。FISH主要用于染色体疾病的诊断。目前可以用FISH对常见的非整倍体异常如X、Y、13，16，18，21号染色体作出诊断。而国内IVF助孕的患者中50%以上年龄超过35岁，因此应用FISH技术对卵细胞极体和卵裂球细胞PGD具有重要意义。因为此年龄组的妇女容易产生染色体异常的胎儿。FISH与PCR相比较有不会产生污染，能够检测染色体数目变异的优点。但也存在一定的局限性，如对45XO或YO，18单体核型的胚胎细胞，FISH诊断可能存在错误，出现这一结果时有两种可能，一是被检测的单个细胞就是单体核型的细胞；也可以是技术方法问题未能显示另一个杂交信号。
因此在临床PGD时应获取两个卵裂球细胞或足够量的极体进行遗传学诊断。
3 PGD后妊娠及新生儿情况
在近2年来PGD发展较快，并已有超过200多名经PGD后出生的新生儿。从已公布的文献分析，未发现PGD导致IVF的妊娠率明显下降。
Handside报道(Second Workshop on ART1999.11.24—28H.K)来自欧洲16个生殖医学中心的PGD323例IVF病人，PGD后妊娠率为25%，生产率为24%，新生儿平均出生体重2850g土740g，平均身长48.3土5.3cm，但由于临床PGD周期及临床PGD后出生的新生儿数有限，所以对PGD后妊娠率、新生儿出生缺陷及遗传病诊断的准确性都有待于积累更多的文献资料分析。
尽管PGD应用还仅仅局限在极少数遗传性疾病方面，但随着人类对遗传疾病致病基因的破译及诊断技术的改进，PGD在人类疾病预防及治疗上将发挥重要的作用。
本新闻共2页,当前在第2页 1 2, http://www.100md.com
2.2.1PCR技术在PGD的应用
PCR技术主要应用于单基因缺陷遗传病的诊断，如β-地中海贫血、血友病等，目前采用PCR进行PGD诊断有极体和卵裂球单个细胞分析两种方法。PCR技术能扩增样本中少量甚至痕迹量的DNA。因此吸取1—2个卵裂球细胞做遗传学检查首先就选择了PCR技术。1989年Handside取出单个卵裂球细胞，运用PCR技术成功扩增了Y染色体特异重复序列。在1990年Handside报道了用PCR技术对有高风险DMD(假性肥大型肌营养不良)患者的夫妇进行PGD后诞生的首例健康女婴。
尽管PCR在PGD中起了重要的作用，但PCR对单个细胞扩增失败率高。由于获得细胞数目极少，而致使对单个细胞只能作一次分析，不能重复实验结果。因此，许多的研究改变了PCR方法，用于控制扩增失败。如采用引物延伸预扩增技术(PEP)，以随机引物对单个细胞基因组进行全基因扩增，使对单个细胞进行多位点分析成为可能。
2.2.2荧光原位杂交(FISH)在PGD中的应用
荧光原泣杂交是用荧光标记的DNA探针与细胞核内或染色体中特定的DNA序列反应，用荧光显微镜可观察到诊断结果。FISH主要用于染色体疾病的诊断。目前可以用FISH对常见的非整倍体异常如X、Y、13，16，18，21号染色体作出诊断。而国内IVF助孕的患者中50%以上年龄超过35岁，因此应用FISH技术对卵细胞极体和卵裂球细胞PGD具有重要意义。因为此年龄组的妇女容易产生染色体异常的胎儿。FISH与PCR相比较有不会产生污染，能够检测染色体数目变异的优点。但也存在一定的局限性，如对45XO或YO，18单体核型的胚胎细胞，FISH诊断可能存在错误，出现这一结果时有两种可能，一是被检测的单个细胞就是单体核型的细胞；也可以是技术方法问题未能显示另一个杂交信号。
因此在临床PGD时应获取两个卵裂球细胞或足够量的极体进行遗传学诊断。
3 PGD后妊娠及新生儿情况
在近2年来PGD发展较快，并已有超过200多名经PGD后出生的新生儿。从已公布的文献分析，未发现PGD导致IVF的妊娠率明显下降。
Handside报道(Second Workshop on ART1999.11.24—28H.K)来自欧洲16个生殖医学中心的PGD323例IVF病人，PGD后妊娠率为25%，生产率为24%，新生儿平均出生体重2850g土740g，平均身长48.3土5.3cm，但由于临床PGD周期及临床PGD后出生的新生儿数有限，所以对PGD后妊娠率、新生儿出生缺陷及遗传病诊断的准确性都有待于积累更多的文献资料分析。
尽管PGD应用还仅仅局限在极少数遗传性疾病方面，但随着人类对遗传疾病致病基因的破译及诊断技术的改进，PGD在人类疾病预防及治疗上将发挥重要的作用。
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