卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)治疗不育67个周期分析
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2005年11月4日
摘要 目的：分析卵细胞浆内单精子显微注射授精(ICSI)治疗因少弱精及梗阻性无精症所致之不育症的临床效果。
方法：采用GnRH一α十FSH/hMG十HCG促排卵，对成熟卵细胞(MⅡ)进行显微注射授精。受精卵体外培养3天后移植回子宫腔。结果：67个周期获成熟卵(MⅡ)586个，受精率76.28%。临床妊娠率25.37%。结论：ICSI是治疗不育的有效方法。
常规体外受精一胚胎移植(1VF—ET)治疗少弱精梗性无精所致之不育疗效较差，结果常以成熟卵不能受精而失败.IC—SI技术的出现使对上述原因的不育的治疗成为可能。我院遗传与生殖研究所自1997年11月起开始采用ICSI技术治疗少弱精、梗阻性无精所致之不育症67个周期，现报道如下。
1资料和方法
1.1资料来源
, 百拇医药
1.1*1研究对象 1997年11月至2000年7月在我院遗传与生殖研究所采用ICSI治疗因男性因素的不孕患者67个周期，平均年龄为：男，34.12(24、50)岁，女30.58(22”49)岁。ICSI指征：(1)少、弱精患者；(2)阻塞性无精症；(3)双方染色体检查正常。少弱18和梗阻性无精症的诊断标准依据WHO不育夫妇标准检查与诊断手册，其中少弱精患者42个周期，梗阻性无精症25个周期。
1.1.2卵子准备
按本所控制性超排卵方案诱导卵泡生长C[1].当有两个直径18mm主导卵泡时，给hCGl0000IU(Profasi.Serono)36h后经阴道超声引导下取卵。卵子在体外培养4—6h(HTF培养液加10%HS)，在含80IU Hyaluronidase(Sigma，H3757)液中去除卵丘复合体，将出现第一极体的成熟卵移入Hepes加HTF培养液中备用。
1.1.3精子准备
, 百拇医药
对少弱精者采用Percoll梯度离心法处理精子.对梗阻性无精症者经睾丸手术穿刺取精，采用直接洗精孵育。处理后的精子置于5%的CO 2培养箱中备用。
1.1.4ICSI方法
采用Olympus Ⅸ一70倒置显微镜(DIC系统)和EPPendorf电动步进显微操作仪。显微固定针和注射针采用Cook IVF—K—HPIP—1035、K—MPIP—1035。显微注射前先在Falconl006培养皿中央加3个5μl PVP微滴(PVP Sigma5288)除中间PVP外，2侧PVP各加少许精于(10—20条/HP)。用HePes加HTF培养液在PVP微荫的上下各做4个5μl的微滴，加矿物油覆盖(Min-eral Oil，Sigma M8410)。将卵子移入培养Hepes加HTF培养液中。用显微注射针制动精子尾部，确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子，使第一极体位于6/12点时钟方位，吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸胞浆，见凹陷的卵膜有回弹现象时，说明已刺入胞浆内，即注射精子入胞浆内。退出显微注射针，并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入HTF加10%HS中洗涤5次后在37℃，5%的CO2培养箱中培养至胚胎移植。
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1.1.5检查受精和评签胚胎质量
显微注射授精16h后，检查有无雌雄原核或第二极体出现。受精卵继续培养至72h(中途不更换培养基)，技Brian Dale方法[2]评鉴胚胎质量。优质胚胎为1—2级胚胎即卵裂球大小相等、碎片少于1/3。当胚胎碎片超过50%，卵裂球大小相差明显时，该周期取消。
1.1.6胚胎移植和临床妊娠检查
胚胎移植以优质胚胎为主，移植时所用培养液条件与胚胎培养时相同。胚胎移植数目依据病人年龄、胚胎质量等而有所不同。38岁以上不孕患者移植胚胎数量不超过5个，其他不孕患者移植胚胎数量不超过4个。胚胎移植4周后，B超检查见胎心博动为临床妊娠。
1.1.7统计方法：结果采用x2检验，t检验P<0.05差别有显著性。
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方法：采用GnRH一α十FSH/hMG十HCG促排卵，对成熟卵细胞(MⅡ)进行显微注射授精。受精卵体外培养3天后移植回子宫腔。结果：67个周期获成熟卵(MⅡ)586个，受精率76.28%。临床妊娠率25.37%。结论：ICSI是治疗不育的有效方法。
常规体外受精一胚胎移植(1VF—ET)治疗少弱精梗性无精所致之不育疗效较差，结果常以成熟卵不能受精而失败.IC—SI技术的出现使对上述原因的不育的治疗成为可能。我院遗传与生殖研究所自1997年11月起开始采用ICSI技术治疗少弱精、梗阻性无精所致之不育症67个周期，现报道如下。
1资料和方法
1.1资料来源
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1.1*1研究对象 1997年11月至2000年7月在我院遗传与生殖研究所采用ICSI治疗因男性因素的不孕患者67个周期，平均年龄为：男，34.12(24、50)岁，女30.58(22”49)岁。ICSI指征：(1)少、弱精患者；(2)阻塞性无精症；(3)双方染色体检查正常。少弱18和梗阻性无精症的诊断标准依据WHO不育夫妇标准检查与诊断手册，其中少弱精患者42个周期，梗阻性无精症25个周期。
1.1.2卵子准备
按本所控制性超排卵方案诱导卵泡生长C[1].当有两个直径18mm主导卵泡时，给hCGl0000IU(Profasi.Serono)36h后经阴道超声引导下取卵。卵子在体外培养4—6h(HTF培养液加10%HS)，在含80IU Hyaluronidase(Sigma，H3757)液中去除卵丘复合体，将出现第一极体的成熟卵移入Hepes加HTF培养液中备用。
1.1.3精子准备
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对少弱精者采用Percoll梯度离心法处理精子.对梗阻性无精症者经睾丸手术穿刺取精，采用直接洗精孵育。处理后的精子置于5%的CO 2培养箱中备用。
1.1.4ICSI方法
采用Olympus Ⅸ一70倒置显微镜(DIC系统)和EPPendorf电动步进显微操作仪。显微固定针和注射针采用Cook IVF—K—HPIP—1035、K—MPIP—1035。显微注射前先在Falconl006培养皿中央加3个5μl PVP微滴(PVP Sigma5288)除中间PVP外，2侧PVP各加少许精于(10—20条/HP)。用HePes加HTF培养液在PVP微荫的上下各做4个5μl的微滴，加矿物油覆盖(Min-eral Oil，Sigma M8410)。将卵子移入培养Hepes加HTF培养液中。用显微注射针制动精子尾部，确认精子被制动后吸入精子。用显微固定针固定卵子，使第一极体位于6/12点时钟方位，吸入精子的显微注射针从3点时钟方位进入卵细胞浆内并回吸胞浆，见凹陷的卵膜有回弹现象时，说明已刺入胞浆内，即注射精子入胞浆内。退出显微注射针，并检查卵子形态是否正常。将已注射后的卵子移入HTF加10%HS中洗涤5次后在37℃，5%的CO2培养箱中培养至胚胎移植。
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1.1.5检查受精和评签胚胎质量
显微注射授精16h后，检查有无雌雄原核或第二极体出现。受精卵继续培养至72h(中途不更换培养基)，技Brian Dale方法[2]评鉴胚胎质量。优质胚胎为1—2级胚胎即卵裂球大小相等、碎片少于1/3。当胚胎碎片超过50%，卵裂球大小相差明显时，该周期取消。
1.1.6胚胎移植和临床妊娠检查
胚胎移植以优质胚胎为主，移植时所用培养液条件与胚胎培养时相同。胚胎移植数目依据病人年龄、胚胎质量等而有所不同。38岁以上不孕患者移植胚胎数量不超过5个，其他不孕患者移植胚胎数量不超过4个。胚胎移植4周后，B超检查见胎心博动为临床妊娠。
1.1.7统计方法：结果采用x2检验，t检验P<0.05差别有显著性。
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