缓激肽β2受体基因启动子区SSCP带型与新疆哈萨克族人原发性高血压的相关性分析
摘要： 目的：探讨缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位基因变异与新疆哈萨克族人原发性高血压的关系。方法：运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCRSSCP)方法，对118例收缩压≥150 mmHg和/或舒张压≥95 mmHg的哈萨克族原发性高血压病人和65例年龄、性别、族别、BMI相匹配的血压<135/85 mmHg的正常血压者，分别进行缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位基因多态性检测，观察不同SSCP带型在高血压病人组和正常血压对照组中的分布频率。结果：新疆哈萨克族人缓激肽β2受体基因启动子区存在A、B、C 3种带型，A、B、C带型在原发性高血压病人组和正常血压对照组的分布频率分别为0.28、0.37； 0.22、0.23； 0.50、0.40。3种带型的分布频率在两组间差异无统计学意义(χ2= 2.002，P =0.367)。结论：新疆哈萨克族人缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位存在有3种SSCP带型，提示该区域可能存在有基因变异，但该变异可能与哈萨克族人原发性高血压不相关。
关键词：高血压；缓激肽β2受体基因; 哈萨克族
The study for association of Genetic variants in the promoter region of the β2 bradykinin receptor gene and essential hypertension in Kazak of Xinjiang
WANG Yingchun，LI Nanfang, ZHOU Ling，et al
( Hypertension Unit，The People's Hospital of Xinjiang Uigur Autonomous Region,Urumqi 830001, China)
Abstract: Objective: To investigate the association between the genetic variants in the promoter region of bradykinin β2 receptor gene and the essential hypertension in Kazak of Xinjiang. Methods: This study selected 118 hypertensive patients(SBP≥150 mmHg and/or DBP≥95 mmHg)and 65 normotenive controls(BP<135/85 mmHg)matched with sex 、age、BMI from Kazak of Xinjiang. The measurement of the genetic variants was performed by PCRSSCP in hypertensive patients and normotensive controls respectively. Results: The A、B、C SSCP band patterns were detected in the experiment. The distributed frequencies of the A、B、C SSCP band patterns were 0.28、0.37； 0.22、0.23； 0.50、0.40 respectively in hypertensive group and normotensive group. There was no significant difference between the two groups (χ2= 2.002，P=0.367). Conclusion: In Kazak of Xinjiang, there are three different SSCP band patterns in the promoter 91 to 7 region of bradykinin β2 receptor gene. It suggest thats there exist variants in the promoter region of bradykinin β2 receptor gene， but the variants may not be associated with essential hypertension.
Key words: Hypertension; bradykininβ2 receptor gene; Kazak
激肽释放酶激肽系统(KKS)是与血压调节有着的重要关系的系统[1]，其中缓激肽是体内最强的血管舒张物质之一，主要通过直接扩张血管对抗血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素的缩血管作用,促进NO、PGI2等内源性舒血管物质的合成等而产生舒张血管作用，同时还具有强大的利尿钠效应，上述作用主要通过缓激肽β2受体介导。1996年Braun等[2]发现缓激肽β2受体启动子区91位至7位存在58T/C变异，并发现58C变异可引起的缓激肽β2受体基因转录效率下降，这可能与原发性高血压(EH)的发病有关。近年的关于58T/C变异与EH的相关性研究的报告表明，58T/C多态性与中国汉族人、日本人及美国黑人的EH相关[3~5]。新疆哈萨克民族是高血压的较高发民族，已有多项流行病学研究证明哈萨克族人的血压水平和高血压的患病率明显高于当地其他民族[6]。本研究以新疆哈萨克民族为研究对象，针对缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位，采用PCRSSCP方法对原发性高血压118例和正常血压者65例进行基因多态性检测，旨在探讨缓激肽β2受体基因变异与哈萨克民族EH之间的关系。
1资料与方法
1.1研究对象原发性高血压组118例,均为哈萨克族，其中男性43例,女性75例,年龄(48.19±7.19)岁,来自新疆塔城地区和丰县、阿勒泰地区福海县和伊犁地区新源县。参照1999WHO/ISH诊断标准：收缩压≥150 mmHg和/或舒张压≥95 mmHg,排除继发性高血压、糖尿病、心肌梗死、心肌病、肝肾疾病、过度饮酒及服避孕药史。正常对照组65例，男性24例，女性41例，年龄(49.72±8.07)岁，均为哈萨克族，来自同一地区血压正常人群(收缩压<135 mmHg且舒张压<85 mmHg),排除上述疾病。
1.2方法
1.2.1基因组DNA的提取用EDTA抗凝管取外周血1 ml,低渗溶血法破裂红细胞,采用经典的蛋白酶K消化,饱和酚氯仿抽提法提取白细胞DNA。
1.2.2聚和酶链反应(PCR) 采用PE9600扩增仪进行扩增反应。上游引物: 5′GCA GAG CTC AGC TGG AGG CG3′；下游引物: 5′CCT CCT CGG AGC CCA GAA G3′(由上海生工生物工程技术公司合成)。 PCR反应体积为50 μl,内含DNA模板0.2 μg,引物各0.24 pmol/L, MgCl2 2.0 mmoL/L,dNTP 150 μmol/L,TaqDNA聚合酶2 U。 反应条件：94℃预变性4 min,进入35循环：94℃变性1 min,62℃退火90 s,72℃延伸1 min,最后72℃延伸5 min。扩增产物用含EB的2%琼脂糖凝胶电泳观察结果。
1.2.3单链构象多态性分析取5 μl PCR产物加入15 μl变性液中,95℃变性5 min,在20%聚丙烯凝胶中,于2×TBE电泳缓冲液,室温,120 V电压下垂直电泳20 h，硝酸银染色鉴定，观察SSCP带型。
1.3统计学处理用SPSS10.0软件进行统计学分析,定量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，定性资料采用χ2检验，最大可信区间为95%。
2结果
2.1原发性高血压组与正常血压对照组的一般临床资料两组之间收缩压和舒张压有明显差别，其性别构成、年龄均数、体重指数(BMI)差异均无统计学意义。EH组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)较正常血压对照组高，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)较正常血压对照组低，甘油三酯(TG)两组之间差异无统计学意义(表1)。
表1两组一般临床资料比较(略)
2.2PCRSSCP结果使用上、下游引物扩增出目的基因片段122 bp，并在此基础上进行SSCP分析，共发现3种带型(图1)。
图1 缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位SSCP结果 略
2.3 SSCP带型在高血压和正常血压人群中的分布EH组和正常对照组中3种SSCP带型分布见表2。带型A、B、C在EH组和正常对照组的分布频率分别为0.28、0.37, 0.22、0.23, 0.50、0.40。组间比较差异无统计学意义(χ2=2.002，P = 0.367)(表2)。
表2两组缓激肽β2受体启动子区SSCP带型比较[略]
3讨论
缓激肽受体介导缓激肽的血管舒张、降低血压、减少平滑肌增殖等反应,并在炎性反应及组织修复中发挥重要作用。该受体属于7次跨膜G蛋白耦联的超家族受体,有β1 、β2 型，β1受体在生理状况下表达极少,只有在病理状况下如炎症、组织损伤时可诱导其表达,β2受体存在于人体绝大部分组织器官中，在肾的密度最高。缓激肽的作用主要通过β2受体介导。缓激肽β2受体基因位于14q32，1992年Hess等[7]成功克隆缓激肽β2受体基因cDNA，之后德国科学家Braun等[8]对其结构研究发现该基因3个外显子和1个启动子区中存在4种多态性位点，其中在对德国南部人群中的研究发现，位于启动子区转录起始点上游58 bp存在T→C置换，此位点变异可影响基因转录效率,58T等位基因转录效率较58C高[9]，提示58C变异引起的缓激肽β2受体基因转录效率下降可能参与了EH的发病机制。
医学科学院阜外医院Wang等[3]针对中国汉族高血压组106例和正常对照组98例进行基因对比分析时,发现该位点等位基因C、T在高血压病患者和健康人的分布频率分别为0.58、0.42和0.46、0.54，基因型CC、CT、TT的频率分别是0.28、0.59、0.13和0.17、0.58、0.25，两组人群的基因型和等位基因分布频率存在明显差异，高血压病患者组中CC基因型和C等位基因分布频率明显高于对照组。Mukae等[4]在日本调查中，分别对高血压和正常血压组各100名受试者进行了基因多态性分析，发现启动子区58等位基因C、T频率高血压者分别是0.575和0.425，正常血压者为0.465和0.535，基因型CC、CT、TT的频率在高血压组和正常血压组分别为0.28、0.59、0.13和0.18、0.57、0.25，两组间各基因型和等位基因频率差异均有统计学意义。Gainer等[5]关于黑人的研究中，调查了正常血压者120例和高血压者77例，58C基因频率分别是0.62和0.75，高血压组C等位基因频率明显高于正常血压组。上述研究结果均支持缓激肽β2受体基因58T/C突变与EH的发病有关。
多项流行病学研究资料表明，哈萨克族是新疆各少数民族中高血压患病率较高的民族[10~13],并且其血压水平与摄盐量有关。缓激肽β2受体是KKS中与水盐平衡、血压水平有着主要关系的关键性物质。本研究结果显示，在哈萨克族人群中缓激肽β2受体启动子区存在3种SSCP构象，说明该区域可能存在有基因变异，但此3种SSCP带型的分布在EH组和正常对照组间差异无统计学意义(χ2=2.002，P=0.367)，表明缓激肽β2受体启动子区的SSCP构象多态可能与哈萨克族EH不相关，尚有待于进一步扩大样本量进行深入的研究。此外本研究在据血压水平分组后发现EH组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)较正常血压对照组高，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)较正常血压对照组低，此提示血脂代谢异常可能是与哈萨克族EH的发生具有一定的内在联系的重要中间表型，但因本研究主要探讨基因变异与哈萨克族EH的关系，故未做进一步研究。
参考文献：
[1]Sharma JN， Uma K，Noor AR，et al. Blood pressure regulation by the kallinkreinkinin system[J].Gen Pharmacol,1996,27(1):5563.
[2]Braun A, Maier S, Kammerer S, et al. A novel sequence polymorphism in the promoter region of the human β2 bradykinin receptor gene[J]. Hum Genet,1996,97:688689.
[3]Wang B, Liu GZ, Dang AM. Genetic variation in the promoter region of theβ2 bradykinin receptor gene is associated with essencial hypertension in a Chinese Han population[J]. Zhong Hua Xin Xue Guan Za Zhi, 2001,29(4):203205.
[4]Mukae S, Aoki S, Itoh S, et al. Promoter polymorphisim of the 2 bradykinin receptor geng is associated with essential hypertension[J]. Jpn Circ J,1999,63(10):759762.
[5]Gainer JV, Brown NJ, Bachvarova M, et al. Altered frequency of a promoter polymorphism of the kinin β2 receptor gene in hypertensive AfrecanAmericans[J]. Am J Hyperten,2000,13(12):12681273.
[6]Wu YK, Liu CQ, Gao RQ, et al. Nationwide hypertension screening in China during 1979～1980[J]. Chin Med J,1982,95(2):101108.
[7]Hess JF, Borkowski JA, Young GS, et al. Cloning and pharmacological characterization of a human bradykinin receptor[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1992,184(1):260268.
[8]Braun A, Kammerer S, Bohme E, et al. Identification of polymorphism sites of the human bradykinin B2 receptor gene[J]. Biochem Biophys Res Commun,1995,211(1):234240.
[9]Braun A, Kammerer S, Maier E, et al. Polymorphisms in the gene for the human β2bradykinin receptor.new tool in assessing a genetic risk for bradykininassociated diseases[J]. Immunopharmacology,1996,33(13):3235.
[10]李南方，周玲，曹梅,等. 新疆和丰县牧区高血压病流行病学调查报告[J]. 现代预防医学,2003, 30(2):141143.
[11]何秉贤,朱徐,黄定,等. 新疆汉、维吾尔、哈萨克三民族高血压流行病学调查[J].新疆医学, 1992,22(4):194200.
[12]张明涛,陈平虎. 汉、哈两族农民中高血压患病情况及血压值比较分析[J].中华流行病学杂志，1984,5(1):2931.
[13]程祖亨，汪师贞. 新疆维吾尔自治区不同民族高血压流行病学因素的调查研究[J].新疆医学院学报,1982,5(2):103114.
基金项目:国家自然科学基金(30260038、30240045)
新疆维吾尔自治区高血压研究所，新疆维吾尔自治区人民医院高血压科, 新疆乌鲁木齐830001, http://www.100md.com(汪迎春 李南方 周玲 李涛 周克明 任荣)
关键词：高血压；缓激肽β2受体基因; 哈萨克族
The study for association of Genetic variants in the promoter region of the β2 bradykinin receptor gene and essential hypertension in Kazak of Xinjiang
WANG Yingchun，LI Nanfang, ZHOU Ling，et al
( Hypertension Unit，The People's Hospital of Xinjiang Uigur Autonomous Region,Urumqi 830001, China)
Abstract: Objective: To investigate the association between the genetic variants in the promoter region of bradykinin β2 receptor gene and the essential hypertension in Kazak of Xinjiang. Methods: This study selected 118 hypertensive patients(SBP≥150 mmHg and/or DBP≥95 mmHg)and 65 normotenive controls(BP<135/85 mmHg)matched with sex 、age、BMI from Kazak of Xinjiang. The measurement of the genetic variants was performed by PCRSSCP in hypertensive patients and normotensive controls respectively. Results: The A、B、C SSCP band patterns were detected in the experiment. The distributed frequencies of the A、B、C SSCP band patterns were 0.28、0.37； 0.22、0.23； 0.50、0.40 respectively in hypertensive group and normotensive group. There was no significant difference between the two groups (χ2= 2.002，P=0.367). Conclusion: In Kazak of Xinjiang, there are three different SSCP band patterns in the promoter 91 to 7 region of bradykinin β2 receptor gene. It suggest thats there exist variants in the promoter region of bradykinin β2 receptor gene， but the variants may not be associated with essential hypertension.
Key words: Hypertension; bradykininβ2 receptor gene; Kazak
激肽释放酶激肽系统(KKS)是与血压调节有着的重要关系的系统[1]，其中缓激肽是体内最强的血管舒张物质之一，主要通过直接扩张血管对抗血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素的缩血管作用,促进NO、PGI2等内源性舒血管物质的合成等而产生舒张血管作用，同时还具有强大的利尿钠效应，上述作用主要通过缓激肽β2受体介导。1996年Braun等[2]发现缓激肽β2受体启动子区91位至7位存在58T/C变异，并发现58C变异可引起的缓激肽β2受体基因转录效率下降，这可能与原发性高血压(EH)的发病有关。近年的关于58T/C变异与EH的相关性研究的报告表明，58T/C多态性与中国汉族人、日本人及美国黑人的EH相关[3~5]。新疆哈萨克民族是高血压的较高发民族，已有多项流行病学研究证明哈萨克族人的血压水平和高血压的患病率明显高于当地其他民族[6]。本研究以新疆哈萨克民族为研究对象，针对缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位，采用PCRSSCP方法对原发性高血压118例和正常血压者65例进行基因多态性检测，旨在探讨缓激肽β2受体基因变异与哈萨克民族EH之间的关系。
1资料与方法
1.1研究对象原发性高血压组118例,均为哈萨克族，其中男性43例,女性75例,年龄(48.19±7.19)岁,来自新疆塔城地区和丰县、阿勒泰地区福海县和伊犁地区新源县。参照1999WHO/ISH诊断标准：收缩压≥150 mmHg和/或舒张压≥95 mmHg,排除继发性高血压、糖尿病、心肌梗死、心肌病、肝肾疾病、过度饮酒及服避孕药史。正常对照组65例，男性24例，女性41例，年龄(49.72±8.07)岁，均为哈萨克族，来自同一地区血压正常人群(收缩压<135 mmHg且舒张压<85 mmHg),排除上述疾病。
1.2方法
1.2.1基因组DNA的提取用EDTA抗凝管取外周血1 ml,低渗溶血法破裂红细胞,采用经典的蛋白酶K消化,饱和酚氯仿抽提法提取白细胞DNA。
1.2.2聚和酶链反应(PCR) 采用PE9600扩增仪进行扩增反应。上游引物: 5′GCA GAG CTC AGC TGG AGG CG3′；下游引物: 5′CCT CCT CGG AGC CCA GAA G3′(由上海生工生物工程技术公司合成)。 PCR反应体积为50 μl,内含DNA模板0.2 μg,引物各0.24 pmol/L, MgCl2 2.0 mmoL/L,dNTP 150 μmol/L,TaqDNA聚合酶2 U。 反应条件：94℃预变性4 min,进入35循环：94℃变性1 min,62℃退火90 s,72℃延伸1 min,最后72℃延伸5 min。扩增产物用含EB的2%琼脂糖凝胶电泳观察结果。
1.2.3单链构象多态性分析取5 μl PCR产物加入15 μl变性液中,95℃变性5 min,在20%聚丙烯凝胶中,于2×TBE电泳缓冲液,室温,120 V电压下垂直电泳20 h，硝酸银染色鉴定，观察SSCP带型。
1.3统计学处理用SPSS10.0软件进行统计学分析,定量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，定性资料采用χ2检验，最大可信区间为95%。
2结果
2.1原发性高血压组与正常血压对照组的一般临床资料两组之间收缩压和舒张压有明显差别，其性别构成、年龄均数、体重指数(BMI)差异均无统计学意义。EH组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)较正常血压对照组高，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)较正常血压对照组低，甘油三酯(TG)两组之间差异无统计学意义(表1)。
表1两组一般临床资料比较(略)
2.2PCRSSCP结果使用上、下游引物扩增出目的基因片段122 bp，并在此基础上进行SSCP分析，共发现3种带型(图1)。
图1 缓激肽β2受体基因启动子区91位至7位SSCP结果 略
2.3 SSCP带型在高血压和正常血压人群中的分布EH组和正常对照组中3种SSCP带型分布见表2。带型A、B、C在EH组和正常对照组的分布频率分别为0.28、0.37, 0.22、0.23, 0.50、0.40。组间比较差异无统计学意义(χ2=2.002，P = 0.367)(表2)。
表2两组缓激肽β2受体启动子区SSCP带型比较[略]
3讨论
缓激肽受体介导缓激肽的血管舒张、降低血压、减少平滑肌增殖等反应,并在炎性反应及组织修复中发挥重要作用。该受体属于7次跨膜G蛋白耦联的超家族受体,有β1 、β2 型，β1受体在生理状况下表达极少,只有在病理状况下如炎症、组织损伤时可诱导其表达,β2受体存在于人体绝大部分组织器官中，在肾的密度最高。缓激肽的作用主要通过β2受体介导。缓激肽β2受体基因位于14q32，1992年Hess等[7]成功克隆缓激肽β2受体基因cDNA，之后德国科学家Braun等[8]对其结构研究发现该基因3个外显子和1个启动子区中存在4种多态性位点，其中在对德国南部人群中的研究发现，位于启动子区转录起始点上游58 bp存在T→C置换，此位点变异可影响基因转录效率,58T等位基因转录效率较58C高[9]，提示58C变异引起的缓激肽β2受体基因转录效率下降可能参与了EH的发病机制。
医学科学院阜外医院Wang等[3]针对中国汉族高血压组106例和正常对照组98例进行基因对比分析时,发现该位点等位基因C、T在高血压病患者和健康人的分布频率分别为0.58、0.42和0.46、0.54，基因型CC、CT、TT的频率分别是0.28、0.59、0.13和0.17、0.58、0.25，两组人群的基因型和等位基因分布频率存在明显差异，高血压病患者组中CC基因型和C等位基因分布频率明显高于对照组。Mukae等[4]在日本调查中，分别对高血压和正常血压组各100名受试者进行了基因多态性分析，发现启动子区58等位基因C、T频率高血压者分别是0.575和0.425，正常血压者为0.465和0.535，基因型CC、CT、TT的频率在高血压组和正常血压组分别为0.28、0.59、0.13和0.18、0.57、0.25，两组间各基因型和等位基因频率差异均有统计学意义。Gainer等[5]关于黑人的研究中，调查了正常血压者120例和高血压者77例，58C基因频率分别是0.62和0.75，高血压组C等位基因频率明显高于正常血压组。上述研究结果均支持缓激肽β2受体基因58T/C突变与EH的发病有关。
多项流行病学研究资料表明，哈萨克族是新疆各少数民族中高血压患病率较高的民族[10~13],并且其血压水平与摄盐量有关。缓激肽β2受体是KKS中与水盐平衡、血压水平有着主要关系的关键性物质。本研究结果显示，在哈萨克族人群中缓激肽β2受体启动子区存在3种SSCP构象，说明该区域可能存在有基因变异，但此3种SSCP带型的分布在EH组和正常对照组间差异无统计学意义(χ2=2.002，P=0.367)，表明缓激肽β2受体启动子区的SSCP构象多态可能与哈萨克族EH不相关，尚有待于进一步扩大样本量进行深入的研究。此外本研究在据血压水平分组后发现EH组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)较正常血压对照组高，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)较正常血压对照组低，此提示血脂代谢异常可能是与哈萨克族EH的发生具有一定的内在联系的重要中间表型，但因本研究主要探讨基因变异与哈萨克族EH的关系，故未做进一步研究。
参考文献：
[1]Sharma JN， Uma K，Noor AR，et al. Blood pressure regulation by the kallinkreinkinin system[J].Gen Pharmacol,1996,27(1):5563.
[2]Braun A, Maier S, Kammerer S, et al. A novel sequence polymorphism in the promoter region of the human β2 bradykinin receptor gene[J]. Hum Genet,1996,97:688689.
[3]Wang B, Liu GZ, Dang AM. Genetic variation in the promoter region of theβ2 bradykinin receptor gene is associated with essencial hypertension in a Chinese Han population[J]. Zhong Hua Xin Xue Guan Za Zhi, 2001,29(4):203205.
[4]Mukae S, Aoki S, Itoh S, et al. Promoter polymorphisim of the 2 bradykinin receptor geng is associated with essential hypertension[J]. Jpn Circ J,1999,63(10):759762.
[5]Gainer JV, Brown NJ, Bachvarova M, et al. Altered frequency of a promoter polymorphism of the kinin β2 receptor gene in hypertensive AfrecanAmericans[J]. Am J Hyperten,2000,13(12):12681273.
[6]Wu YK, Liu CQ, Gao RQ, et al. Nationwide hypertension screening in China during 1979～1980[J]. Chin Med J,1982,95(2):101108.
[7]Hess JF, Borkowski JA, Young GS, et al. Cloning and pharmacological characterization of a human bradykinin receptor[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1992,184(1):260268.
[8]Braun A, Kammerer S, Bohme E, et al. Identification of polymorphism sites of the human bradykinin B2 receptor gene[J]. Biochem Biophys Res Commun,1995,211(1):234240.
[9]Braun A, Kammerer S, Maier E, et al. Polymorphisms in the gene for the human β2bradykinin receptor.new tool in assessing a genetic risk for bradykininassociated diseases[J]. Immunopharmacology,1996,33(13):3235.
[10]李南方，周玲，曹梅,等. 新疆和丰县牧区高血压病流行病学调查报告[J]. 现代预防医学,2003, 30(2):141143.
[11]何秉贤,朱徐,黄定,等. 新疆汉、维吾尔、哈萨克三民族高血压流行病学调查[J].新疆医学, 1992,22(4):194200.
[12]张明涛,陈平虎. 汉、哈两族农民中高血压患病情况及血压值比较分析[J].中华流行病学杂志，1984,5(1):2931.
[13]程祖亨，汪师贞. 新疆维吾尔自治区不同民族高血压流行病学因素的调查研究[J].新疆医学院学报,1982,5(2):103114.
基金项目:国家自然科学基金(30260038、30240045)
新疆维吾尔自治区高血压研究所，新疆维吾尔自治区人民医院高血压科, 新疆乌鲁木齐830001, http://www.100md.com(汪迎春 李南方 周玲 李涛 周克明 任荣)