第32 卷

    2004 年7 月

    分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第7 期

    841～846

    研究报告

    顺序注射可更新表面固相荧光免疫法

    测定人血清中免疫球蛋白G

    朱海霖 陈恒武

    3

    周永列

    (浙江大学化学系微分析系统研究所,杭州310028) (浙江省人民医院临床检验中心,杭州310014)

    摘 要 建立了采用芯片式微型流通池的测定人血清中免疫球蛋白G( IgG) 的顺序注射可更新表面非均相荧

    光免疫分析法。将羊抗人IgG抗体固定于包被有蛋白A 的Sepharose CL24B 凝胶微珠,然后制备成固相抗体。

    用标记FITC 的抗人IgG抗体作为第二抗体。固相抗体、血清试样和荧光标记第二抗体由顺序注射系统注入

    芯片式微型流通池,并在其中进行免疫反应生成夹心式抗体2抗原荧光复合物。荧光分光光度计通过光纤与

    流通池耦合测定截留于流通池中的抗体2抗原复合物荧光强度。一次测定完成后,微珠即被排出流通池。流

    通池经缓冲液清洗后即可进行下一次测定。体系经优化后,检出限为0. 1 mg/ L IgG, 分析速率达到11 次/ h。

    3. 9 mg/ L IgG的日内和日间精密度(RSD) 分别为1. 7 % 和5. 2 %;校正曲线的线性范围为0. 3～7. 0 mg/ L

    IgG。所建立的方法已成功地应用于人血清中IgG的测定。

    关键词 顺序注射可更新表面,免疫分析,荧光分析法,免疫球蛋白G

    2003207224 收稿;2004202212 接受

    本文系国家自然科学基金资助项目(No. 20299030)

    1 引 言

    人体血清中IgG含量的测定是临床诊断中一项重要的指标。IgG的测定方法有免疫浊度法1 和非

    均相酶免疫分析法2 。但这些方法需要繁琐的加样、温育和洗涤等步骤,手工操作耗时长且精密度差。

    文献3 ,4 报道将流动注射(FI) 和非均相免疫分析法结合,简化操作步骤,提高分析速度。但在FI 系统

    中,一次测定后免疫反应柱的再生需消耗大量时间,分析速度难以大幅度提高,而且固相抗体多次使用

    后,其免疫反应活性降低,影响测定的重现性。

    为了克服流动注射非均相免疫分析法的上述缺点,Pollema 等5 ,6 首创了固相抗体一次性使用的顺 ......