偶氮羧Ⅰ2铽( Ⅲ)配合物与蛋白质

    相互作用的吸光光谱行为的研究及应用

    魏 琴

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    李 燕 于海琴 李乐义 杜 斌

    (济南大学化学化工学院, 济南250022 )

    摘 要 研究了偶氮羧Ⅰ2铽( Ⅲ) 与蛋白质的相互作用及其应用。在pH 1. 20的HCl2KCl缓冲溶液中,蛋白

    质的加入使得偶氮羧Ⅰ2铽( Ⅲ) 在510 nm 处的吸收峰峰值明显降低,且吸光度的变化与加入的蛋白质的浓

    度呈线性关系,于510 nm处测得摩尔吸光系数为ε= 7. 75 ×105L / (mol·cm) - 1 ,牛血清白蛋白在0～55 mg/L

    范围内符合朗伯2比尔定律。将此方法用于尿样和奶粉中蛋白质的测定,结果令人满意。

    关键词 蛋白质,偶氮羧Ⅰ2铽( Ⅲ) ,光谱探针,吸光光度法

    2004208226收稿; 2005201230接受

    本文系国家自然科学基金(No. 50373017) 、山东省自然科学基金(No. Y2004B11)和山东省教育厅科技计划项目(No. 03C5)及济南大

    学博士重点基金(No. B0405)

    1 引 言

    1983年, Fujita等[ 1 ]提出利用金属离子2染料络合物测定蛋白质。该法在灵敏度、选择性方面都优

    于染料探针法,特别是蛋白质检测量差异较小,而受到人们关注。因此,建立一种简便、快速、经济、灵敏

    度高的利用吸光光度法定量测定蛋白质的新方法是很有意义的。

    偶氮羧类、偶氮氯膦类和偶氮胂类试剂均属于变色酸类偶氮染料。有关资料显示,偶氮羧类显色剂

    主要用于金属离子的定量测定,偶氮羧类试剂2金属离子络合物光谱探针未见报道。本实验选用偶氮羧

    Ⅰ和铽( Ⅲ)形成的络合物作为光谱探针,建立了一种高灵敏的测定蛋白质的新方法,该方法的灵敏度

    高于公认的考马斯亮蓝法[ 2 ] ,比偶氮羧Ⅰ[ 3 ]直接作为光谱探针的方法高出370 %。将该光谱探针应用

    于尿样、奶粉中蛋白质的定量测定,取得了满意结果。

    2 实验部分

    2. 1 仪器和试剂

    UV3010型紫外可见分光光度计(日本岛津公司) ; PHS23B 型酸度计(上海精密科学仪器有限公

    司) 。血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白(HSA) 、卵蛋白(OVA) ( Sigma公司) ,其他试剂均为分析纯,所

    图1 吸收光谱(对二次水) ......