氨基纳米磁球免疫电化学法检测甲胎蛋白的研究

    程 琼

    3 1, 2 彭图治

    1

    刘爱丽1 何 亮3

    1 ( 浙江大学西溪校区化学系,杭州310028) 2 ( 嘉兴学院生物与化学工程学院,嘉兴314001)

    3 ( 杭州埃夫朗生物技术有限公司,杭州310014)

    摘 要 提出了一种利用纳米磁球免疫分离,进行酶催化电化学检测甲胎蛋白的新方法。在自制含有活性氨

    基的纳米磁球表面,用戊二醛固化甲胎蛋白(AFP)抗体,利用免疫夹心反应原理,捕获溶液中的AFP抗原和

    标记有辣根过氧化物酶的AFP抗体。在外加磁场的作用下,抗体- 抗原结合物从样品溶液中分离,在含有邻

    氨基苯酚和过氧化氢的底液中,生成具有电活性的化合物32氨基吩呃嗪,用灵敏的示差脉冲伏安法测定。响

    应电流与AFP抗原浓度分别在1～5和5～400μg/L范围内呈线性关系, 检出限达0. 5μg/L。实验表明,该

    方法具有分离效率高、测定时间短、抗干扰性强等优点,尤其适用于分析复杂生物样品。应用此法于人血清样

    品中AFP的检测,灵敏度显著高于酶联免疫吸附法。

    关键词 氨基纳米磁球,免疫分析,甲胎蛋白,电化学检测,磁分离

    2004210210收稿; 2005202202接受

    本文系国家自然科学基金( No. 29975024, 20275034) 、浙江省分析测试基金(No. 04062)和浙江省重点科技计划项目(No. 2003C21024)

    资助项目

    1 引 言

    免疫分析是利用生物分子高度选择性建立起来的测试方法,已广泛用于临床疾病的诊断和生物分

    子的检测。目前已有的免疫分析方法有放射免疫法(R IA) 、酶联免疫法(E IA) 、化学发光免疫法(L IA) 、荧光免疫法( F IA)和金属离子免疫法(M IA)等。放射免疫法成本低、灵敏度高,但由于半衰期短,试剂

    盒不宜储存和核废物处理等一系列问题,使其应用受到限制。无需同位素标记的酶免疫分析方法,具有

    极高的灵敏度,是目前最常用的方法之一,但这种利用比色法的检测技术所受的干扰因素很多,抗原2抗

    体复合物与过量抗体的分离也是一个耗时费力的过程。

    磁性功能微球经过生物修饰,可以使样品中的痕量组分最大限度地富集起来。利用磁响应性进行

    分离,实现分离与富集同步进行,其分离效率远优越于常规分析方法,而且操作简便,不需要昂贵的仪 ......