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编号:10795420
抗纤灵冲剂对大鼠体外肾系膜细胞增殖及分泌ECM影响的研究
http://www.100md.com 《中华现代临床医学杂志》 2005年第17期
细胞增殖,1材料与方法,2结果,3讨论
     我们以前的研究证明,中医抗纤灵冲剂对慢性肾功能衰竭(CRF)[1]患者及实验性慢性CRF大鼠肾脏功能和结构损害有明显的改善作用[2],但作用机制尚不清楚,近年来研究表明,肾系膜细胞(MC)、细胞外基质(ECM)及各种细胞因子、生长因子在肾功能进行性减退过程中起着重要作用[3]。本研究采用血清药理学方法和MC体外培养技术,观察了抗纤灵冲剂对大鼠肾系膜细胞增殖和ECM的主要成分纤维联结蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)的影响,并与西医血管紧张素转换酶抑制剂蒙诺做对照,以期从细胞水平探讨抗纤灵冲剂防治CRF的作用机制,发展中医药防治CRF的理论认识,为进一步提高CRF的中医药诊治水平提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 抗纤灵冲剂(KXL)由丹参、大黄、牛膝、桃仁、当归组成,由上海中医药大学附属曙光医院提供,每袋含生药9g;肾组织来源为上海必凯实验动物中心提供的SD大鼠的肾组织,体重为(150±20)g,大鼠肾小球系膜细胞株由长征医院肾科提供(第54代)。对照西药为血管紧张素转换酶抑制剂蒙诺(福辛普利),每粒10mg,由上海中美施贵宝公司提供。定量测定人血清Ⅳ型胶原试剂盒,由中美合资上海华泰生物工程有限公司提供。FM免疫比浊法定量试剂盒:由上海玉兰生物技术研究所提供。培养条件:37℃、5%CO2。RPMI-1640培养基为美国GIBCO产品。胎牛血清(FCS)由上海第二医科大学提供,56℃水浴30min灭活分装,于-20℃冰箱保存备用。

    1.2 实验方法

    1.2.1 动物分组 SD雄性大鼠56只,每组8只,用Platt法5/6肾切除做大鼠慢性肾衰模型,分两期完成,先背部切口切除左肾2/3,1周后切除整个右肾。假手术组仅背部切口分两次剥离左右肾包膜,保留肾上腺,根据手术后2周所测血肌酐值分组,造模组及治疗组大鼠经统计学处理,使分组后各组血肌酐、尿素氮值无明显差异。分为7组,假手术组(A);假手术加抗纤灵组(B);模型组(C);西药蒙诺对照组(D);抗纤灵组(E)、丹参组(F)、大黄组(G),A、C组用自来水灌胃3ml/d,B、D、E、F、G组按成人常规用量的20倍给药,3ml/d灌胃,实验共进行30天,在最后一次灌胃2h后腹腔静脉无菌采血6ml ......

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