【摘要】 目的 探讨重组双功能水蛭素是对野生型水蛭素分子进行结构改造后形成的新型分子。 方法 将Arg-Gly-Asp(RGD)三肽序列引入分子的合理部位，使这种水蛭素衍生物在保留抗凝活性的同时，又增加了抗血小板聚集的活性。我们已用实验证明这种双功能水蛭素比野生型分子有更强的防栓作用，用于血管吻合术后的抗凝、防栓治疗安全有效，剂量低于野生型水蛭素。 结果 本实验室研制的注射用重组双功能水蛭素经HPLC纯度分析，发现其主峰后有一小峰。通常毕赤酵母在发酵过程中，分泌羧肽酶，可水解蛋白质C末端氨基酸，使表达产物不均一。我们用分子筛层析和离子交换层析无法将两个峰分开，进一步通过LC/MS分析，主峰成分的分子量为7030Dalton，后面小峰成分的分子量为7180Dalton，两者之差为150Dalton左右。符合我们设计的原性分子的C末端谷氨酸的分子量。同时，我们通过HPLC分离得到两峰组分，分别测定了两峰组分的抗凝血酶比活性和抗血小板聚集比活性，两者几乎没有差别，都符合质量标准。 结论 由此证明重组双功能水蛭素cDNA基因表达产物在发酵过程中C末端谷氨酸被毕赤酵母羧肽酶水解、脱落，但C末端谷氨酸对双功能水蛭素的活性几乎没有影响;同时也证明两峰组分均可为表达产物，小峰并非杂质。

    【关键词】 重组双功能水蛭素;羧肽酶;降解作用

    The C terminal of recombinant RGD-hirudin was hydrolyzed by yeast car-boxypeptidase

    ZHANGYan-ling，MO Wei，YANG Xin-ying，et al.

    The Key Laboratory of Molecular Medicine，Ministry of Edu-cation，Fudan University，Shanghai200032，China

    【Abstract】 Objective Based on the research of structure and function of wt-hirudin，RGD-hirudin was de-signed and made by recombinant DNA technique.Methods The clone encoding r-RGD-hirudin was constracted and highly expressed by Pichia pastoris.R-RGD-hirudin is a specific thrombin inhibitor and platelet aggregation inhibitor.Pharmacodynamics showed that the dosage of r-RGD-hirudin for prevention of thrombosis was decreased2-3times of wt-Hirudin.HPLC showed r-RGD-Hirudin included two parts ......