复方生物黄酮的大鼠30天喂养实验研究
【摘要】 目的 研究服用复方生物黄酮(圣安泰牌百力康片)可能对人体造成的潜在危害。 方法 我们对该产品进行了大鼠30天喂养实验。 结果 在动物的体重、食物(饲料)利用率、血液学检查(红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数及分类)，血液生化学指标以及脏器病理方面均未见毒性改变。 结论 在服用剂量内复方生物黄酮的大鼠30天喂养实验为阴性结果。
【关键词】 复方生物黄酮;大鼠;30天喂养实验
Experimental research on the effects of compound bioflavone to rats with30days of feeding
XIE You-xiang，WANG Shu-ran，QIN Hui-sheng，et al.
Harbin Shengantai Bioengineering Co.Ltd，Harbin150090，China
【Abstract】 In order to know the possible bad influence of bioflavone to human being，we feeded the rats on test30days bioflavone.We did not see any toxic change in the fields of body weight，feed utilization ratio，blood tests(in-cluding number of erythrocyte，haemoglobin，white cell count and differential leucocyte count)，blood biochemical figures and biological fields of organs.Negative results have been gained in the toxic test after30days of rats feeding with compound bioflavine in normal dosage，and this is the conclusion of the test.
【Key words】 compound bioflavine;rat;30days of test feeding
随着生命科学的不断发展，人们对生物黄酮有了广泛的研究，发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能 [1] 和清除自由基的能力 [2] ;具有抗肿瘤作用 [3] ;植物雌激素样作用;减少体内胆固醇的合成，降糖作用 [4] 和降低血清胆固醇浓度和对心脑血管的保护作用 [5] ;对细胞免疫功能和非特异性免疫功能均有提高作用。生物黄酮的种类众多，其来源不同，所发挥的生物活性也不同。根据传统中医理论以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成的复方生物黄酮，可以更好的发挥黄酮的提高免疫作用，尽管这些主要原料均来源于“既食又药”的物质，但是关于复方成分的毒性研究较少。为了研究长期服用该产品可能对人体造成的潜在危害，我们对该产品进行了大鼠30天喂养实验，以期为今后开发利用我国“既食又药”的医药宝库提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 样品 复方生物黄酮的商品名称为圣安泰牌百力康片由哈尔滨圣安泰生物科技有限公司提供。样品以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成，功效成分为总黄酮。
1.2 实验动物 刚断乳体重60～90g的Wistar大鼠80只(批准证号:医动字第09-3-2)购自黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心。
1.3 实验方法 将动物在实验室观察3天后，随机将动物分成4组，每组20只，雌雄各半，其中三组为试验组，一组为对照组。动物单笼饲养。由于样品易氧化，因此不将样品掺入饲料中，采用灌胃的方法给予样品。复方生物黄酮的人推荐用量为2.52g/人/日，如成人体重以60kg计，则样品用量相当于0.042g/kg·bw剂量设计为灌胃的容量为体重的1%计算，则高剂量组4.2g/kg·bw(相当于人推荐用量的100倍)，中剂量组2.1g/kg·bw(相当于人推荐用量的50倍)，低剂量组1.05g/kg·bw(相当于人推荐用量的25倍)，对照组灌胃用相同体积的蒸馏水。动物自由摄食及饮水，连续喂养30天。
每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒症状及死亡情况，每周记录一次体重和两次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率。实验结束时，采血检测血液学指标，包括血红蛋白含量、红细胞计数、白细胞计数及分类;检测生化指标，包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、血糖(Glu)、血清白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、总胆固醇(TCH)和甘油三酯(TG);同时剖开大鼠腹部，取出肝、肾、脾、睾丸(卵巢)称重，计算脏/体比值，并对高剂量组和对照组动物肝、肾、脾、胃肠、睾丸及卵巢等组织进行病理学检查。
1.4 实验数据处理 数据结果以均数±标准差表示，采用方差分析方法进行统计学分析。
2 结果
2.1 一般状况观察 在整个过程中，各组动物一般状况良好，行为正常，未见任何中毒表现，亦无动物死亡。
在30天喂养过程中，复方生物黄酮对大鼠体重增长的影响见表1。结果差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对大鼠体重的增长无明显的影响。复方生物黄酮对大鼠食物总利用率的影响见表2。结果显示各组间差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对大鼠的食物利用率无明显影响。
表1 复方生物黄酮对大鼠体重的影响 (略)
表2 复方生物黄酮对大鼠总食物利用率的影响 (略)
2.2 血液学指标检查结果 大鼠红细胞、血红蛋白和白细胞及分类的检测结果见表3。
表3 复方生物黄酮30天喂养血液学检查结果 (略)
从表3可见，红细胞计数、血红蛋白含量和白细胞计数均在正常值范围内，且各剂量受试物组与阴性对照组相比，差异均无显著性(P>0.05)。说明复方生物黄酮对大鼠红细胞总数、血红蛋白含量和白细胞总数无明显影响。
复方生物黄酮对大鼠白细胞分类的影响检测结果见表4。
从表4可见，雄性、雌性大鼠的嗜酸性、中性、淋巴、单核等细胞均在正常值范围内，且各剂量受试物组与阴性对照组相比，差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对各型白细胞均无影响。
2.3 血液化学指标检验结果 试验结束后处死动物，分离大鼠血清，进行了血清生化指标的检测，结果见表5和表6。
表4 复方生物黄酮对大鼠WBC的影响 (略)
表5 末期生化检验结果 (略)
表6 末期生化检验结果 (略)
结果表明，各项指标均在正常值范围内，且与阴性对照组相比，差异无显著性。说明复方生物黄酮对大鼠血生化指标无明显影响。
2.4 复方生物黄酮病理检查结果 用复方生物黄酮对大鼠染毒30天后，大体解剖检查，各组动物重要脏器未见明显病理改变的异常。大鼠脏体比的结果见表7。
表7 复方生物黄酮对大鼠脏体比的影响 (略)
对表7结果在试验组与阴性对照组之间进行比较，方差分析表明，各组主要脏器的绝对体重和各脏/体比差异均无显著性(P>0.05)组织病理学检查结果:实验组动物与对照组动物各20只，雌雄各半。每只检查肝、肾、脾、胃肠、卵巢或睾丸。结果肝脏被膜完整，肝小叶结构清楚，肝细胞索排列整齐。肝细胞偶见轻度变性，个别动物汇管区可见少量炎细胞浸润。其中对照组3只，高剂量组4只，动物可见肝细胞空泡变性，两组比较无明显差异。肾脏被膜完整、肾小球、肾小管结构正常，肾间质无异常。两组动物的胃肠壁各层结构清楚，黏膜上层完整，黏膜下各层未见充血、水肿、炎性细胞浸润。脾脏被膜完整，脾小梁结构正常，红、白髓比例正常，无炎性细胞浸润及色素沉着。卵巢上皮与白膜正常，各级卵泡发育良好，间质未见淤血、炎性细胞浸润。睾丸的曲细精管内各级生精细胞发育良好，间质未见水肿、出血、炎性细胞浸润。总之，肝、脾、肾、胃、肠、睾丸(卵巢)均未见有关的病理组织学变化。
3 讨论
复方生物黄酮的主要来源为枸杞、银杏叶和黄芪。研究证实这几种成分未见毒性作用。采用一次最大剂量法做枸杞的急性毒性试验，结果大鼠和小鼠LD50>10g/kg，证明枸杞属实际无毒物质 [6] 。张丽等给大鼠连续灌胃复方黄芪胶囊12周，停药2周后分别测量大鼠体重、血液学和血液生化学指标，并作组织病理学检查。结果表明复方黄芪胶囊对大鼠无明显毒性，推论临床拟用剂量是安全的 [7] 。另有研究发现银杏叶大鼠经口LD50>21.5g/kg;30d喂养实验表明大鼠各项生理指标均未发生异常，表明银杏叶有较高的食用安全性 [8] 。本文在急性毒性实验的基础上进行了复方生物黄酮的30天喂养实验，结果表明复方生物黄酮对实验动物的体重、食物(饲料)利用率、血液学检查(红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数及分类)、血液生化学各项指标的检查(AST、ALT、Glu、BUN、TP、Alb、TC、TG、CRE)结果均与阴性对照组(正常动物)无显著差异。复方生物黄酮对实验动物的肝、脾、肾、睾丸、胃肠、卵巢从大体解剖学上看均未检出与阴性对照组的明显差异，亦未发现与实验因素有关的病理组织学变化。30天喂养试验未见其对受试动物有明显毒性损害作用，该结果与王玲的报道一致 [9] 。尚未见复方生物黄酮的毒性研究报道。
【参考文献】
1 姚平，刘烈刚，贾文波，等.银杏黄酮对小鼠急性酒精摄入后抗氧化系统的影响.卫生研究，2005，34(3):303-306.
2 彭珊珊，于化泓，赵哲霞.具有抗氧化效果的植物性食品.食品科技，2005，1:44-48
3 杜凤英.植物雌激素抗癌作用的研究进展.预防医学情报杂志，2005，21(2):153-155.
4 曹群华，瞿伟菁，牛伟，等.沙棘黄酮对链脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用.营养学报，2005，27(2):151-154.
5 朱旭贞.杏丁治疗急性脑梗死50例疗效观察.现代中西医结合杂志，2005，14(9):1169.
6 穆冰，刘晓峰，熊进，等.枸杞多糖的急性毒性及致突变性.环境与职业医学，2002，19(3):201-202.
7 张丽，李灵芝，龚海英.复方黄芪胶囊长期毒性试验研究.武警医学院学报，2005，14(2):108-110.
8 张卫明，顾龚平，史劲松.银杏叶食用安全性的毒理学评价.南京师大学报(自然科学版)，2005，28(1):80-83.
9 王玲，汪德清，田亚平，等.黄芪总黄酮大鼠30d喂养试验.卫生毒理学杂志，2004，18(4):284.
作者单位:1 150090黑龙江哈尔滨，哈尔滨圣安泰生物科技有限公司
2 150001黑龙江哈尔滨，哈尔滨医科大学
3 150076黑龙江哈尔滨，哈尔滨商业大学药学院
(编辑:守 中), 百拇医药(谢友祥 王舒然 秦慧生 杨书良)
【关键词】 复方生物黄酮;大鼠;30天喂养实验
Experimental research on the effects of compound bioflavone to rats with30days of feeding
XIE You-xiang，WANG Shu-ran，QIN Hui-sheng，et al.
Harbin Shengantai Bioengineering Co.Ltd，Harbin150090，China
【Abstract】 In order to know the possible bad influence of bioflavone to human being，we feeded the rats on test30days bioflavone.We did not see any toxic change in the fields of body weight，feed utilization ratio，blood tests(in-cluding number of erythrocyte，haemoglobin，white cell count and differential leucocyte count)，blood biochemical figures and biological fields of organs.Negative results have been gained in the toxic test after30days of rats feeding with compound bioflavine in normal dosage，and this is the conclusion of the test.
【Key words】 compound bioflavine;rat;30days of test feeding
随着生命科学的不断发展，人们对生物黄酮有了广泛的研究，发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能 [1] 和清除自由基的能力 [2] ;具有抗肿瘤作用 [3] ;植物雌激素样作用;减少体内胆固醇的合成，降糖作用 [4] 和降低血清胆固醇浓度和对心脑血管的保护作用 [5] ;对细胞免疫功能和非特异性免疫功能均有提高作用。生物黄酮的种类众多，其来源不同，所发挥的生物活性也不同。根据传统中医理论以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成的复方生物黄酮，可以更好的发挥黄酮的提高免疫作用，尽管这些主要原料均来源于“既食又药”的物质，但是关于复方成分的毒性研究较少。为了研究长期服用该产品可能对人体造成的潜在危害，我们对该产品进行了大鼠30天喂养实验，以期为今后开发利用我国“既食又药”的医药宝库提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 样品 复方生物黄酮的商品名称为圣安泰牌百力康片由哈尔滨圣安泰生物科技有限公司提供。样品以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成，功效成分为总黄酮。
1.2 实验动物 刚断乳体重60～90g的Wistar大鼠80只(批准证号:医动字第09-3-2)购自黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心。
1.3 实验方法 将动物在实验室观察3天后，随机将动物分成4组，每组20只，雌雄各半，其中三组为试验组，一组为对照组。动物单笼饲养。由于样品易氧化，因此不将样品掺入饲料中，采用灌胃的方法给予样品。复方生物黄酮的人推荐用量为2.52g/人/日，如成人体重以60kg计，则样品用量相当于0.042g/kg·bw剂量设计为灌胃的容量为体重的1%计算，则高剂量组4.2g/kg·bw(相当于人推荐用量的100倍)，中剂量组2.1g/kg·bw(相当于人推荐用量的50倍)，低剂量组1.05g/kg·bw(相当于人推荐用量的25倍)，对照组灌胃用相同体积的蒸馏水。动物自由摄食及饮水，连续喂养30天。
每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒症状及死亡情况，每周记录一次体重和两次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率。实验结束时，采血检测血液学指标，包括血红蛋白含量、红细胞计数、白细胞计数及分类;检测生化指标，包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、血糖(Glu)、血清白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、总胆固醇(TCH)和甘油三酯(TG);同时剖开大鼠腹部，取出肝、肾、脾、睾丸(卵巢)称重，计算脏/体比值，并对高剂量组和对照组动物肝、肾、脾、胃肠、睾丸及卵巢等组织进行病理学检查。
1.4 实验数据处理 数据结果以均数±标准差表示，采用方差分析方法进行统计学分析。
2 结果
2.1 一般状况观察 在整个过程中，各组动物一般状况良好，行为正常，未见任何中毒表现，亦无动物死亡。
在30天喂养过程中，复方生物黄酮对大鼠体重增长的影响见表1。结果差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对大鼠体重的增长无明显的影响。复方生物黄酮对大鼠食物总利用率的影响见表2。结果显示各组间差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对大鼠的食物利用率无明显影响。
表1 复方生物黄酮对大鼠体重的影响 (略)
表2 复方生物黄酮对大鼠总食物利用率的影响 (略)
2.2 血液学指标检查结果 大鼠红细胞、血红蛋白和白细胞及分类的检测结果见表3。
表3 复方生物黄酮30天喂养血液学检查结果 (略)
从表3可见，红细胞计数、血红蛋白含量和白细胞计数均在正常值范围内，且各剂量受试物组与阴性对照组相比，差异均无显著性(P>0.05)。说明复方生物黄酮对大鼠红细胞总数、血红蛋白含量和白细胞总数无明显影响。
复方生物黄酮对大鼠白细胞分类的影响检测结果见表4。
从表4可见，雄性、雌性大鼠的嗜酸性、中性、淋巴、单核等细胞均在正常值范围内，且各剂量受试物组与阴性对照组相比，差异均无显著性(P>0.05)，说明复方生物黄酮对各型白细胞均无影响。
2.3 血液化学指标检验结果 试验结束后处死动物，分离大鼠血清，进行了血清生化指标的检测，结果见表5和表6。
表4 复方生物黄酮对大鼠WBC的影响 (略)
表5 末期生化检验结果 (略)
表6 末期生化检验结果 (略)
结果表明，各项指标均在正常值范围内，且与阴性对照组相比，差异无显著性。说明复方生物黄酮对大鼠血生化指标无明显影响。
2.4 复方生物黄酮病理检查结果 用复方生物黄酮对大鼠染毒30天后，大体解剖检查，各组动物重要脏器未见明显病理改变的异常。大鼠脏体比的结果见表7。
表7 复方生物黄酮对大鼠脏体比的影响 (略)
对表7结果在试验组与阴性对照组之间进行比较，方差分析表明，各组主要脏器的绝对体重和各脏/体比差异均无显著性(P>0.05)组织病理学检查结果:实验组动物与对照组动物各20只，雌雄各半。每只检查肝、肾、脾、胃肠、卵巢或睾丸。结果肝脏被膜完整，肝小叶结构清楚，肝细胞索排列整齐。肝细胞偶见轻度变性，个别动物汇管区可见少量炎细胞浸润。其中对照组3只，高剂量组4只，动物可见肝细胞空泡变性，两组比较无明显差异。肾脏被膜完整、肾小球、肾小管结构正常，肾间质无异常。两组动物的胃肠壁各层结构清楚，黏膜上层完整，黏膜下各层未见充血、水肿、炎性细胞浸润。脾脏被膜完整，脾小梁结构正常，红、白髓比例正常，无炎性细胞浸润及色素沉着。卵巢上皮与白膜正常，各级卵泡发育良好，间质未见淤血、炎性细胞浸润。睾丸的曲细精管内各级生精细胞发育良好，间质未见水肿、出血、炎性细胞浸润。总之，肝、脾、肾、胃、肠、睾丸(卵巢)均未见有关的病理组织学变化。
3 讨论
复方生物黄酮的主要来源为枸杞、银杏叶和黄芪。研究证实这几种成分未见毒性作用。采用一次最大剂量法做枸杞的急性毒性试验，结果大鼠和小鼠LD50>10g/kg，证明枸杞属实际无毒物质 [6] 。张丽等给大鼠连续灌胃复方黄芪胶囊12周，停药2周后分别测量大鼠体重、血液学和血液生化学指标，并作组织病理学检查。结果表明复方黄芪胶囊对大鼠无明显毒性，推论临床拟用剂量是安全的 [7] 。另有研究发现银杏叶大鼠经口LD50>21.5g/kg;30d喂养实验表明大鼠各项生理指标均未发生异常，表明银杏叶有较高的食用安全性 [8] 。本文在急性毒性实验的基础上进行了复方生物黄酮的30天喂养实验，结果表明复方生物黄酮对实验动物的体重、食物(饲料)利用率、血液学检查(红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数及分类)、血液生化学各项指标的检查(AST、ALT、Glu、BUN、TP、Alb、TC、TG、CRE)结果均与阴性对照组(正常动物)无显著差异。复方生物黄酮对实验动物的肝、脾、肾、睾丸、胃肠、卵巢从大体解剖学上看均未检出与阴性对照组的明显差异，亦未发现与实验因素有关的病理组织学变化。30天喂养试验未见其对受试动物有明显毒性损害作用，该结果与王玲的报道一致 [9] 。尚未见复方生物黄酮的毒性研究报道。
【参考文献】
1 姚平，刘烈刚，贾文波，等.银杏黄酮对小鼠急性酒精摄入后抗氧化系统的影响.卫生研究，2005，34(3):303-306.
2 彭珊珊，于化泓，赵哲霞.具有抗氧化效果的植物性食品.食品科技，2005，1:44-48
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4 曹群华，瞿伟菁，牛伟，等.沙棘黄酮对链脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用.营养学报，2005，27(2):151-154.
5 朱旭贞.杏丁治疗急性脑梗死50例疗效观察.现代中西医结合杂志，2005，14(9):1169.
6 穆冰，刘晓峰，熊进，等.枸杞多糖的急性毒性及致突变性.环境与职业医学，2002，19(3):201-202.
7 张丽，李灵芝，龚海英.复方黄芪胶囊长期毒性试验研究.武警医学院学报，2005，14(2):108-110.
8 张卫明，顾龚平，史劲松.银杏叶食用安全性的毒理学评价.南京师大学报(自然科学版)，2005，28(1):80-83.
9 王玲，汪德清，田亚平，等.黄芪总黄酮大鼠30d喂养试验.卫生毒理学杂志，2004，18(4):284.
作者单位:1 150090黑龙江哈尔滨，哈尔滨圣安泰生物科技有限公司
2 150001黑龙江哈尔滨，哈尔滨医科大学
3 150076黑龙江哈尔滨，哈尔滨商业大学药学院
(编辑:守 中), 百拇医药(谢友祥 王舒然 秦慧生 杨书良)