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编号:10811242
酶联免疫吸附试验影响乙肝表面抗原常见原因
http://www.100md.com 《中华现代中西医杂志》 2005年第18期
     酶联免疫吸附试验(ELISA)以其快速简便、特异性强、灵敏度高(检测灵敏度可达0.5ng/ml)、重复性好等优点应用于各级医院,但由于影响ELISA的因素较多,所以有时检测结果与实际偏差较大,给临床疾病的诊治带来困难,现结合试验中常见的一些因素作简要分析如下。

     1 试剂因素

    从冷藏环境中取出试剂盒内所需的试剂及待测标本所需的微孔置37℃平衡30min后方可使用,余者应封存于冰箱中备用。另外鉴于目前生产ELISA试剂盒的厂家众多,但质量差别很大,应选用知名度高且有国家正式批号的试剂,用质控血清先进行比较,选出相对特性异性高、敏感度好、检测快速的试剂,并且每进一批试剂,用前都要做质控,以确保检测结果的准确性。

     2 标本的因素

    非特异性物质的影响:由于免疫复合物易于吸附在相同载体的表面,造成假阳性。所以应用含有0.05%TweeN-20的PBS洗涤液洗涤,消除非特异物质由于吸附所引起的影响。对于类风湿(RF)患者,应对被检者的标本和酶标抗体用1.6%的小牛血清稀释后再做。另外,溶血标本也易引起假阳性,试验中要注意离心速度,孵育温度,抽血时要顺利,避免组织液过多的进入血液。

     3 试验因素

    待测标本需置室温平衡30min后再进行检测,加样要准确,滴加试剂时应垂直滴加,不得倾斜,人为的加大试剂量。另外做到一人一移液头,防止交叉污染,对反应时间和温度要严格按照操作规程做。洗涤液的pH值要保持中性,否则易引起抗原抗体复合物的解离。手工洗涤时,洗涤液要注满微孔,以洗去未结合的抗原及游离酶。甩板时要垂直,避免交叉污染,并且用力不能过猛,防止冲掉抗原抗体复合物,造成假阴性,其次洗板次数不可太多。读取结果要在显色15min内读取。条件好的单位最好用酶标仪读取结果。

    总之在试验中检验者应结合实际,减少误差,力求做到检验结果的准确。

    作者单位: 264006 山东烟台,烟台开发区医院检验科

    (编辑:林剑雷), 百拇医药(陈海霞 徐秀红)