关键词: 胰蛋白酶;细胞培养;角蛋白细胞

     1 材料和方法

    1.1 材料 ①KC的培养:无菌条件下手术取人包皮，尽量剪除皮下组织，置于1.5g·L-1 Dispase液中4℃18～24h.将真表皮分离，取表皮分别置于2.5g·L-1 胰蛋白酶0.1g·L-1 二乙胺四乙酸二钠(EDTA)及含100mL·L-1 血清的DMEM中吹打成单细胞悬液，离心300g·min-1 ，10min，弃悬液，KC无血清培养基(GibcoBRL)重悬细胞，调整细胞数至1×103 ·L-1 ，接种至6孔培养板，24h后换液.当细胞生长至80%～90%汇合时1∶2传代.

    1.2 方法 ①分组:KC传代时分为两组，预处理组:细胞约80%汇合时，加入2.5g·L-1 胰蛋白酶0.1g·L-1 EDTA，当胞体开始回缩时吸除胰酶，终止消化 ......