关键词: CD80;葡萄球菌肠毒素A;重组

     0 引言

    肿瘤的免疫基因治疗已成为近年来研究的一个热点.机体免疫系统抗肿瘤的主要方式是T细胞介导的免疫排斥反应，而T细胞被激活并杀伤肿瘤细胞依赖于两类信号，一类是抗原递呈信号，另一类是共刺激信号.但尚未有人报道将上述两种信号结合在一起有效的应用到肿瘤的治疗当中.我们通过基因工程手段构建同时表达共刺激分子CD80和葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal Enterotoxin A，SEA，一种重要的超抗原)的逆转录病毒真核表达载体，使其表达这两个分子，发挥SEA强特异性激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性和CD80介导的第二信号共刺激双重作用，建立SEA-B7-1新双识别系统，启动一种全新的免疫排斥机制，并且较好的解决了毒素蛋白融合基因翻译后二级结构及生物活性的预测.这一研究成果对多数实体瘤具有普遍意义，并将为肿瘤疫苗和基因治疗拓展新的途径.

     1 材料和方法

    1.1 质粒和菌株 克隆载体pBluescriptIIKS(+)(简称KS)、大肠杆菌DH5α株、产SEA标准菌株FRI1000及碱基混合物(2.5mmol·L-1 )均由军事医学科学院五所一室提供.逆转录病毒真核表达载体pLXSN为本室保存.内切酶BamHI，XholI，T4DNA连接酶均为BRL/Gibco公司产品.

    PCR反应所需Taq酶及Buffer(10×)为Promega公司产品.

    1.2 引物 CD80上游引物，CCG CTCGAGGCCATGGGC-CACACACGG，下游引物，CG GGATCC TCCACTACC-TACAGGGCGTACACTTTCC ......