加热对人肝癌耐药细胞模型┐7721/Adm细胞内药物浓度的影响
关键词: 阿霉素;高温，诱发;肝肿瘤;细胞系;抗药性，多药
摘 要:目的 探讨比较43℃加热前后人肝癌细胞-7721(以下简称7721细胞)和耐药人肝癌细胞模型-7721/Adm(以下简称7721/Adm细胞)细胞内阿霉素(ADM)药物浓度的变化. 方法 以体外培养的人肝癌细胞-7721和作者自行培养建立的人肝癌细胞模型-7721/Adm为研究对象，采用水浴加温法、流式细胞荧光技术观察阿霉素化疗加热前后7721和7721/Adm细胞胞内阿霉素(ADM)浓度的变化. 结果 加热后7721细胞组提高30.8%，HCC-7721/Adm组提高51%. 结论 加热可明显提高这两种细胞内的阿霉素浓度，从而提高这两种细胞的化疗敏感性，为临床克服多药耐药问题提供了重要依据.
Thermochemotherapy of ADM and human mul┐tidrug┐resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)
GUO Wei-Ping LIU Yan ZHANG Hong-Xin LI Wen-Xian NI Dai-Hui LIANG Zhi-Hui
1 Department of Interventional Radiology，
2 Department of Ophthalmology，Tangdu Hospital，Fourth Military Medical University，Xi'an710038，China
Keywords:doxorubicin;hyperthermia，induced;liver neo-plasms;cell line;drug resistance，multiple
Abstract:AIM To comparatively study the cytotoxic effects of chemotherapy and thermo-chemotherapy of ADM on hu-man hepatocellular carcinoma cell line(7721)and human multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm).METHODS By means of water bath and MTT as-say，the inhibition pattern of cell growth was observed.The effects of hyperthermia on intracellular concentration of ADM of7721and that of7721/Adm were detected by flow cytome┐try.RESULTS ①Sensitivity of7721/Adm to ADM was significantly lower than that of7721;②Hyperthermia re-markably increased the sensitivity of7721and7721/Adm to AMD;③Hyperthermia increased the intracellular concentra-tion of ADM in those two sorts of cells mentioned above，es-pecially in7721/Adm.CONCLUSION Hyperthermia can in-crease the sensitivity of7721and7721/Adm to ADM.
0 引言
热疗在肿瘤治疗上的应用已有较长的历史.研究表明，加热可以显著提高某些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性
[1-5] ，但其机制不很清楚.近年来，肿瘤细胞的多药耐药性影响肿瘤化疗效果问题日益引起临床医生重视，并进行了卓有成效的研究，在药物和生物因子逆转耐药性等方面取得一定进展;目前对加热降低耐药肿瘤细胞的耐药性以及加热对细胞耐药性改变的分子生物学机制方面的了解和研究却不深入，有关研究报道也不多.为此，作者在自行培养的人肝癌细胞耐药模型-7721/Adm基础上[6] ，研究了加热对该细胞内阿霉素浓度的影响，报告如下.
1 材料和方法
1.1 细胞培养 7721细胞由本校实验动物中心提供，按常规法培养于PRMI-1640全培养液中(100mL·L-1 小牛血清，青霉素10万u·L-1 ，链霉素100mg·L-1 )，单层培养于37℃，CO2 恒温孵育箱内，用接种传代第3日的细胞做实验;自行建立7721/Adm细胞[6] ，按常规法培养于含阿霉素(0.5mg·L-1 )的PRMI-1640全培养液中(100mL/L-1 小牛血清，青霉素10万u·L-1 ，链霉素100mg·L-1 )，单层培养于37℃，CO2 恒温孵育箱内，用接种传代稳定的细胞做实验.
1.2 细胞处理 ①采用水浴加温法(数字式恒温浴槽，温波±0.1℃)，将7721细胞、7721/Adm细胞培养瓶浸没于水中，温度设定为43℃;加热时间设定为30，60min两组，每组4瓶;②阿霉素(ADM)终浓度设1mg·L-1 一个浓度，用微量进样器加药，化疗时间统一为60min;③热与ADM的组合采用热化同时(加热同时ADM化疗)一个方式;④细胞分组:阴性对照组、单纯化疗组、加热化疗组共三组，每组4瓶;⑤将实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL);⑥以未处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的PRMI-1640全培养液为空白对照.
1.3 MTT药敏实验 将实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL)接种到96孔板上，每组设三个板、三个复孔，每孔200μL(1×105 个细胞/mL)，以未经处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的1640全培养液为空白对照，常规法培养过夜后，去上清液，加入MTT50μL/孔，继续培养4～6h，去上清液后加入二甲基亚砜(DMSO)100μL/孔，充分震荡5min，上酶联免疫检测仪，测波长490nm每孔的光密度值(A值)，计算细胞存活率:存活率=(实验孔的平均A值/阴性对照孔的平均A值)×100%
1.4 流式细胞仪测定胞质药物浓度 采用流式细胞技术检测7721细胞、7721/Adm细胞内阿霉素浓度[5] .取实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL))，冷PBS(4℃，0.01mol·L-1 pH7.4)洗涤2次，再重悬于冷PBS中，4℃下保存至上样行流式细胞仪检测(激发波长488nm，接收波长575nm).统计学处理:用SPLM统计软件进行方差分析.
2 结果
2.1 热化疗的细胞毒作用 7721细胞、7721/Adm经阿霉素单纯化疗、43℃加热化疗处理，其细胞存活率如Tab1，结果显示:7721细胞、7721/Adm细胞经加热处理对阿霉素敏感性明显提高.
2.2 细胞内阿霉素药物浓度变化 利用流式细胞仪检测细胞内阿霉素荧光强度的改变.结果如Tab1所示:7721细胞、7721/Adm细胞加热化疗组细胞内阿霉素的荧光强度明显高于7721细胞、7721/Adm细胞单纯化疗组，其中7721细胞组提高30.8%，HCC-7721/Adm组提高51%，说明7721/Adm细胞加热化疗后与7721/Adm细胞化疗相比，细胞内阿霉素的蓄积明显增加.
3 讨论
3.1 耐药逆转的有关进展 肿瘤细胞在多次化疗后产生耐药是影响疗效的一大难题.为克服耐药问题，研究人员已在药物逆转、单克隆抗体导向逆转、利用脂质体改变细胞膜通透性、利用细胞因子、核酶、反义核酸等逆转肿瘤多药耐药等方面进行了研究[7-12] .但由于受到药物本身具有毒副作用、单克隆抗体异源蛋白的免疫反应及其对正常细胞膜表面分子功能的影响等限制，应用前景并不乐观.
表1 7721细胞、7721/Adm阿霉素化疗与热化疗后细胞存活率和药物浓度 略
3.2加热对瘤细胞化疗敏感性的影响 高热对正常细胞和肿瘤细胞均具有杀伤作用，其机制是温热对细胞的蛋白质和DNA的热变性作用，乏氧的肿瘤细胞比正常组织细胞对热更敏感[1-2] ，这已在本课题组的VX-2，7721细胞热化疗实验中得到进一步证实[3-5，7] .本研究显示:加热不但提高了亲本细胞-7721的阿霉素细胞毒作用，而且也提高了耐药细胞模型-7721/Adm对阿霉素的敏感性，说明加热可以在一定程度上克服耐药性.这对逆转耐药肿瘤细胞的多药耐药性基础研究具有重要意义，也对耐药肿瘤的临床治疗具有应用价值.
3.3 化疗热增敏的机制探讨 热疗对化疗的增敏作用机制比较复杂[9，13-15] ，可能与以下几点有关:①高温对生物膜有影响.高热破坏细胞膜的稳定性，使细胞膜的通透性增加，易于药物进入癌细胞内并维持胞浆内较高的药物浓度、增强化学反应、加重DNA损伤、影响损伤DNA的修复.②高热可使细胞膜乏氧，无氧酵解增加，导致癌细胞的pH值降低，某些药物在酸性环境下活性增强，杀伤力提高.③热疗可以减少或防止癌细胞产生耐药性.有实验证明耐药细胞加热后对化疗敏感性又明显提高.④热疗使化疗具有定向性.由于肿瘤组织血液供应的特点，瘤体中心血供差，多为乏氧细胞，对放疗，化疗不敏感，而周边部血供丰富，对化疗敏感，从而达到原药物浓度达不到的效果.有研究表明加热前后细胞内阿霉素浓度有一定变化[9] .本实验结果进一步证实:加热不但能提高敏感细胞(7721细胞)内的药物浓度，而且也能提高耐药细胞(7721/Adm)内的药物浓度，这就解释了作者在另一研究中观察到的现象:加热可提高阿霉素对7721细胞、尤其是7721/Adm细胞的细胞毒作用 加热是通过增加7721细胞、7721/Adm细胞内阿霉素药物浓度来提高其对化疗敏感性的.
加热能提高耐药细胞内药物浓度这一结论为介入性热化疗法在克服肝癌耐药性的临床应用提供了可靠的实验依据.
参考文献:
[1]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP.Cytotoxic effect of ther-mochemotherapy carcinoma cell line [J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，1997;18(12):67-68.
[2]Majima H，Kashiwado K，Egaswa S，Okada M，Kudo S.Inter-action between the kinetics of thermotolerance and effect of cis_ diamminedichlorplatinum(11)or bleomycin given at37or43[J].Int J Hyperthermia，1992;8(4):431-442.
[3]Zhang HX，Liu Y，Guo WP，Wang ZM，Gao W，Li WX，Ni DH.Cytotoxic effect of adriamcin hyperthermia on rabbit carci-noma cell line VX-2in vitro [J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;21(12):1203-1205.
[4]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Chen JH.The cytotoxic effect of thermochemotherapy of mitomycin C on human hepatoma cell line-7721[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，1998;19(6):636-638.
[5]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Wu ZQ，Li WX，Guan Y，Xu JL，Ni DH.Synergistic effect of combined use of hyperthermia and adriamycin(ADM)on rabbit cell line VX-2[J].Cancer，1999;18(3):276-278.
[6]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Ni DH，Guan Y，Zhang H，Wang Z，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Ni DH，Guan Y.Establishment of human multidrug-resistant
hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;20(4):495-499.
[7]Zhang HX，Liu Y，Guo WP，Gao W，Li WX，Ni DH.Compar-ative study of the effect of thermochemotherapy of ADM on hu-man multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;21(8):964-967.
[8]Cheng AL，Chuang SE，Fine RL，Hanahan D，Folkman J，Tanaka H，Taniguchi T.Inhibition of the membrane transloca-tion and activation of protein kinase C，and potentiation of dox-orubicin-induced apoptosis of hepatocellular carcinoma cells by tamoxifen [J].Biochem-Pharmacol，1998;55(4):523-531.
[9]Nishikawa K，Asaumi J，Kawasaki S，Fitzgerald DJ，Cardarelli CD.Influence of cepharanthin and hyperthermia on the intra-cellular accumulation of adriamycin and Fluo3，an indicator of Ca2+ [J].Anticancer-Res，1998;18(3A):1649-1654.
[10]Versantvoort，Broxterman HJ，Bagrij，Scheper RJ，Twenty man PR.Regulation by glutathiore of drug transport in mul-tidrug-resistant human lung tumour cell lines overexpressing multidrug resisatnce-associated protein [J].Br J Cancer，1995;72:82-89.
[11]Fitzgerald DJ，Willingham MC，Cardarelli CD，Morgon J，Pake H.A monoclonal antibody pseudomonas toxin conjugate that specifically kills multidrug-resistant cells [J].Pro Natl Acad Sci USA，1987;84:4288-4292.
[12]Yang LY，Trujillo JM.Biological characterization of multidrug-resistant human colon carcinoma sublines induced/selected by two methods [J].Cancer Res，1990;50:3218-3225.
[13]Huang M，Liu-G TI，Prat F，Centarti M，Sibille E.The study of innate drug resistance of human hepatocellular carcinoma Bel7402cell line [J].Cancer-Lett，1999;135(1):97-105.
[14]Marucci L，Varticovski L，AriasIM.Effect of a xanthine analog on human hepatocellular carcinoma cells(Alexander)in culture and in xenografts in SCID mice [J].Hepatology，1997;26(5):1195-1202.
[15]Kawai N，Sato M，Sonomura T，Alexander T，Swistel MD，James R.Experimental study of percutaneous hot ethanol injec-tion therapy(PHEIT)by continuous heating device for hepato-cellular carcinoma [J].Nippon Igaku Hoshasen Gakkai Zasshi，1998;58(7):366-368.
编辑 王小仲
第四军医大学唐都医院: 1 介入放射科，
2 眼科，陕西西安710038
作者简介: 郭卫平(1951-)，女(汉族)，山东省冠县人.副主任医师，副教授，主任.Tel.(029)3577454(O)，3577254(H) Email.tdjrfsk @fmmu.edu.cn, http://www.100md.com(郭卫平 刘燕 张洪新 李文献 倪代会 梁智会)
摘 要:目的 探讨比较43℃加热前后人肝癌细胞-7721(以下简称7721细胞)和耐药人肝癌细胞模型-7721/Adm(以下简称7721/Adm细胞)细胞内阿霉素(ADM)药物浓度的变化. 方法 以体外培养的人肝癌细胞-7721和作者自行培养建立的人肝癌细胞模型-7721/Adm为研究对象，采用水浴加温法、流式细胞荧光技术观察阿霉素化疗加热前后7721和7721/Adm细胞胞内阿霉素(ADM)浓度的变化. 结果 加热后7721细胞组提高30.8%，HCC-7721/Adm组提高51%. 结论 加热可明显提高这两种细胞内的阿霉素浓度，从而提高这两种细胞的化疗敏感性，为临床克服多药耐药问题提供了重要依据.
Thermochemotherapy of ADM and human mul┐tidrug┐resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)
GUO Wei-Ping LIU Yan ZHANG Hong-Xin LI Wen-Xian NI Dai-Hui LIANG Zhi-Hui
1 Department of Interventional Radiology，
2 Department of Ophthalmology，Tangdu Hospital，Fourth Military Medical University，Xi'an710038，China
Keywords:doxorubicin;hyperthermia，induced;liver neo-plasms;cell line;drug resistance，multiple
Abstract:AIM To comparatively study the cytotoxic effects of chemotherapy and thermo-chemotherapy of ADM on hu-man hepatocellular carcinoma cell line(7721)and human multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm).METHODS By means of water bath and MTT as-say，the inhibition pattern of cell growth was observed.The effects of hyperthermia on intracellular concentration of ADM of7721and that of7721/Adm were detected by flow cytome┐try.RESULTS ①Sensitivity of7721/Adm to ADM was significantly lower than that of7721;②Hyperthermia re-markably increased the sensitivity of7721and7721/Adm to AMD;③Hyperthermia increased the intracellular concentra-tion of ADM in those two sorts of cells mentioned above，es-pecially in7721/Adm.CONCLUSION Hyperthermia can in-crease the sensitivity of7721and7721/Adm to ADM.
0 引言
热疗在肿瘤治疗上的应用已有较长的历史.研究表明，加热可以显著提高某些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性
[1-5] ，但其机制不很清楚.近年来，肿瘤细胞的多药耐药性影响肿瘤化疗效果问题日益引起临床医生重视，并进行了卓有成效的研究，在药物和生物因子逆转耐药性等方面取得一定进展;目前对加热降低耐药肿瘤细胞的耐药性以及加热对细胞耐药性改变的分子生物学机制方面的了解和研究却不深入，有关研究报道也不多.为此，作者在自行培养的人肝癌细胞耐药模型-7721/Adm基础上[6] ，研究了加热对该细胞内阿霉素浓度的影响，报告如下.
1 材料和方法
1.1 细胞培养 7721细胞由本校实验动物中心提供，按常规法培养于PRMI-1640全培养液中(100mL·L-1 小牛血清，青霉素10万u·L-1 ，链霉素100mg·L-1 )，单层培养于37℃，CO2 恒温孵育箱内，用接种传代第3日的细胞做实验;自行建立7721/Adm细胞[6] ，按常规法培养于含阿霉素(0.5mg·L-1 )的PRMI-1640全培养液中(100mL/L-1 小牛血清，青霉素10万u·L-1 ，链霉素100mg·L-1 )，单层培养于37℃，CO2 恒温孵育箱内，用接种传代稳定的细胞做实验.
1.2 细胞处理 ①采用水浴加温法(数字式恒温浴槽，温波±0.1℃)，将7721细胞、7721/Adm细胞培养瓶浸没于水中，温度设定为43℃;加热时间设定为30，60min两组，每组4瓶;②阿霉素(ADM)终浓度设1mg·L-1 一个浓度，用微量进样器加药，化疗时间统一为60min;③热与ADM的组合采用热化同时(加热同时ADM化疗)一个方式;④细胞分组:阴性对照组、单纯化疗组、加热化疗组共三组，每组4瓶;⑤将实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL);⑥以未处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的PRMI-1640全培养液为空白对照.
1.3 MTT药敏实验 将实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL)接种到96孔板上，每组设三个板、三个复孔，每孔200μL(1×105 个细胞/mL)，以未经处理的细胞为阴性对照，以不含细胞的1640全培养液为空白对照，常规法培养过夜后，去上清液，加入MTT50μL/孔，继续培养4～6h，去上清液后加入二甲基亚砜(DMSO)100μL/孔，充分震荡5min，上酶联免疫检测仪，测波长490nm每孔的光密度值(A值)，计算细胞存活率:存活率=(实验孔的平均A值/阴性对照孔的平均A值)×100%
1.4 流式细胞仪测定胞质药物浓度 采用流式细胞技术检测7721细胞、7721/Adm细胞内阿霉素浓度[5] .取实验处理过的细胞消化成细胞悬液(5×105 个细胞/mL))，冷PBS(4℃，0.01mol·L-1 pH7.4)洗涤2次，再重悬于冷PBS中，4℃下保存至上样行流式细胞仪检测(激发波长488nm，接收波长575nm).统计学处理:用SPLM统计软件进行方差分析.
2 结果
2.1 热化疗的细胞毒作用 7721细胞、7721/Adm经阿霉素单纯化疗、43℃加热化疗处理，其细胞存活率如Tab1，结果显示:7721细胞、7721/Adm细胞经加热处理对阿霉素敏感性明显提高.
2.2 细胞内阿霉素药物浓度变化 利用流式细胞仪检测细胞内阿霉素荧光强度的改变.结果如Tab1所示:7721细胞、7721/Adm细胞加热化疗组细胞内阿霉素的荧光强度明显高于7721细胞、7721/Adm细胞单纯化疗组，其中7721细胞组提高30.8%，HCC-7721/Adm组提高51%，说明7721/Adm细胞加热化疗后与7721/Adm细胞化疗相比，细胞内阿霉素的蓄积明显增加.
3 讨论
3.1 耐药逆转的有关进展 肿瘤细胞在多次化疗后产生耐药是影响疗效的一大难题.为克服耐药问题，研究人员已在药物逆转、单克隆抗体导向逆转、利用脂质体改变细胞膜通透性、利用细胞因子、核酶、反义核酸等逆转肿瘤多药耐药等方面进行了研究[7-12] .但由于受到药物本身具有毒副作用、单克隆抗体异源蛋白的免疫反应及其对正常细胞膜表面分子功能的影响等限制，应用前景并不乐观.
表1 7721细胞、7721/Adm阿霉素化疗与热化疗后细胞存活率和药物浓度 略
3.2加热对瘤细胞化疗敏感性的影响 高热对正常细胞和肿瘤细胞均具有杀伤作用，其机制是温热对细胞的蛋白质和DNA的热变性作用，乏氧的肿瘤细胞比正常组织细胞对热更敏感[1-2] ，这已在本课题组的VX-2，7721细胞热化疗实验中得到进一步证实[3-5，7] .本研究显示:加热不但提高了亲本细胞-7721的阿霉素细胞毒作用，而且也提高了耐药细胞模型-7721/Adm对阿霉素的敏感性，说明加热可以在一定程度上克服耐药性.这对逆转耐药肿瘤细胞的多药耐药性基础研究具有重要意义，也对耐药肿瘤的临床治疗具有应用价值.
3.3 化疗热增敏的机制探讨 热疗对化疗的增敏作用机制比较复杂[9，13-15] ，可能与以下几点有关:①高温对生物膜有影响.高热破坏细胞膜的稳定性，使细胞膜的通透性增加，易于药物进入癌细胞内并维持胞浆内较高的药物浓度、增强化学反应、加重DNA损伤、影响损伤DNA的修复.②高热可使细胞膜乏氧，无氧酵解增加，导致癌细胞的pH值降低，某些药物在酸性环境下活性增强，杀伤力提高.③热疗可以减少或防止癌细胞产生耐药性.有实验证明耐药细胞加热后对化疗敏感性又明显提高.④热疗使化疗具有定向性.由于肿瘤组织血液供应的特点，瘤体中心血供差，多为乏氧细胞，对放疗，化疗不敏感，而周边部血供丰富，对化疗敏感，从而达到原药物浓度达不到的效果.有研究表明加热前后细胞内阿霉素浓度有一定变化[9] .本实验结果进一步证实:加热不但能提高敏感细胞(7721细胞)内的药物浓度，而且也能提高耐药细胞(7721/Adm)内的药物浓度，这就解释了作者在另一研究中观察到的现象:加热可提高阿霉素对7721细胞、尤其是7721/Adm细胞的细胞毒作用 加热是通过增加7721细胞、7721/Adm细胞内阿霉素药物浓度来提高其对化疗敏感性的.
加热能提高耐药细胞内药物浓度这一结论为介入性热化疗法在克服肝癌耐药性的临床应用提供了可靠的实验依据.
参考文献:
[1]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP.Cytotoxic effect of ther-mochemotherapy carcinoma cell line [J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，1997;18(12):67-68.
[2]Majima H，Kashiwado K，Egaswa S，Okada M，Kudo S.Inter-action between the kinetics of thermotolerance and effect of cis_ diamminedichlorplatinum(11)or bleomycin given at37or43[J].Int J Hyperthermia，1992;8(4):431-442.
[3]Zhang HX，Liu Y，Guo WP，Wang ZM，Gao W，Li WX，Ni DH.Cytotoxic effect of adriamcin hyperthermia on rabbit carci-noma cell line VX-2in vitro [J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;21(12):1203-1205.
[4]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Chen JH.The cytotoxic effect of thermochemotherapy of mitomycin C on human hepatoma cell line-7721[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，1998;19(6):636-638.
[5]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Wu ZQ，Li WX，Guan Y，Xu JL，Ni DH.Synergistic effect of combined use of hyperthermia and adriamycin(ADM)on rabbit cell line VX-2[J].Cancer，1999;18(3):276-278.
[6]Zhang HX，Wang ZM，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Ni DH，Guan Y，Zhang H，Wang Z，Guo WP，Wang YQ，Li WX，Ni DH，Guan Y.Establishment of human multidrug-resistant
hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;20(4):495-499.
[7]Zhang HX，Liu Y，Guo WP，Gao W，Li WX，Ni DH.Compar-ative study of the effect of thermochemotherapy of ADM on hu-man multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cell line(7721/Adm)[J].Di-si Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ)，2000;21(8):964-967.
[8]Cheng AL，Chuang SE，Fine RL，Hanahan D，Folkman J，Tanaka H，Taniguchi T.Inhibition of the membrane transloca-tion and activation of protein kinase C，and potentiation of dox-orubicin-induced apoptosis of hepatocellular carcinoma cells by tamoxifen [J].Biochem-Pharmacol，1998;55(4):523-531.
[9]Nishikawa K，Asaumi J，Kawasaki S，Fitzgerald DJ，Cardarelli CD.Influence of cepharanthin and hyperthermia on the intra-cellular accumulation of adriamycin and Fluo3，an indicator of Ca2+ [J].Anticancer-Res，1998;18(3A):1649-1654.
[10]Versantvoort，Broxterman HJ，Bagrij，Scheper RJ，Twenty man PR.Regulation by glutathiore of drug transport in mul-tidrug-resistant human lung tumour cell lines overexpressing multidrug resisatnce-associated protein [J].Br J Cancer，1995;72:82-89.
[11]Fitzgerald DJ，Willingham MC，Cardarelli CD，Morgon J，Pake H.A monoclonal antibody pseudomonas toxin conjugate that specifically kills multidrug-resistant cells [J].Pro Natl Acad Sci USA，1987;84:4288-4292.
[12]Yang LY，Trujillo JM.Biological characterization of multidrug-resistant human colon carcinoma sublines induced/selected by two methods [J].Cancer Res，1990;50:3218-3225.
[13]Huang M，Liu-G TI，Prat F，Centarti M，Sibille E.The study of innate drug resistance of human hepatocellular carcinoma Bel7402cell line [J].Cancer-Lett，1999;135(1):97-105.
[14]Marucci L，Varticovski L，AriasIM.Effect of a xanthine analog on human hepatocellular carcinoma cells(Alexander)in culture and in xenografts in SCID mice [J].Hepatology，1997;26(5):1195-1202.
[15]Kawai N，Sato M，Sonomura T，Alexander T，Swistel MD，James R.Experimental study of percutaneous hot ethanol injec-tion therapy(PHEIT)by continuous heating device for hepato-cellular carcinoma [J].Nippon Igaku Hoshasen Gakkai Zasshi，1998;58(7):366-368.
编辑 王小仲
第四军医大学唐都医院: 1 介入放射科，
2 眼科，陕西西安710038
作者简介: 郭卫平(1951-)，女(汉族)，山东省冠县人.副主任医师，副教授，主任.Tel.(029)3577454(O)，3577254(H) Email.tdjrfsk @fmmu.edu.cn, http://www.100md.com(郭卫平 刘燕 张洪新 李文献 倪代会 梁智会)