关键词: 细小病毒B19，人;类风湿性关节炎;聚合酶链反应

     0 引言

    成人类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的病因迄今尚不清楚，近年的研究认为，其发病涉及感染、机体因素及免疫功能紊乱等多环节，其中关于人细小病毒B19(B19)感染与RA的相关性，国外相继有报道[1，2] .我们就我国RA患者B19的感染状况以及RA与B19感染的相关关系做一初步研究.

     1 对象和方法

    1.1 对象 23例RA患者血清标本来源于1995-08/1998-08我院免疫科、骨科、中医科及血液内科住院患者.22例RA患者骨髓标本来源于1992-02/1998-08血液室存档骨髓标本.血清标本对照组为健康献血员血清15份，骨髓标本对照组来源于9例缺铁性和巨幼细胞性贫血患者的骨髓.血清标本均自静脉采取3～5mL，分离血清-20℃冰箱保存备用待检. 1.2 方法 ①主要试剂及引物:10×PCR buffer，Taq DNA聚合酶，4×dNTP和琼脂糖，蛋白酶K等.引物同文献[3];②病毒来源:B19阳性对照模板由沙特皇家医院研究中心提供;③血清标本DNA提取同文献[3]:取待检标本50μL加入裂解液100μL中，振荡混匀后，水浴箱依次65℃1h消化，95℃10min灭活，离心(12500g)15min，取上清-20℃冰箱保存待用.骨髓标本DNA提取:取骨髓涂片2～3张，用新手术刀片刮取血膜置Eppendorf中，加入300μL裂解液.55℃温育5min，55℃消化1～2h.加入300μL苯酚抽提1次，将水相移入另一Eppendorf管，加入30μL浓度为3mmol·L-1 的乙酸钠(pH5.6)及750μL无水乙醇 ......