关键词: 单链抗体;肿瘤坏死因子;绿色荧光蛋白;基因表达

     0 引言

    肝癌恶性程度极高，在我国有着较高发病率和死亡率，迄今尚无理想的治疗手段.随着现代分子生物学和免疫学的发展，基因工程抗体的诞生为肿瘤的诊断和治疗带来了希望，尤其是单链抗体的应用成为肿瘤免疫基因治疗的热点.

    我们利用本室克隆的抗肝癌单链抗体(sFv)基因与人肿瘤坏死因子(TNF-α)基因偶连，构建抗肝癌单链双功能抗体与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)融合表达的真核表达载体，并在小鼠成纤维细胞NIH3T3中表达了sFv-TNF-GFP融合蛋白，为肝癌免疫基因治疗的进一步研究奠定了基础.

     1 材料和方法

    1.1 材料 pEGFP-N3质粒(内含GFP基因)由赵利军博士惠赠，抗肝癌sFv基因为本室构建，TNF-α基因由孙志伟博士惠赠.大肠杆菌JM109，pGEM-T载体和磷酸钙转染试剂盒购自Promega公司.限制性内切酶、T4DNA连接酶、X-gal及IPTG购自Gibco公司.PCR引物由上海生物工程公司合成.

    1.2 sFv和TNF-α基因的扩增和克隆 以pGEX-sFv为模板 ......