关键词: 结核分枝杆菌;聚合酶链反应;微孔板杂交

     0 引言

    结核杆菌感染仍是当今世界范围内危害人类健康的严重问题，在发展中国家结核病为一种常见的传染性疾病.目前，结核病的确诊手段主要依据实验室方法进行，其方法有直接涂片染色抗酸杆菌与结核菌的培养与鉴定，但直接涂片染色阳性率低，且不易于确诊，培养法时间长，达不到快速诊断的目的.聚合酶链反应(PCR)技术，作为结核菌的非培养诊断技术，其特异性，敏感性，以及简便快速等优点在临床结核病的快速诊断上得到应用.但是由于受多种因素的影响，使检测结果易出现假阳性及假阴性，给临床确诊带来困难.我们通过设计一对结核菌特异性引物及特异性探针，采用微孔板反向杂交法，对PCR扩增产物进行液相杂交分析，以进一步提高检测结果的特异性和敏感性.

     1 材料和方法

    引物选自结核分枝杆菌染色体基因，扩增片段长度为:123bp[1] ，TB1 5'-CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG-3'，TB2 5'-CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG-3'，探针 5'-GCC CAG TGC GAC ACA-3'在合成时TB15'端标记生物素，TB25'端标记地高辛.临床标本40份，其中痰液标本30份，脑脊液标本10份分别来自西京医院及323医院.PCR反应液组成:10×PCR缓冲液，4×dNTP，引物，无菌去离子水等.杂交液:聚蔗糖400 ......