中药宝宝乐对幼龄厌食大鼠胃泌素及CCK的影响
Effects of Baobaole on gastrin and CCK in anorexia juvenile rats
DU YongPing, WANG Xia, GUO Jun, XIA Tian, SHI Jian
Department of Traditional Chinese Medicine, Xijing Hospital, Department of Health Statistics, Faculty of Preventive Medicine, Fourth Military Medical University, Xian 710033, China, Department of Digestive Diseases, Shaanxi Province TCM Hospital, Xian 710033, China
【Abstract】 AIM: To study the regulatory effects of Baobaole on gastric antrum and cholecystokinin (CCK) in anorexia model of juvenile rats. METHODS: The rat anorexia model, made by simulating the mechnism of children anorexia, was treated with Baobaole and the levels of gastric antrum and CCK in hypothalamous, antrum pyloricm, and plasma of the model were examined by radioimmunoassay (RIA) and compared with those of the group treated by Erbao Granules. RESULTS: The results showed that the gastric antrum level of model rats decreased in antrum pylorium (P<0.05), but no change was observed in plasma. The CCK level in the hypothalamus and plasma of model rats showed a significant increase (P<0.05, P<0.01). The gastrin and CCK levels of the two groups treated by Baobaole and Erbao Granules were normal but the Baobaole group made a more significant decrease in hypothalamic CCK level than Erbao group (P<0.05). CONCLUSION: Baobaole can regulate the secretion and release of gastrin and CCK in central and peripheral areas and may play an important role in inhibiting the secretion and release of CCK in our model hypothalamus.
【Keywords】 anorexia; gastric antrum; CCK; Baobaole; Erbao; rat
【摘要】 目的： 研究运脾平肝复方宝宝乐口服液对小儿厌食症动物模型胃泌素及胆囊收缩素(cholecystokinin, CCK)的调节作用. 方法： 模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄厌食大鼠模型，用宝宝乐口服液治疗，用放免检测技术测定实验动物下丘脑、胃窦部及外周血胃泌素和CCK的含量，并与单纯运脾复方儿宝颗粒对照. 结果： 模型大鼠胃泌素含量胃窦部减少(P<0.05)、血清无明显变化、下丘脑未测出，下丘脑和血浆CCK8浓度均明显增高(131.12±28.56 vs 91.08±18.68， P<0.05；486.95±113.32 vs 262. 15±95.09， P<0.01)；宝宝乐和儿宝颗粒治疗组胃窦部胃泌素含量、下丘脑和血浆CCK8浓度均恢复正常，宝宝乐治疗组下丘脑CCK8浓度回降较儿宝颗粒明显(85.67±22.62 vs108.36±20.97， P<0.05). 结论： 宝宝乐能调节该模型中枢及外周胃泌素和CCK的分泌与释放.
【关键词】 厌食；胃泌素；CCK；宝宝乐口服液;儿宝颗粒；大鼠
0引言
小儿厌食症常见，过去我们模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄大鼠厌食模型[1] ，并对运脾复方儿宝颗粒对该模型中枢和外周胃肠激素的调节作用进行了研究[2]. 在运脾为主的基础上，加入平肝安神药物，研制宝宝乐口服液治疗小儿厌食症取得了良好疗效[3]. 为进一步探讨小儿厌食症的发病机制和运脾复方的作用机制,我们观察了宝宝乐口服液治疗后实验动物中枢及外周胃泌素和胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)的含量变化，并与单纯的运脾复方儿宝颗粒进行了对照.
1材料和方法
1.1材料SD大鼠60只(第四军医大学实验动物中心提供)，35~40日龄，体质量(60±10) g，雌雄各半. 常规鼠饲料由第四军医大学实验动物中心提供，特制饲料用奶粉、鸡蛋、鱼松、豆粉、玉米粉等按一定比例配制[1]. 宝宝乐口服液(组成：苍术、焦山楂、黄芪、党参、陈皮各10 g，白芍、决明子、煅龙骨、煅牡蛎各20 g)由第四军医大学西京医院药剂科提供，儿宝颗粒(组成：苍术、陈皮、山楂、鸡内金各10 g)由南京中医药大学植物药深加工中心提供. 胃泌素放免药盒为中国原子能科学研究院产品，CCK8放免药盒由美国INCSTAR公司(用于脑组织)和第二军医大学神经生物教研室提供(用于血浆)；抑肽酶为丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司产品，500 000 kU/支，使用前用生理盐水稀释为25 kU·L-1.
1.2方法用特制饲料喂养法造模[1]. 实验动物随机分为空白对照组、模型对照组、小剂量组和大剂量组4组，每组15只，各式各样5只. 空白对照组喂常规鼠饲料，其余各组喂特制饲料. 所有大鼠均单笼饲养，自由进食水. 实验过程中每日记录动物进食量. 造模第8日开始灌胃. 空白对照组和模型对照组灌生理盐水，宝宝乐组灌等效量的浓缩宝宝乐口服液(16.9 g·kg-1)，儿宝颗粒组灌等效量的儿宝颗粒(18.8 g·kg-1). d 28 20:00起禁食，d 29处死. 眼眶采血，室温下静置3 h，离心取上清液待测. 10 g·L-1肝素(10 mL·L-1血样)处理试管，干燥备用. 采血前每管加抑肽酶20 mL·L-1血样，眼眶取血后注入肝素管内充分摇匀并立即置4℃冰箱，3 h内4000 r·min-1低温离心10 min，分离血浆，于-70℃保存待测. 取血后将大鼠断头处死，立即取出全脑和胃,入沸生理盐水中煮5 min，分离下丘脑，刮取胃窦部粘膜,用分析天平称质量后置玻璃匀浆管内，加入1 mol·L-1 NAC 1 mL，充分匀浆后倒入塑料试管内，于室温下放置100 min，加入1 mol·L-1 NaOH 1 mL，4000 r·min-1低温离心10 min，取上清液于-70℃保存待测. 按放免药盒说明加样，用美国产16探头Υ记数仪自动绘制标准曲线并打印结果.
统计学处理：用SPSS统计软件进行重复测量设计方差分析以及单因素方差分析.
2结果
实验1 d各组大鼠摄食量无明显差异； 至实验7 d模型组、儿宝颗粒组及宝宝乐组平均摄食量低于正常对照组(g, 14.1±2.1 vs 10.9±2.3, 11.0±1.4, 11.1±2.4; P<0.05)，模型组、儿宝颗粒组及宝宝乐组平均摄食量差异不显著(P>0.05)，说明造模成功. 不同处理组间摄食量差别显著(F=7.634， P=0.000)，药物对幼龄厌食大鼠治疗有效(Tab 1).
表1宝宝乐对幼龄厌食大鼠摄食量的影响(略)
Tab 1Effect of Baobaole on daily food intake of anorexia juvenile rats(略)
2.1宝宝乐对幼龄厌食大鼠胃泌素的影响模型对照组胃窦部胃泌素含量明显低于正常对照组(P<0.05)，宝宝乐、儿宝颗粒治疗组胃窦部胃泌素含量回升，明显高于模型组(P<0.05)，与对照组无显著性差异(P>0.05)；血清胃泌素无明显变化(F=1.760, P=0.167)；下丘脑胃泌素4组均未测出(Tab 2).
表2宝宝乐对幼龄厌食大鼠胃泌素及CCK的影响(略)
Tab 2Effect of Baobaole on gastrin and CCK of anorexia juvenile rats(略)
2.2宝宝乐对幼龄厌食大鼠CCK的影响血浆CCK8含量不同(F=17.234, P=0.000)；模型对照组下丘脑和血浆CCK8浓度均明显增高(P<0.05, P<0.01)；用宝宝乐和儿宝颗粒治疗的模型动物血浆和下丘脑CCK8浓度均明显回降(P<0.01, P<0.05)，与正常动物无明显差异；用宝宝乐治疗的模型动物下丘脑CCK8浓度回降较儿宝颗粒明显(P<0.05, Tab 2).
3讨论
小儿厌食是常见的摄食行为异常，发生率约为12%~34%，对儿童生长发育影响较大，近年来，在“脾主运化”及“脾健不在补贵在运”等中医理论指导下，我们采用病因模拟法成功建立了幼龄大鼠厌食模型[1]并发现该模型下丘脑和外周CCK等多种与摄食控制相关的脑肠肽水平异常，食欲中枢下丘脑外侧区(VMN)和下丘脑腹内侧区(LHA)神经元自发放电频率改变；临床治疗小儿厌食有可靠疗效的运脾复方儿宝颗粒不仅可调节外周血中与摄食有关的肽类激素水平，而且能调节下丘脑食欲中枢神经元的自发放电频率[2，3]. 但是，儿宝颗粒的立法主要是以运脾为主，而多数患儿伴有好动、急躁易怒等肝旺证候，中医辨证是兼有肝旺之证，故在以儿宝颗粒为主的基础上，以运脾平肝为组方原则研制宝宝乐口服液治疗小儿厌食症取得了良好效果[4].
我们假设小儿厌食症的发生，是由于喂养不当导致某些胃肠激素分泌失调，从而抑制摄食中枢，使患儿厌恶进食，摄食量下降[5]. 本研究结果显示，模型动物同时存在摄食量显著减少和下丘脑、血浆CCK8 浓度的增加及胃窦部胃泌素浓度降低，提示胃肠激素分泌失调很可能是导致特制饲料喂养建立的小儿厌食症大鼠模型摄食量下降的重要原因，在运脾基础上加入平肝药物可使实验动物下丘脑CCK8分泌和释放抑制作用更强，使运脾药物更加迅速地发挥治疗作用.
【参考文献】
[1] Du YP, Zhang YP, Wang SC, Shi J, Wang J, Wo SH. Second study on a model of juvenile rat with anorexia [J]. Shanxi Yike Daxue Xuebao (J Shanxi Med Univ), 2000;31(5):401-402.
[2] Du YP, Zhang YP, Wang SC, Shi J, Wu SH. Function and regulation of cholecystokinin,betaendorphin and gastrin in anorexic infantile rats treated with Erbao Granules [J]. World J Gastroenterol, 2001;7(2) :275-280.
[3] Du YP, Zhang YP. Clinical observation in 60 case with anorexia by treating with BaoBaoLe [J]. Zhejiang Zhongyiyao Daxue Xuebao (J Zhejiang TCM Univ), 2000;23(4):19.
[4] Du YP, Zhang YP, Hu SJ, Wang SCH. Effects of Yunpi Fufang on the spontaneous discharges of neurons in LH and VMH of juvenile rat with anorexia [J]. Chin J Neuroanatomy (Engl), 2001;17(2):183-186.
[5] Zhang YP, Du YP, Wang SC, Xia T. A new idea: Central mechanism of children anorexia and Yunpi method [J]. Zhongguo Zhongyi Jichu Yixue Zazhi (J Chin TCM Founcl Mental Med), 1998；4(4)：18.
(第四军医大学： 西京医院中医科， 预防医学系卫生统计学教研室，陕西 西安 710033, 陕西省中医医院消化科，陕西 西安 710003)
编辑许昌泰
基金项目：国家自然科学基金(39670896，30271634)
通讯作者：郭军. Tel. (029)3375955Email. gjmenmail@163.net
作者简介：杜永平(1963)，男(汉族)，山西省离石市人. 副主任医师，副教授. Tel.(029)3375517Email.dypzyp@pub.xaonline.com, http://www.100md.com(杜永平，王霞，郭军，夏天，史健)
DU YongPing, WANG Xia, GUO Jun, XIA Tian, SHI Jian
Department of Traditional Chinese Medicine, Xijing Hospital, Department of Health Statistics, Faculty of Preventive Medicine, Fourth Military Medical University, Xian 710033, China, Department of Digestive Diseases, Shaanxi Province TCM Hospital, Xian 710033, China
【Abstract】 AIM: To study the regulatory effects of Baobaole on gastric antrum and cholecystokinin (CCK) in anorexia model of juvenile rats. METHODS: The rat anorexia model, made by simulating the mechnism of children anorexia, was treated with Baobaole and the levels of gastric antrum and CCK in hypothalamous, antrum pyloricm, and plasma of the model were examined by radioimmunoassay (RIA) and compared with those of the group treated by Erbao Granules. RESULTS: The results showed that the gastric antrum level of model rats decreased in antrum pylorium (P<0.05), but no change was observed in plasma. The CCK level in the hypothalamus and plasma of model rats showed a significant increase (P<0.05, P<0.01). The gastrin and CCK levels of the two groups treated by Baobaole and Erbao Granules were normal but the Baobaole group made a more significant decrease in hypothalamic CCK level than Erbao group (P<0.05). CONCLUSION: Baobaole can regulate the secretion and release of gastrin and CCK in central and peripheral areas and may play an important role in inhibiting the secretion and release of CCK in our model hypothalamus.
【Keywords】 anorexia; gastric antrum; CCK; Baobaole; Erbao; rat
【摘要】 目的： 研究运脾平肝复方宝宝乐口服液对小儿厌食症动物模型胃泌素及胆囊收缩素(cholecystokinin, CCK)的调节作用. 方法： 模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄厌食大鼠模型，用宝宝乐口服液治疗，用放免检测技术测定实验动物下丘脑、胃窦部及外周血胃泌素和CCK的含量，并与单纯运脾复方儿宝颗粒对照. 结果： 模型大鼠胃泌素含量胃窦部减少(P<0.05)、血清无明显变化、下丘脑未测出，下丘脑和血浆CCK8浓度均明显增高(131.12±28.56 vs 91.08±18.68， P<0.05；486.95±113.32 vs 262. 15±95.09， P<0.01)；宝宝乐和儿宝颗粒治疗组胃窦部胃泌素含量、下丘脑和血浆CCK8浓度均恢复正常，宝宝乐治疗组下丘脑CCK8浓度回降较儿宝颗粒明显(85.67±22.62 vs108.36±20.97， P<0.05). 结论： 宝宝乐能调节该模型中枢及外周胃泌素和CCK的分泌与释放.
【关键词】 厌食；胃泌素；CCK；宝宝乐口服液;儿宝颗粒；大鼠
0引言
小儿厌食症常见，过去我们模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄大鼠厌食模型[1] ，并对运脾复方儿宝颗粒对该模型中枢和外周胃肠激素的调节作用进行了研究[2]. 在运脾为主的基础上，加入平肝安神药物，研制宝宝乐口服液治疗小儿厌食症取得了良好疗效[3]. 为进一步探讨小儿厌食症的发病机制和运脾复方的作用机制,我们观察了宝宝乐口服液治疗后实验动物中枢及外周胃泌素和胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)的含量变化，并与单纯的运脾复方儿宝颗粒进行了对照.
1材料和方法
1.1材料SD大鼠60只(第四军医大学实验动物中心提供)，35~40日龄，体质量(60±10) g，雌雄各半. 常规鼠饲料由第四军医大学实验动物中心提供，特制饲料用奶粉、鸡蛋、鱼松、豆粉、玉米粉等按一定比例配制[1]. 宝宝乐口服液(组成：苍术、焦山楂、黄芪、党参、陈皮各10 g，白芍、决明子、煅龙骨、煅牡蛎各20 g)由第四军医大学西京医院药剂科提供，儿宝颗粒(组成：苍术、陈皮、山楂、鸡内金各10 g)由南京中医药大学植物药深加工中心提供. 胃泌素放免药盒为中国原子能科学研究院产品，CCK8放免药盒由美国INCSTAR公司(用于脑组织)和第二军医大学神经生物教研室提供(用于血浆)；抑肽酶为丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司产品，500 000 kU/支，使用前用生理盐水稀释为25 kU·L-1.
1.2方法用特制饲料喂养法造模[1]. 实验动物随机分为空白对照组、模型对照组、小剂量组和大剂量组4组，每组15只，各式各样5只. 空白对照组喂常规鼠饲料，其余各组喂特制饲料. 所有大鼠均单笼饲养，自由进食水. 实验过程中每日记录动物进食量. 造模第8日开始灌胃. 空白对照组和模型对照组灌生理盐水，宝宝乐组灌等效量的浓缩宝宝乐口服液(16.9 g·kg-1)，儿宝颗粒组灌等效量的儿宝颗粒(18.8 g·kg-1). d 28 20:00起禁食，d 29处死. 眼眶采血，室温下静置3 h，离心取上清液待测. 10 g·L-1肝素(10 mL·L-1血样)处理试管，干燥备用. 采血前每管加抑肽酶20 mL·L-1血样，眼眶取血后注入肝素管内充分摇匀并立即置4℃冰箱，3 h内4000 r·min-1低温离心10 min，分离血浆，于-70℃保存待测. 取血后将大鼠断头处死，立即取出全脑和胃,入沸生理盐水中煮5 min，分离下丘脑，刮取胃窦部粘膜,用分析天平称质量后置玻璃匀浆管内，加入1 mol·L-1 NAC 1 mL，充分匀浆后倒入塑料试管内，于室温下放置100 min，加入1 mol·L-1 NaOH 1 mL，4000 r·min-1低温离心10 min，取上清液于-70℃保存待测. 按放免药盒说明加样，用美国产16探头Υ记数仪自动绘制标准曲线并打印结果.
统计学处理：用SPSS统计软件进行重复测量设计方差分析以及单因素方差分析.
2结果
实验1 d各组大鼠摄食量无明显差异； 至实验7 d模型组、儿宝颗粒组及宝宝乐组平均摄食量低于正常对照组(g, 14.1±2.1 vs 10.9±2.3, 11.0±1.4, 11.1±2.4; P<0.05)，模型组、儿宝颗粒组及宝宝乐组平均摄食量差异不显著(P>0.05)，说明造模成功. 不同处理组间摄食量差别显著(F=7.634， P=0.000)，药物对幼龄厌食大鼠治疗有效(Tab 1).
表1宝宝乐对幼龄厌食大鼠摄食量的影响(略)
Tab 1Effect of Baobaole on daily food intake of anorexia juvenile rats(略)
2.1宝宝乐对幼龄厌食大鼠胃泌素的影响模型对照组胃窦部胃泌素含量明显低于正常对照组(P<0.05)，宝宝乐、儿宝颗粒治疗组胃窦部胃泌素含量回升，明显高于模型组(P<0.05)，与对照组无显著性差异(P>0.05)；血清胃泌素无明显变化(F=1.760, P=0.167)；下丘脑胃泌素4组均未测出(Tab 2).
表2宝宝乐对幼龄厌食大鼠胃泌素及CCK的影响(略)
Tab 2Effect of Baobaole on gastrin and CCK of anorexia juvenile rats(略)
2.2宝宝乐对幼龄厌食大鼠CCK的影响血浆CCK8含量不同(F=17.234, P=0.000)；模型对照组下丘脑和血浆CCK8浓度均明显增高(P<0.05, P<0.01)；用宝宝乐和儿宝颗粒治疗的模型动物血浆和下丘脑CCK8浓度均明显回降(P<0.01, P<0.05)，与正常动物无明显差异；用宝宝乐治疗的模型动物下丘脑CCK8浓度回降较儿宝颗粒明显(P<0.05, Tab 2).
3讨论
小儿厌食是常见的摄食行为异常，发生率约为12%~34%，对儿童生长发育影响较大，近年来，在“脾主运化”及“脾健不在补贵在运”等中医理论指导下，我们采用病因模拟法成功建立了幼龄大鼠厌食模型[1]并发现该模型下丘脑和外周CCK等多种与摄食控制相关的脑肠肽水平异常，食欲中枢下丘脑外侧区(VMN)和下丘脑腹内侧区(LHA)神经元自发放电频率改变；临床治疗小儿厌食有可靠疗效的运脾复方儿宝颗粒不仅可调节外周血中与摄食有关的肽类激素水平，而且能调节下丘脑食欲中枢神经元的自发放电频率[2，3]. 但是，儿宝颗粒的立法主要是以运脾为主，而多数患儿伴有好动、急躁易怒等肝旺证候，中医辨证是兼有肝旺之证，故在以儿宝颗粒为主的基础上，以运脾平肝为组方原则研制宝宝乐口服液治疗小儿厌食症取得了良好效果[4].
我们假设小儿厌食症的发生，是由于喂养不当导致某些胃肠激素分泌失调，从而抑制摄食中枢，使患儿厌恶进食，摄食量下降[5]. 本研究结果显示，模型动物同时存在摄食量显著减少和下丘脑、血浆CCK8 浓度的增加及胃窦部胃泌素浓度降低，提示胃肠激素分泌失调很可能是导致特制饲料喂养建立的小儿厌食症大鼠模型摄食量下降的重要原因，在运脾基础上加入平肝药物可使实验动物下丘脑CCK8分泌和释放抑制作用更强，使运脾药物更加迅速地发挥治疗作用.
【参考文献】
[1] Du YP, Zhang YP, Wang SC, Shi J, Wang J, Wo SH. Second study on a model of juvenile rat with anorexia [J]. Shanxi Yike Daxue Xuebao (J Shanxi Med Univ), 2000;31(5):401-402.
[2] Du YP, Zhang YP, Wang SC, Shi J, Wu SH. Function and regulation of cholecystokinin,betaendorphin and gastrin in anorexic infantile rats treated with Erbao Granules [J]. World J Gastroenterol, 2001;7(2) :275-280.
[3] Du YP, Zhang YP. Clinical observation in 60 case with anorexia by treating with BaoBaoLe [J]. Zhejiang Zhongyiyao Daxue Xuebao (J Zhejiang TCM Univ), 2000;23(4):19.
[4] Du YP, Zhang YP, Hu SJ, Wang SCH. Effects of Yunpi Fufang on the spontaneous discharges of neurons in LH and VMH of juvenile rat with anorexia [J]. Chin J Neuroanatomy (Engl), 2001;17(2):183-186.
[5] Zhang YP, Du YP, Wang SC, Xia T. A new idea: Central mechanism of children anorexia and Yunpi method [J]. Zhongguo Zhongyi Jichu Yixue Zazhi (J Chin TCM Founcl Mental Med), 1998；4(4)：18.
(第四军医大学： 西京医院中医科， 预防医学系卫生统计学教研室，陕西 西安 710033, 陕西省中医医院消化科，陕西 西安 710003)
编辑许昌泰
基金项目：国家自然科学基金(39670896，30271634)
通讯作者：郭军. Tel. (029)3375955Email. gjmenmail@163.net
作者简介：杜永平(1963)，男(汉族)，山西省离石市人. 副主任医师，副教授. Tel.(029)3375517Email.dypzyp@pub.xaonline.com, http://www.100md.com(杜永平，王霞，郭军，夏天，史健)