脂质体包封刺五加皂甙对肝癌细胞抑制的增效作用
【摘要】 目的 通过体外实验，观察脂质体包封刺五加皂甙对肝癌细胞(HepG2)抑制的增效作用。方法 脂质体包封刺五加皂甙后，以不同浓度、时间作用于HepG2细胞；MTT法测其活性；从而评价药物的效果。结果 1mg/ml刺五加皂甙(48h)抑制率为19.3%，包封脂质体后抑制率提高到59%，增效3.06倍，T150分别是1.40、1.00；而作用72h后从48.40%提高到83.40%，T150分别是1.04、0.81。结论 脂质体包封刺五加皂甙对肝癌细胞(HepG2)确有抑制增效作用，且有量效、时效关系。
【关键词】 脂质体；刺五加皂甙
脂质体最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体。
刺五加，因五出数掌状复叶、枝密被长刺而得名。其味辛、性温，具有在似有参的“扶正固本”作用，为良好的强壮剂，可增强机体的防疫机能，有促性腺、抗疲劳和防止记忆衰退等活性，医学上被称之为适应原样药物。特别是所含的糖类和甙类正在引起国内外学者的注视。本室用脂质体包封刺五加皂甙(acanthophopanaxenticosus，ASS)，以观察其对肝癌细胞抑制的增效作用。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
刺五加皂甙由深圳市中心医院消化科提供；胆固醇：上海化学试剂公司出品；大豆磷脂：上海油脂一厂出品；1640培养液，2，3-二苯基溴化四唑(MTT)均由美国Sigma公司出品；10%小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司出品)；HepG2细胞株(北大医院肝病研究所)；ELx800全自动酶标仪(产地美国)。
1.2 脂质体的制备 见图1(略)。
1.3 MTT法对HepG2细胞活力的测定
将HepG2细胞株按2.4×104个/ml(48h培养)、2×104个/ml(72h培养)浓度接种于96孔板，0.1ml/孔，5%CO2、37℃培养，过夜；弃去培养液，分别换以含有不同浓度药物的培养基，0.15ml/孔，每个浓度4孔，共设6个浓度，另设不加药物的细胞组作对照。药物作用48h、72h后分别加入MTT 0.15mg/ml，100μl/孔，培养4h后，弃上清液，加二甲亚砜(DMSO)100μl/孔，振荡器混匀，酶标仪读取OD值，检测波长570nm，参考波长630nm。细胞抑制率=[(对照组OD-实验组OD)/对照组OD]×100%。
2 结果
采用统计学直线回归方程y=A+Bx换算得半抑制浓度(T150)和相关系数(r)，见表1。表1 刺五加对HepG2细胞抑制增殖的影响(略)
3 讨论
MTT比色法主要原理在于检测细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的活力，细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能[1]，它在一定程度上反映了细胞的生存活力。
刺五加为五加科植物，具有益气健脾，补肾安神等作用，还可增强抗肿瘤活性和提高特异性抗体生成的作用[2，3]。脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。表1结果显示，1mg/ml刺五加皂甙(48h)抑制率为19.3%，包封脂质体后抑制率提高到59%，增效3.06倍，T150分别是1.40、1.00；而作用72h后从48.40%提高到83.40%，T150分别是1.04、0.81。本实验证实，脂质体包封刺五加皂甙对肝癌细胞(HepG2)确有抑制增效作用，且有量效、时效关系。
【参考文献】
1 杨联萍，张淑莲，张亚红，等.青蒿琥酯抗乙型肝炎病毒体外实验研究.中华中西医杂志，2003，4(12)：1795-1796.
2 叶红军，吴远，房家智，等.刺五加皂甙对胃癌细胞膜电位和亚细胞结构的影响.中华消化杂志，2002，22(1)：48-49.
3 叶红军，叶炯贤，房家智，等.刺五加皂甙对肝癌细胞细胞动力学的影响.中华肝脏病杂志，2000，8(3)：134.
作者单位：510602 广东广州，解放军第458医院全军传染病中心
(编辑：悦铭), 百拇医药(杨联萍，易学瑞，袁有成，孔祥平)
【关键词】 脂质体；刺五加皂甙
脂质体最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体。
刺五加，因五出数掌状复叶、枝密被长刺而得名。其味辛、性温，具有在似有参的“扶正固本”作用，为良好的强壮剂，可增强机体的防疫机能，有促性腺、抗疲劳和防止记忆衰退等活性，医学上被称之为适应原样药物。特别是所含的糖类和甙类正在引起国内外学者的注视。本室用脂质体包封刺五加皂甙(acanthophopanaxenticosus，ASS)，以观察其对肝癌细胞抑制的增效作用。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
刺五加皂甙由深圳市中心医院消化科提供；胆固醇：上海化学试剂公司出品；大豆磷脂：上海油脂一厂出品；1640培养液，2，3-二苯基溴化四唑(MTT)均由美国Sigma公司出品；10%小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司出品)；HepG2细胞株(北大医院肝病研究所)；ELx800全自动酶标仪(产地美国)。
1.2 脂质体的制备 见图1(略)。
1.3 MTT法对HepG2细胞活力的测定
将HepG2细胞株按2.4×104个/ml(48h培养)、2×104个/ml(72h培养)浓度接种于96孔板，0.1ml/孔，5%CO2、37℃培养，过夜；弃去培养液，分别换以含有不同浓度药物的培养基，0.15ml/孔，每个浓度4孔，共设6个浓度，另设不加药物的细胞组作对照。药物作用48h、72h后分别加入MTT 0.15mg/ml，100μl/孔，培养4h后，弃上清液，加二甲亚砜(DMSO)100μl/孔，振荡器混匀，酶标仪读取OD值，检测波长570nm，参考波长630nm。细胞抑制率=[(对照组OD-实验组OD)/对照组OD]×100%。
2 结果
采用统计学直线回归方程y=A+Bx换算得半抑制浓度(T150)和相关系数(r)，见表1。表1 刺五加对HepG2细胞抑制增殖的影响(略)
3 讨论
MTT比色法主要原理在于检测细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的活力，细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能[1]，它在一定程度上反映了细胞的生存活力。
刺五加为五加科植物，具有益气健脾，补肾安神等作用，还可增强抗肿瘤活性和提高特异性抗体生成的作用[2，3]。脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。表1结果显示，1mg/ml刺五加皂甙(48h)抑制率为19.3%，包封脂质体后抑制率提高到59%，增效3.06倍，T150分别是1.40、1.00；而作用72h后从48.40%提高到83.40%，T150分别是1.04、0.81。本实验证实，脂质体包封刺五加皂甙对肝癌细胞(HepG2)确有抑制增效作用，且有量效、时效关系。
【参考文献】
1 杨联萍，张淑莲，张亚红，等.青蒿琥酯抗乙型肝炎病毒体外实验研究.中华中西医杂志，2003，4(12)：1795-1796.
2 叶红军，吴远，房家智，等.刺五加皂甙对胃癌细胞膜电位和亚细胞结构的影响.中华消化杂志，2002，22(1)：48-49.
3 叶红军，叶炯贤，房家智，等.刺五加皂甙对肝癌细胞细胞动力学的影响.中华肝脏病杂志，2000，8(3)：134.
作者单位：510602 广东广州，解放军第458医院全军传染病中心
(编辑：悦铭), 百拇医药(杨联萍，易学瑞，袁有成，孔祥平)