免疫正常及免疫抑制大鼠口服施保利通对刺激细胞因子产生及抗体应答的疗效评价
从紫锥菊、侧柏叶、赝靛根中提取液——植物免疫调节剂(施保利通®)已被证实具有免疫调节活性。用于人类的疾病治疗，主要是克服免疫低下，从而预防和治疗上呼吸道感染。施保利通®的免疫调节活性不仅被临床验证所证实，更被药理模型所证实。本项研究观察口服施保利通®产生的免疫调节作用。
研究目的
证实口服施保利通®后是产生全身效应还是局部作用，这主要通过量化血液中细胞因子的浓度来评价。
施保利通®的适应证之一是暂时性免疫功能低下，为了观察到该药对免疫受抑制动物的已降低免疫指征的恢复程度这一指标，研究者给免疫抑制的老龄大鼠或接受氢化可的松治疗而致免疫抑制的大鼠，喂服施保利通®(剂量与人口服相似)，检测其对绵羊红细胞(SRBC)的抗体应答，并用斑块形成细胞(PFC)实验评价施保利通®的全身效应。
, 百拇医药
实验方法
测量细胞因子产生：给予4周龄雄性NMRI大鼠[体重(20～30)
g/只]口服施保利通®，共9天。治疗组与对照组：5只/组/天。
对SRBC的抗体应答：
实验动物 12月龄大鼠(C3H/HeJ，25-30
g/只)；或接受氢化可的松治疗导致免疫抑制的雄性NMRI大鼠[4周龄，(20～30)
g/只]；
分组 (1)将3H/HeJ大鼠随机分为2组，10只/组，口服给药，(2)将雄性NMRI大鼠随机分为3组，6只/组，第一组接受标准饮食，第二组标准饮食+氢化可的松(25
, 百拇医药
mg/kg，在接受免疫的2天前腹腔注射给药)，第三组标准饮食+氢化可的松(25
mg/kg，在接受免疫的2天前腹腔注射给药)+施保利通®。
给药方法
连续7天给予施保利通®，在第4天时，腹腔注射0.2
mk浓度为3%的SRBC，使其产生免疫，4天后，用PFC实验来观察脾脏产生抗体细胞的数量。
主要实验结果
细胞因子的产生
血清细胞因子：在实验期间(给药的1～9天中)两组NMRI大鼠的血清细胞因子(白介素-2、γ干扰素、GM-CSF、α肿瘤坏死因子)的产生无显著差异。
, http://www.100md.com
脾脏细胞产生的细胞因子：在实验期间(给药的1～9天中)，相对于对照组，治疗组NMRI大鼠的脾脏细胞产生更多的细胞因子(白介素-2、γ干扰素、GM-CSF)。这种由脾脏细胞产生细胞因子的差异性从服药的第一天持续至服药的第9天，给药的第3天疗效最显著。治疗组脾脏细胞可产生较对照组高达7倍的白介素-2，高达13倍的GM-CSF，高达60倍的γ干扰素(表1)。
表1.
口服施保利通®对大鼠脾脏细胞产生白介素-2,γ干扰素,及重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响(体内)
白介素2(pg/ml)
γ干扰素(pg/ml)
GN-CSF(pg/ml)
, http://www.100md.com
分组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
细胞培养基
42*
68*
56*
3430±1078
6.9*
, http://www.100md.com
88.5±30.4
+刀豆蛋白A
1371±86
2500±141
19130±3578
85418±27319
374±56
660±38.2
+脂多糖
192±168
454±164
136700
, 百拇医药
184470
656.5±74.2
1523±382.5
注：施保利通®用水口服，平均剂量为260
mk/kg，连续给药3天。最后一次给药后的24小时内脾细胞开始繁殖。用ELISA进行细胞因子测定。*具有统计学上的差异性
巨噬细胞产生的细胞因子：治疗组产生更多的白介素-1和α肿瘤坏死因子，在给药的第1天即可观察到治疗组产生白介素-1，在给药的第3天可观察到产生α肿瘤坏死因子，并且这种效应在服药期间一直持续(表2)。
表2.口服施保利通对腹膜巨噬细胞产生细胞因子的影响
, 百拇医药 白介素2(pg/ml)
α肿瘤坏死因子(pg/ml)
分组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
细胞培养基
30.3±9
56.8±18.5
253±46
426±26
, http://www.100md.com +脂多糖
25.5±11
282±123
1130±284
4493±1232
注：施保利通用水口服，平均剂量为260
μk/kg，连续给药3天。最后一次给药后的24小时内脾细胞开始繁殖。用ELISA进行细胞因子测定。
对SRBC产生抗体应答
1. 给予12月龄C3H/HeJ大鼠施保利通®后，可显著增加脾脏重量和脾脏中形成抗体细胞的总数量(表3)。
表3.
, http://www.100md.com
老龄C3H/HeJ大鼠口服施保利通对SRBC产生抗体应答的影响
分组
PFC数量/106脾细胞
血细胞凝集反应滴度
脾重量(g)
细胞数量/脾
对照组
917±140
1189±242
0.14±0.02
, http://www.100md.com 7.4±2×107
施保利通组
1038±475
1920±1491
0.21±0.08*
11.6±3.1×107
注：12月龄C3H/HeJ 大鼠，平均口服剂量为309μk/kg，连续7天。在第4天时用SRBC使其获得免疫。PFC实验在第8天开始。每组10只大鼠，*P<0.05t检验。
2.
接受氢化可的松的NMRI大鼠免疫功能受到抑制，表现为脾脏重量减轻，脾脏细胞数量减少，对SRBC产生的抗体应答减弱。
, 百拇医药
3. 口服施保利通®可抵消氢化可的松产生的免疫抑制，表现为脾脏重量、脾脏细胞数量、PFC数量、抗SRBC血清滴度的改善，并达到正常对照组水平(表4)。
表4. 免疫抑制的NMRI大鼠口服施保利通对SRBC产生抗体应答的影响
分组
脾重量(g)
细胞数量/脾
PFC数量
/106脾细胞
血细胞凝集
反应滴度
对照组
, 百拇医药
0.19±0.02
6.1±0.1×107
730±379
1283±1140
氢化可的松组
0.15±0.02
3.8±1.7×107
231±303
378±508
氢化可的松+施保利通组
0.17±0.01
5.9±0.8×107
, 百拇医药
1004±609
1760±944
注：平均口服剂量为230 μk/kg，连续7天。在第4天时用SRBC使其获得免疫。PFC实验在第8天开始在获得免疫前2天氢化可的松25 mg/kgI.p. 每组6只大鼠，P<0.05第2组与第1组比较第3组相对第2组P<0.05(t检验)。
讨论与结论
本实验中健康NMRI大鼠口服施保利通®，对其血清细胞因子的产生无影响，但对脾脏细胞及腹膜巨噬细胞产生细胞因子有促进作用。故推论，施保利通®中的免疫调节活性成份与肠道及上呼吸道接触后，可刺激细胞分泌细胞因子。
16月龄大鼠对SRBC的抗体应答能力比年轻大鼠下降80%，这可能是T淋巴细胞缺陷所致。而口服施保利通®可修正T淋巴细胞缺陷。
口服施保利通®不仅可增加PFC数量和血细胞凝集滴度，而且对脾脏的重量和脾脏细胞数量产生影响，但却对健康年轻大鼠不产生影响。说明施保利通®不影响正常平衡免疫系统，只对紊乱的免疫系统产生调节作用。
氢化可的松导致的免疫抑制与T淋巴细胞减少及白介素-2产生减少相关，口服施保利通®可对其产生修正调节作用，通过口服施保利通®可使低下的免疫系统恢复功能。, 百拇医药
研究目的
证实口服施保利通®后是产生全身效应还是局部作用，这主要通过量化血液中细胞因子的浓度来评价。
施保利通®的适应证之一是暂时性免疫功能低下，为了观察到该药对免疫受抑制动物的已降低免疫指征的恢复程度这一指标，研究者给免疫抑制的老龄大鼠或接受氢化可的松治疗而致免疫抑制的大鼠，喂服施保利通®(剂量与人口服相似)，检测其对绵羊红细胞(SRBC)的抗体应答，并用斑块形成细胞(PFC)实验评价施保利通®的全身效应。
, 百拇医药
实验方法
测量细胞因子产生：给予4周龄雄性NMRI大鼠[体重(20～30)
g/只]口服施保利通®，共9天。治疗组与对照组：5只/组/天。
对SRBC的抗体应答：
实验动物 12月龄大鼠(C3H/HeJ，25-30
g/只)；或接受氢化可的松治疗导致免疫抑制的雄性NMRI大鼠[4周龄，(20～30)
g/只]；
分组 (1)将3H/HeJ大鼠随机分为2组，10只/组，口服给药，(2)将雄性NMRI大鼠随机分为3组，6只/组，第一组接受标准饮食，第二组标准饮食+氢化可的松(25
, 百拇医药
mg/kg，在接受免疫的2天前腹腔注射给药)，第三组标准饮食+氢化可的松(25
mg/kg，在接受免疫的2天前腹腔注射给药)+施保利通®。
给药方法
连续7天给予施保利通®，在第4天时，腹腔注射0.2
mk浓度为3%的SRBC，使其产生免疫，4天后，用PFC实验来观察脾脏产生抗体细胞的数量。
主要实验结果
细胞因子的产生
血清细胞因子：在实验期间(给药的1～9天中)两组NMRI大鼠的血清细胞因子(白介素-2、γ干扰素、GM-CSF、α肿瘤坏死因子)的产生无显著差异。
, http://www.100md.com
脾脏细胞产生的细胞因子：在实验期间(给药的1～9天中)，相对于对照组，治疗组NMRI大鼠的脾脏细胞产生更多的细胞因子(白介素-2、γ干扰素、GM-CSF)。这种由脾脏细胞产生细胞因子的差异性从服药的第一天持续至服药的第9天，给药的第3天疗效最显著。治疗组脾脏细胞可产生较对照组高达7倍的白介素-2，高达13倍的GM-CSF，高达60倍的γ干扰素(表1)。
表1.
口服施保利通®对大鼠脾脏细胞产生白介素-2,γ干扰素,及重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响(体内)
白介素2(pg/ml)
γ干扰素(pg/ml)
GN-CSF(pg/ml)
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分组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
细胞培养基
42*
68*
56*
3430±1078
6.9*
, http://www.100md.com
88.5±30.4
+刀豆蛋白A
1371±86
2500±141
19130±3578
85418±27319
374±56
660±38.2
+脂多糖
192±168
454±164
136700
, 百拇医药
184470
656.5±74.2
1523±382.5
注：施保利通®用水口服，平均剂量为260
mk/kg，连续给药3天。最后一次给药后的24小时内脾细胞开始繁殖。用ELISA进行细胞因子测定。*具有统计学上的差异性
巨噬细胞产生的细胞因子：治疗组产生更多的白介素-1和α肿瘤坏死因子，在给药的第1天即可观察到治疗组产生白介素-1，在给药的第3天可观察到产生α肿瘤坏死因子，并且这种效应在服药期间一直持续(表2)。
表2.口服施保利通对腹膜巨噬细胞产生细胞因子的影响
, 百拇医药 白介素2(pg/ml)
α肿瘤坏死因子(pg/ml)
分组
对照组
施保利通组
对照组
施保利通组
细胞培养基
30.3±9
56.8±18.5
253±46
426±26
, http://www.100md.com +脂多糖
25.5±11
282±123
1130±284
4493±1232
注：施保利通用水口服，平均剂量为260
μk/kg，连续给药3天。最后一次给药后的24小时内脾细胞开始繁殖。用ELISA进行细胞因子测定。
对SRBC产生抗体应答
1. 给予12月龄C3H/HeJ大鼠施保利通®后，可显著增加脾脏重量和脾脏中形成抗体细胞的总数量(表3)。
表3.
, http://www.100md.com
老龄C3H/HeJ大鼠口服施保利通对SRBC产生抗体应答的影响
分组
PFC数量/106脾细胞
血细胞凝集反应滴度
脾重量(g)
细胞数量/脾
对照组
917±140
1189±242
0.14±0.02
, http://www.100md.com 7.4±2×107
施保利通组
1038±475
1920±1491
0.21±0.08*
11.6±3.1×107
注：12月龄C3H/HeJ 大鼠，平均口服剂量为309μk/kg，连续7天。在第4天时用SRBC使其获得免疫。PFC实验在第8天开始。每组10只大鼠，*P<0.05t检验。
2.
接受氢化可的松的NMRI大鼠免疫功能受到抑制，表现为脾脏重量减轻，脾脏细胞数量减少，对SRBC产生的抗体应答减弱。
, 百拇医药
3. 口服施保利通®可抵消氢化可的松产生的免疫抑制，表现为脾脏重量、脾脏细胞数量、PFC数量、抗SRBC血清滴度的改善，并达到正常对照组水平(表4)。
表4. 免疫抑制的NMRI大鼠口服施保利通对SRBC产生抗体应答的影响
分组
脾重量(g)
细胞数量/脾
PFC数量
/106脾细胞
血细胞凝集
反应滴度
对照组
, 百拇医药
0.19±0.02
6.1±0.1×107
730±379
1283±1140
氢化可的松组
0.15±0.02
3.8±1.7×107
231±303
378±508
氢化可的松+施保利通组
0.17±0.01
5.9±0.8×107
, 百拇医药
1004±609
1760±944
注：平均口服剂量为230 μk/kg，连续7天。在第4天时用SRBC使其获得免疫。PFC实验在第8天开始在获得免疫前2天氢化可的松25 mg/kgI.p. 每组6只大鼠，P<0.05第2组与第1组比较第3组相对第2组P<0.05(t检验)。
讨论与结论
本实验中健康NMRI大鼠口服施保利通®，对其血清细胞因子的产生无影响，但对脾脏细胞及腹膜巨噬细胞产生细胞因子有促进作用。故推论，施保利通®中的免疫调节活性成份与肠道及上呼吸道接触后，可刺激细胞分泌细胞因子。
16月龄大鼠对SRBC的抗体应答能力比年轻大鼠下降80%，这可能是T淋巴细胞缺陷所致。而口服施保利通®可修正T淋巴细胞缺陷。
口服施保利通®不仅可增加PFC数量和血细胞凝集滴度，而且对脾脏的重量和脾脏细胞数量产生影响，但却对健康年轻大鼠不产生影响。说明施保利通®不影响正常平衡免疫系统，只对紊乱的免疫系统产生调节作用。
氢化可的松导致的免疫抑制与T淋巴细胞减少及白介素-2产生减少相关，口服施保利通®可对其产生修正调节作用，通过口服施保利通®可使低下的免疫系统恢复功能。, 百拇医药