脓毒症临床实验免疫指标研究进展
孙成栋 张淑文 董军【关键词】 脓毒症； 免疫； 细胞因子
脓毒症是临床危重患者主要的死亡原因之一，在美国每年约有54万脓毒症患者，其中21.5万患者终因脓毒症而死亡〔1〕,随着对脓毒症病理生理过程认识的加深和现代分子生物学技术的应用，人们对于脓毒症的发病机制有了更深了解，大量研究表明脓毒症的发生与免疫功能紊乱密切相关。因此，深入探讨脓毒症中免疫功能紊乱的病理生理基础可进一步阐明脓毒症的发病机制，并为其预防和治疗开拓新的思路，研究中选取何种指标评价脓毒症患者免疫功能的变化程度及药物的疗效尤为重要，现就脓毒症的免疫指标进行总结与评价。
1 特异性免疫
1.1 核转录因子-κB(NF-κB)：NF-κB活化是各种因子的启动因子，启动各个因子的基因转录，NF-κB活化不但引起炎症因子的过度释放，还与机体的免疫抑制有关，这与脓毒症的发生有重要关系。维持NF-κB在合适水平，将有利于免疫功能恢复，实验中可测定肺泡巨噬细胞核蛋白提取物或分离外周血单核细胞，用Bradford法测定蛋白〔2〕，用凝胶电泳迁移率测定NF-κB的活性。其方法如下：①NF-κB同源寡核苷酸片段的标记；②标记寡核苷酸片段的纯化；③结合反应；④质量分数为6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)200 V电泳1.5 h；⑤放射自显影，-70 ℃曝光48~72 h，自动洗片机冲洗；⑥自身竞争抑制试验。结果判断：①放射自显影结果出现较游离探针明显滞后带，自身竞争抑制试验使滞后带明显减弱或消失；②用四星图像软件分析系统(SXIMAGE)软件测定其灰度值(A值),脓毒症患者该因子的活性显著增高。
1.2 Th1/Th2与CD+4阳性细胞计数：T辅助细胞(Th)根据功能不同可分为Th1和Th2两个亚群,Th1细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2、6、8(IL-2、6、8),促进细胞免疫；Th2细胞分泌IL-10和IL-4,促进体液免疫。Th1/Th2平衡变化是体内炎症反应与抗炎反应免疫平衡变化的基础,与患者预后关系密切。Th1/Th2平衡向Th2方向偏移，可能是导致脓毒性休克的重要因素之一〔3〕。Th细胞亚群测定采用流式细胞计(FACS)检测全血细胞，静脉全血2 ml溶血清除红细胞后加入荧光标记CD4抗体，佛波醇脂(PMA)、伊诺霉素(lonmycin)、Monensin处理后加入标记IFN-γ；抗体(PE)、IL-4抗体(FITC)，FACS计数CD+4细胞中INF-γ+细胞(Th1)、IL-4+细胞(Th2)百分比〔4〕。亦可进行CD4+阳性细胞计数来反映Th1细胞的功能〔5〕 ......
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