运用质子磁共振波谱研究培补肝肾中药治疗帕金森病疗效机制
【关键词】 帕金森病；培补肝肾中药；磁共振波谱；纹状体；恒河猴
0引言
帕金森病(Parkinson's disease, PD)是中老年人神经系统常见疾病. 其特征性病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元变性减少，导致纹状体内多巴胺浓度明显下降[1，2]. 我们既往的实验表明[3，4]，培补肝肾中药能有效改善PD患者的临床症状. 我们通过运用培补肝肾中药对偏侧PD模型猴治疗前后进行1H-MRS分析对照研究，为中药治疗PD提供一些初步的实验依据.
1材料和方法
1.1材料
健康雄性恒河猴2只(第四军医大学实验动物中心提供)，年龄4~6岁，体质量6~8 kg.
1.2方法
① 偏侧PD模型猴的制备： 在速眠新(0.1 mL/kg)im麻醉下，切开颈部皮肤，用血管夹暂时夹闭颈外动脉，将1甲基4苯基1，2，3，64氢吡啶(MPTP，Sigma公司生产)按1.0~1.2 mg/kg体质量溶于2 mL生理盐水中，逆血流方向缓慢注入颈总动脉. 4~6 d后2只恒河猴均出现MPTP注射侧对侧肢体肌肉僵直、肌强力增高、震颤等典型的PD症状，表明偏侧PD模型猴制备成功. 2只偏侧PD模型猴制备成功40 d后随机分为2组，1只作为对照猴，不进行任何药物治疗；1只作为治疗猴，鼻饲培补肝肾中药(枸杞子、何首乌、肉苁蓉)冻干粉水溶液150 mL，其中含中药冻干粉2 g(每g含中药生药4.24 g)，1次/d，2 mo为1个疗程. 2只猴在制备PD模型前和PD模型制备成功30 d后以及中药治疗2 mo后分别进行脑1H-MRS检查，每项检查各由2位有经验的医师独立分析结果. ② 恒河猴检查前30 min用速眠新(0.1 mL/kg) im麻醉. 1HMRS采用T1WI轴位定位于双侧纹状体的对称部位，选取正方体感兴趣区(VOI). 所测定的代谢产物主要包括N-乙酰基天门冬氨酸(NAA)、肌酸复合物(Cr)、含胆碱化合物(Cho). 用相关配套软件测量各峰下面积并分别计算NAA/Cr和Cho/Cr的比值.
2结果
1HMRS检查结果 正常猴双侧纹状体NAA, Cr, Cho波峰、波幅基本对称，左侧NAA/Cr和Cho/Cr分别为1.91±0.14和0.86±0.08；右侧NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.90±0.15和0.87±0.08；偏侧PD模型猴注射侧对侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.84±0.13和0.89±0.09，与正常猴无明显差异. 注射侧同侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.34±0.09和1.22±0.09；较正常猴有明显改变. 中药治疗后的偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体NAA/cr比值为1.58，较治疗前有明显增高趋势，Cho/Cr比值为1.09，较治疗前有明显下降趋势. 而未用中药治疗的偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.38和1.24，较治疗前无明显改变. 由于样本太少，未做统计学处理.
3讨论
NAA在脑内几乎全部位于神经元内， NAA降低反映了神经元的缺失和破坏以及功能的异常. Cho是细胞膜磷酸代谢的一个组成成分，有研究认为PD患者纹状体的Cho的增高可能是由于神经元受到破坏而导致细胞膜的降解，引起可溶性Cho增高所致[5,6]. 运用1H-MRS检测偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体的NAA/Cr和Cho/Cr比值的变化，可以直接反映神经细胞病理学改变，为在活体上研究PD提供了一个新的手段.
本实验结果显示，运用培补肝肾中药治疗后， MPTP注射侧纹状体NAA/Cr比值较治疗前有明显增高趋势，Cho/Cr比值较治疗前有明显下降趋势，说明培补肝肾中药可能有保护偏侧PD模型猴纹状体神经元的功能. 由于资金缺乏，选择的样本较少，研究结果还需进一步大样本研究证实.
【参考文献】
[1] 冯兴军，高国栋. 毁损黑质及脚内核对大鼠基底节代谢活动的影响[J]. 第四军医大学学报，2002; 23(21):2003-2005.
[2] 吴小军，高国栋，吕葆真，等. 神经节苷脂对PC12细胞的抗凋亡作用[J]. 第四军医大学学报，2002; 23(6):517-520.
[3] 陈建宗，江文，史健. 培补肝肾为主治疗帕金森病初步临床观察[J]. 成都中医药大学学报. 1999；22(3):30-32.
[4] 陈建宗，江文. 平颤1号口服液治疗帕金森病40例[J]. 安徽中医学院学报，1999;18(2):9.
[5] Urenja KJ, Williams SR, Gadian DG, et al. Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy unambiguously identifies different neural cell types [J]. J Neurosci, 1993;13(3):981-989.
[6] Clarke CE, Lowry M. Systematic review of proton magnetic resonance spectroscopy of the striatum in Parkinsonian syndromes [J]. Eur Neurol, 2001;8(6):573-577.
作者简介：陈建宗(1957)，男(汉族)，陕西省扶风县人. 博士，副教授，副主任医师. Tel. (029)83375354Email.jzchen57@ fmmu edu.cn
(第四军医大学西京医院： 1中医药研究中心，中西医结合老年脑病研究室， 2核医学科， 3放射科，陕西 西安 710033)
编辑井晓梅, 百拇医药(陈建宗，黄海东，邓敬兰，汪静，杨春敏，杜渭清)
0引言
帕金森病(Parkinson's disease, PD)是中老年人神经系统常见疾病. 其特征性病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元变性减少，导致纹状体内多巴胺浓度明显下降[1，2]. 我们既往的实验表明[3，4]，培补肝肾中药能有效改善PD患者的临床症状. 我们通过运用培补肝肾中药对偏侧PD模型猴治疗前后进行1H-MRS分析对照研究，为中药治疗PD提供一些初步的实验依据.
1材料和方法
1.1材料
健康雄性恒河猴2只(第四军医大学实验动物中心提供)，年龄4~6岁，体质量6~8 kg.
1.2方法
① 偏侧PD模型猴的制备： 在速眠新(0.1 mL/kg)im麻醉下，切开颈部皮肤，用血管夹暂时夹闭颈外动脉，将1甲基4苯基1，2，3，64氢吡啶(MPTP，Sigma公司生产)按1.0~1.2 mg/kg体质量溶于2 mL生理盐水中，逆血流方向缓慢注入颈总动脉. 4~6 d后2只恒河猴均出现MPTP注射侧对侧肢体肌肉僵直、肌强力增高、震颤等典型的PD症状，表明偏侧PD模型猴制备成功. 2只偏侧PD模型猴制备成功40 d后随机分为2组，1只作为对照猴，不进行任何药物治疗；1只作为治疗猴，鼻饲培补肝肾中药(枸杞子、何首乌、肉苁蓉)冻干粉水溶液150 mL，其中含中药冻干粉2 g(每g含中药生药4.24 g)，1次/d，2 mo为1个疗程. 2只猴在制备PD模型前和PD模型制备成功30 d后以及中药治疗2 mo后分别进行脑1H-MRS检查，每项检查各由2位有经验的医师独立分析结果. ② 恒河猴检查前30 min用速眠新(0.1 mL/kg) im麻醉. 1HMRS采用T1WI轴位定位于双侧纹状体的对称部位，选取正方体感兴趣区(VOI). 所测定的代谢产物主要包括N-乙酰基天门冬氨酸(NAA)、肌酸复合物(Cr)、含胆碱化合物(Cho). 用相关配套软件测量各峰下面积并分别计算NAA/Cr和Cho/Cr的比值.
2结果
1HMRS检查结果 正常猴双侧纹状体NAA, Cr, Cho波峰、波幅基本对称，左侧NAA/Cr和Cho/Cr分别为1.91±0.14和0.86±0.08；右侧NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.90±0.15和0.87±0.08；偏侧PD模型猴注射侧对侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.84±0.13和0.89±0.09，与正常猴无明显差异. 注射侧同侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.34±0.09和1.22±0.09；较正常猴有明显改变. 中药治疗后的偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体NAA/cr比值为1.58，较治疗前有明显增高趋势，Cho/Cr比值为1.09，较治疗前有明显下降趋势. 而未用中药治疗的偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体NAA/Cr和Cho/Cr比值分别为1.38和1.24，较治疗前无明显改变. 由于样本太少，未做统计学处理.
3讨论
NAA在脑内几乎全部位于神经元内， NAA降低反映了神经元的缺失和破坏以及功能的异常. Cho是细胞膜磷酸代谢的一个组成成分，有研究认为PD患者纹状体的Cho的增高可能是由于神经元受到破坏而导致细胞膜的降解，引起可溶性Cho增高所致[5,6]. 运用1H-MRS检测偏侧PD模型猴MPTP注射侧纹状体的NAA/Cr和Cho/Cr比值的变化，可以直接反映神经细胞病理学改变，为在活体上研究PD提供了一个新的手段.
本实验结果显示，运用培补肝肾中药治疗后， MPTP注射侧纹状体NAA/Cr比值较治疗前有明显增高趋势，Cho/Cr比值较治疗前有明显下降趋势，说明培补肝肾中药可能有保护偏侧PD模型猴纹状体神经元的功能. 由于资金缺乏，选择的样本较少，研究结果还需进一步大样本研究证实.
【参考文献】
[1] 冯兴军，高国栋. 毁损黑质及脚内核对大鼠基底节代谢活动的影响[J]. 第四军医大学学报，2002; 23(21):2003-2005.
[2] 吴小军，高国栋，吕葆真，等. 神经节苷脂对PC12细胞的抗凋亡作用[J]. 第四军医大学学报，2002; 23(6):517-520.
[3] 陈建宗，江文，史健. 培补肝肾为主治疗帕金森病初步临床观察[J]. 成都中医药大学学报. 1999；22(3):30-32.
[4] 陈建宗，江文. 平颤1号口服液治疗帕金森病40例[J]. 安徽中医学院学报，1999;18(2):9.
[5] Urenja KJ, Williams SR, Gadian DG, et al. Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy unambiguously identifies different neural cell types [J]. J Neurosci, 1993;13(3):981-989.
[6] Clarke CE, Lowry M. Systematic review of proton magnetic resonance spectroscopy of the striatum in Parkinsonian syndromes [J]. Eur Neurol, 2001;8(6):573-577.
作者简介：陈建宗(1957)，男(汉族)，陕西省扶风县人. 博士，副教授，副主任医师. Tel. (029)83375354Email.jzchen57@ fmmu edu.cn
(第四军医大学西京医院： 1中医药研究中心，中西医结合老年脑病研究室， 2核医学科， 3放射科，陕西 西安 710033)
编辑井晓梅, 百拇医药(陈建宗，黄海东，邓敬兰，汪静，杨春敏，杜渭清)