克隆__LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定

LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定

http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2003年第6期

目的: 克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyteassociated immunoglobulinlike receptor, LAIR), 鉴定抗LAIR1 单克隆抗体(mAb)与LAIR2分子的免疫反应性. 方法: 利用RTPCR, 从人外周血单个核细胞(PBMC)及白血病细胞系Jurkat和HL60中克隆了LAIR cDNA. 将LAIR1的胞膜外区基因及LAIR2 cDNA, 克隆入GST融合蛋白表达载体pGEX4T3中. 以其转化E.coli BL21菌株后, 在IPTG诱导下进行表达, 表达产物用谷胱甘肽交联的Sepharose 4B纯化. 用间接ELISA法, 鉴定抗LAIR1 mAb对表达蛋白的免疫反应性. 结果: 克隆并表达了LAIR1和LAIR2 cDNA. 同时克隆了5种新的LAIR1异型, 其中从HL60细胞克隆的2种包含LAIR1开放读框(ORF), 从Jurkat细胞中克隆的3种为LAIR1 cDNA片段. mAb鉴定表明LAIR1与LAIR2的免疫反应性不同. 结论: LAIR基因的转录、转录后的加工及表达, 可能与个体和疾病状态有关. LAIR1和LAIR2免疫反应性的不同与其构象有关.

(王睿), http://www.100md.com(谢鑫, 欧阳为明, 薛江楠, 张新海, 刘飞, 庄)

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