吖啶橙荧光法检测泌尿生殖道分泌道中的沙眼衣原体
(解放军海军421医院妇产科，广州 赤岗 510318，第四军医大学西京医院：检验科，医教部，陕西 西安 710033)
【关键词】 沙眼衣原体；AOF；分泌物
【Abstract】AIM： To explore the value and significance of detecting the chlamydia trachomatis(CT) from urogenital tract samples by the acridine orange fluorescence(AOF).METHODS： 110 samples from urogenital tract were detected by AOF.RESULTS： The total positive rate is 49.0%,in which the male are 53.0%(16/30) the female are 45.0%(38/80).CONCLUSION：AOF is combination of fluorescence method and morphologic. It showes the characteristics of easiness and fastness,and can be used in screening the infection of the Chlamydia trachomatis.
0 引言
沙眼衣原体(CT)做为非淋菌性泌尿生殖道感染的重要病原体，在性传播性疾病中占有重要的位置，已引起临床的高度重视.长期以来，对沙眼衣原体的实验室诊断方法，主要依据细胞培养技术，由于方法学要求严格的实验室条件及较复杂繁琐的操作程序：在临床上得不到广泛的应用.吖啶橙荧光法(AOF)检测沙眼衣原体，是近年来兴起的一项新技术，由于该方法检测沙眼衣原体具有较高的特异性和敏感性，在临床实验诊断中得到广泛的应用.我们应用AOF法对泌尿生殖道分泌物中的沙眼衣原体进行检测，获得满意的结果.
1 材料和方法
11 材料 01 g·L-1吖啶橙缓冲液：01 mol·L-1氯化钙溶液：01 mol·L-1氯化钙溶液：001 mol·L-1 PBS(pH 74)；荧光显微镜：美国AO公司产品；临床标本来源：110例泌尿生殖道标本，男性30例，女性80例，均来自本院性病门诊患者.
12 方法
121 标本制备 衣原体是在细胞内寄生的病原微生物，检测衣原体必须采集感染上皮细胞.用无菌棉试子自尿道口或宫颈口处分泌物于干净的载玻片上，自然干燥待用.
122 检测程序 将涂有标本的玻片用甲醇固定，然后将玻片置湿盒内，加吖啶橙缓冲液200 μL，37℃100 min，用洗涤液轻轻冲洗，加01 mol·L-1氯化钙溶液100 μL分色2 min，用洗涤液洗涤两次，用缓冲甘油液封片后，于荧光显微镜下观察[1].
123 结果判定 通过荧光显微镜观察，在深绿色背景的上皮细胞核周胞质内有致密团块，发桔红色荧光的衣原体颗粒及细胞内包函体.可报告为衣原体阳性.
2 结果
对110例泌尿生殖道感染标本，用吖啶橙直接染色荧光检测，在30例男性患者中，16例为阳性，阳性率为530%，在80例女性患者中，38例为阳性，阳性率为450%.
为确定吖啶橙直接染色荧光检测的可靠性，将110例标本为PCR法，进行验证，30例男性标本中有21例为阳性，阳性率为700%，其中包括16例吖啶橙直接染色阳性标本，80例女性标本中有58例为阳性，阳性率为730%，其中包括38例吖啶橙直接染色阳性标本.实验中尚未发现吖啶橙直接染色荧光检测阳性而PCR阴性结果.
3 讨论
吖啶橙是一种具有异染色性染料，可以于插入方式与双螺旋结构DNA分子相结合，染料中的依地酸可将RNA分子分解成为单链，并借助于静电吸附作用与单链的RNA分子相连接，依据DNA与RNA对吖啶橙的吸附方式不同，它所放射的荧光也不同.由于病原微生物细胞体内含有较丰富的核酸蛋白，所以应用吖啶橙染色即可使病原体内的DNA或RNA着色，通过荧光显微镜观察，呈现明显的桔红色荧光，从而确定病原体的存在与否.
我们所应用的AOF法[2，3]，是针对衣原体特异的DNA或RNA经染色后，可产生桔红色荧光，而达到快速检测沙眼衣原体感染的目的。对110例泌尿生殖道感染的临床标本中，进行沙眼衣原体的快速检测，男性30例，女性80例，检测阳性率分别530%和450%.由于该方法聚荧光染色和形态学为一体，虽然简便，快速，但是观察者必须要具备一定的形态学实验经验，方可保证检测结果的准确性和可靠性.
【参考文献】
[1] 丁振若，苏明权，孙怡群等.荧光法检测肿瘤细胞在泌尿系肿瘤诊断中的应用[J].中华医学检验杂志，1989；12(3)：167-169.
[2] 任怡敏，白 岚，梁 玉等.应用吖啶橙染色快速检测沙眼衣原体[J].中华医学检验杂志，1996;19(2):124.
[3] 苏明权，祝道成，穆士杰等.聚合酶链式反应检测沙眼衣原体[J].第四军医大学学报，1996；17(2)：103.
编辑 潘伯荣
作者简介：王强武(1965)，男(汉族)，陕西省蓝田县人.学士，主治医师.Tel.(202)84217058, http://www.100md.com(王强武，苏明权，李立文，李哲)
【关键词】 沙眼衣原体；AOF；分泌物
【Abstract】AIM： To explore the value and significance of detecting the chlamydia trachomatis(CT) from urogenital tract samples by the acridine orange fluorescence(AOF).METHODS： 110 samples from urogenital tract were detected by AOF.RESULTS： The total positive rate is 49.0%,in which the male are 53.0%(16/30) the female are 45.0%(38/80).CONCLUSION：AOF is combination of fluorescence method and morphologic. It showes the characteristics of easiness and fastness,and can be used in screening the infection of the Chlamydia trachomatis.
0 引言
沙眼衣原体(CT)做为非淋菌性泌尿生殖道感染的重要病原体，在性传播性疾病中占有重要的位置，已引起临床的高度重视.长期以来，对沙眼衣原体的实验室诊断方法，主要依据细胞培养技术，由于方法学要求严格的实验室条件及较复杂繁琐的操作程序：在临床上得不到广泛的应用.吖啶橙荧光法(AOF)检测沙眼衣原体，是近年来兴起的一项新技术，由于该方法检测沙眼衣原体具有较高的特异性和敏感性，在临床实验诊断中得到广泛的应用.我们应用AOF法对泌尿生殖道分泌物中的沙眼衣原体进行检测，获得满意的结果.
1 材料和方法
11 材料 01 g·L-1吖啶橙缓冲液：01 mol·L-1氯化钙溶液：01 mol·L-1氯化钙溶液：001 mol·L-1 PBS(pH 74)；荧光显微镜：美国AO公司产品；临床标本来源：110例泌尿生殖道标本，男性30例，女性80例，均来自本院性病门诊患者.
12 方法
121 标本制备 衣原体是在细胞内寄生的病原微生物，检测衣原体必须采集感染上皮细胞.用无菌棉试子自尿道口或宫颈口处分泌物于干净的载玻片上，自然干燥待用.
122 检测程序 将涂有标本的玻片用甲醇固定，然后将玻片置湿盒内，加吖啶橙缓冲液200 μL，37℃100 min，用洗涤液轻轻冲洗，加01 mol·L-1氯化钙溶液100 μL分色2 min，用洗涤液洗涤两次，用缓冲甘油液封片后，于荧光显微镜下观察[1].
123 结果判定 通过荧光显微镜观察，在深绿色背景的上皮细胞核周胞质内有致密团块，发桔红色荧光的衣原体颗粒及细胞内包函体.可报告为衣原体阳性.
2 结果
对110例泌尿生殖道感染标本，用吖啶橙直接染色荧光检测，在30例男性患者中，16例为阳性，阳性率为530%，在80例女性患者中，38例为阳性，阳性率为450%.
为确定吖啶橙直接染色荧光检测的可靠性，将110例标本为PCR法，进行验证，30例男性标本中有21例为阳性，阳性率为700%，其中包括16例吖啶橙直接染色阳性标本，80例女性标本中有58例为阳性，阳性率为730%，其中包括38例吖啶橙直接染色阳性标本.实验中尚未发现吖啶橙直接染色荧光检测阳性而PCR阴性结果.
3 讨论
吖啶橙是一种具有异染色性染料，可以于插入方式与双螺旋结构DNA分子相结合，染料中的依地酸可将RNA分子分解成为单链，并借助于静电吸附作用与单链的RNA分子相连接，依据DNA与RNA对吖啶橙的吸附方式不同，它所放射的荧光也不同.由于病原微生物细胞体内含有较丰富的核酸蛋白，所以应用吖啶橙染色即可使病原体内的DNA或RNA着色，通过荧光显微镜观察，呈现明显的桔红色荧光，从而确定病原体的存在与否.
我们所应用的AOF法[2，3]，是针对衣原体特异的DNA或RNA经染色后，可产生桔红色荧光，而达到快速检测沙眼衣原体感染的目的。对110例泌尿生殖道感染的临床标本中，进行沙眼衣原体的快速检测，男性30例，女性80例，检测阳性率分别530%和450%.由于该方法聚荧光染色和形态学为一体，虽然简便，快速，但是观察者必须要具备一定的形态学实验经验，方可保证检测结果的准确性和可靠性.
【参考文献】
[1] 丁振若，苏明权，孙怡群等.荧光法检测肿瘤细胞在泌尿系肿瘤诊断中的应用[J].中华医学检验杂志，1989；12(3)：167-169.
[2] 任怡敏，白 岚，梁 玉等.应用吖啶橙染色快速检测沙眼衣原体[J].中华医学检验杂志，1996;19(2):124.
[3] 苏明权，祝道成，穆士杰等.聚合酶链式反应检测沙眼衣原体[J].第四军医大学学报，1996；17(2)：103.
编辑 潘伯荣
作者简介：王强武(1965)，男(汉族)，陕西省蓝田县人.学士，主治医师.Tel.(202)84217058, http://www.100md.com(王强武，苏明权，李立文，李哲)