A c a d e mi c F i e l d 稿技园地

    印楝素抑菌活性的研究

    赵淑英 宋湛谦

    ( 中国林业科学研究院林产化学工业研究所

    印楝( A z a d i r a c h t a i n d i c a A.J u s s )

    系楝科楝属乔木， 被美国农业部誉为

    “ 可解决全球问题之树” 。从印楝植

    株中发现了以印楝素( A z a d i r a c h t i n ) 为

    主的8 o余种活性物质， 可防治 1 0目

    4 0 0 余种农林、 仓库和卫生害虫， 是理

    想的生物杀虫剂， 但其杀菌活性的研

    究在国内尚属空白。本研究选用公

    认的质控菌株， 对其抑制细菌生长活

    性进行了研究。

    1 试验材料及设备

    1 . 1 试验 器材

    超净工作台： S W—C J一1 B标

    准型， 苏州安泰空气技术有限公司

    生产； 电热恒温箱： H H—B1 1 —4 2 0

    一

    型， 上海跃进医疗器械厂生

    产； 电热式蒸汽消毒器： Y X O G 0 2型，山东新华医疗器械厂生产： 电热恒

    温水浴锅， S Y 2— 4型， 北京市医疗设

    备厂生产； 微量进样器 ( 5～2 0 d；

    Y Y 0 0 8 8 —9 2型， 上海医用激光仪器

    厂生产。

    1 . 2 供试菌种

    大肠杆菌( E s c h e r i c h i a c o l i ) A T C C

    2 5 9 2 2—5 ； 金黄色葡萄球菌( S t a p h y .

    1 o c o c c U S a u r e u s ) A T C C 2 5 9 2 3—6 ； 枯草

    芽孢杆菌黑色变种( B a c i l l u s s u b t i l i s

    v a t .n i g e r ) A T C C 9 3 7 2—5 ， 均由山东

    省卫生防疫站提供。

    1 . 3 试验 药品

    二甲基亚砜为分析纯； 牛肉膏、琼脂等皆为生化试剂。

    印楝素： 自行提取， 提取溶剂、提取方式和印楝素的含量( 见表 1 ) 。

    基金项 目： 中国林科院资源昆虫培育

    与利用重点实验室基金资助项 目。

    马玉翔

    南京 2 1 0 0 4 2 ) ( 济南大学化学4 E_ v _ 学院)

    2 实验方法 各 1 0 m l ， 第 1 0支为空白作对照。

    2 . 1 培养基制备 2 . 4 最小抑茵浓度( MI C ) 的测定

    牛肉膏蛋白胨培养基常 规制 采用琼脂稀释法将不同浓度的

    备， 调 p H值 7 . 2～7 . 4 ， 然后分装， 药液混合溶解在牛肉膏蛋白胨培养

    1 2 1 c c 压力下蒸汽灭菌 2 0 m i n ， 置 基中， 点种细菌， 通过细菌的生长与

    5 0 %左右水浴中恒 温备用。培养 否， 确定印楝素的最小抑菌浓度。

    皿、 移液管等在 1 2 1 c c 压力蒸汽灭菌 2 . 4 . 1 取 1 0 m l 系列稀释的药液加

    2 0 m i n 人平皿中， 将在 5 0 c c 左右水浴中恒

    2 . 2 菌悬液制备 温的牛肉膏蛋白胨培养基约 1 0～1 2

    无菌条件下， 将二代大肠杆菌、 m l 加入平皿中， 边加边摇平皿， 使药

    金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌接 液和培养基充分混合， 平置， 冷凝。

    种于斜面培养基的试管中， 3 7 %培 2 . 4 . 2 用微量进样器吸取 2 g l 含

    养 1 8 ～2 0 h 。取出加入 5 ml 无菌生 菌量为 1 0 7 c f u m l 的菌悬液， 由低到

    理盐水， 充分振荡将细菌孢子洗入 高浓度依次点种于含药液培养基中

    试管中得到菌悬原液， 用平板菌落 的平皿中， 每个点菌量约为 1 0 ' c f u

    计数法测定细菌原液的活菌数量。 m l ， 接种后形成菌液圈直径约 5～8

    取新鲜制备的菌悬原液以 1 0 I T l m。每样品做 3个平行重复试验。

    倍稀释法稀释至 1 0 7 f u m l 、 1 0 5 f u 同样方法接种不含药液的琼脂平皿

    ml 备用。 作对照实验。

    2 . 3 药液制备 2 . 4 . 3 将接种后的平皿于 3 7 c ( = 培

    准确称取采用不同溶剂和方法 养箱中， 倒置培养 1 8 ～2 4 h ， 观察菌

    提取的印楝素 1 6 0 0 0 0 g ， 置于已灭 落被完全抑制的最低药液浓度即该

    菌的2 5 m I 比色管中， 准确加入二甲 样品对受试菌的 M I C 。

    基亚砜 2 m l ， 振荡溶解 ， 以无菌 p H 2 . 5 最小杀菌浓度( M B C ) 的测定

    值7 . 2的缓冲液为稀释剂， 准确稀 测出 M I C后， 再继续将未见细

    释至2 0 m l ， 此药液浓度为 8 0 0 0 g 菌生长的平皿， 在 3 7 ~ C 培养 1 8 h ， 平

    ml 。另取9支无菌比色管， 以2倍稀 皿上菌落数小于5个的最小稀释度

    释法配制成 8 0 0 0 ~ g m l 、 4 0 0 0 ~ g m l 、 的抑菌液浓度为该样品对受试菌的

    2 0 0 0 u g n ~、 1 0 0 0 u g m l 、 5 0 0 ~ g m l 、 最小杀菌浓度 M B C ......