白木通多糖的研究

    张劲松 方积年3

    (中国科学院上海药物研究所 , 上海 200031)

    摘要 用碱液从白木通 ( A kebia t rif ol iate) 茎中提取所得的粗多糖 ATB 经 DEAE 2Cellulose 及

    Sephadex G 2200柱层析后得到一多糖纯品ATBB22 ,其分子量为213 ×105。糖组分分析ATBB22 中各糖残

    基的摩尔比为 Rha∶ Ara∶ Xyl∶ Gal∶ Glc∶ GalA = 1122∶ 1100∶ 1110∶ 0185∶ 0124∶ 0182。经甲基化 ,高碘酸氧化 ,Smith降解 ,部分酸水解 ,1

    H和13

    CNMR谱的分析揭示 ATBB22 是一个结构复杂的杂多糖。

    关键词 白木通; 多糖

    白木通( A kebia t rif ol iate)的茎及种子为传

    统中药 ,有利尿作用[1 ]。白木通的化学成份已

    有文献报道[2～6 ]

    ,但其中多糖的研究 ,国内外

    均未见报道。本文主要报道白木通多糖ATBB2

    2的提取、分离、纯化及化学结构的研究。根据

    初步药理试验结果表明 ,ATBB22 有免疫促进

    作用 ,详细试验正在进行中。

    实 验 部 分

    核磁共振仪为 Bruker Model AC2400。高

    效液相泵为 Bio2Rad 1330 型 ,积分仪为 Water

    746 型 ,示差折射仪为 Shodex RI SE251 型 , 柱

    为Bio2Rad TSK402TSK50 串连柱。气相层析

    仪为 Shimadzu29A 型仪器 ,柱为 OV2225 填充

    柱。

    各种单糖的标准品和纤维素板为 Merck

    出品 , 测定分子量所用的 T系列 Dext ran 标准

    品和 Sephadex G 系列为 Pharmacia 产品。

    DEAE 2纤 维 素 为 Bio2Rad 出 品 , NaBH4 为

    Aldrich 出品 ,三氟乙酸 ,高碘酸钠和 DMSO 为

    Flank出品 ,其它为国产AR级试剂。

    白木通采自四川。

    本文于1996 年1 月31 日收到。

    3

    通讯联系人

    1 提取和纯化

    白木通茎 5 Kg ,粉碎后置于索氏提取器中

    用 EtOH 回流 8 h ,取出自然风干 ,用沸水连续

    提取 3 次 ,合并提取液 ,离心取上清液 ,浓缩至

    小体积 ,加三倍的 EtOH 离心收集沉淀。沉淀

    溶于 H2O 后对水透析 3 d ,透析袋内的溶液加

    EtOH沉淀 ,离心收集沉淀 ,真空干燥得褐色的

    水提粗多糖 ATA。沸水提取后的残渣用 5 %

    NaOH于 4 ℃浸泡过夜 ,重复 3 次 ,合并提取

    液 ,在冰浴条件下用 HCl 中和提取液至 pH 7 ,浓缩至小体积 ,加三倍量的 EtOH沉淀 ,然后按

    水提取液同样的方法处理得到褐色的碱提粗多

    糖 ATB。ATB 用 Sevag 法[7 ]

    去蛋白后进行

    DEAE2纤维素柱层析 ,先用水作洗脱剂得两个

    组份 F24 和 F25 ,再用 0～2 mol· L - 1

    NaCl 梯度

    洗脱得两个组份 F26 和 F27 ,各组份经 HPLC

    检测 ,结果为不纯品。取 F27 进行 Sephadex G 2

    200 凝胶层析 ,合并主峰部分 ,样品冷冻干燥 ,经 HPLC检测为纯品 ,凝胶过滤流出曲线的峰

    形为对称的单峰 ,也说明样品为纯品 ,此组份命

    名为ATBB22。

    分子量的测定 按文献[8 ]

    的方法。先测

    出各标准品 T2000 ,T500 ,T110 , T70 , T40 及葡

    萄糖的保留时间 ,按公式 Kav = (Ve - Vo) (Vt

    - Vo) ,求出对应的 Kav ,以 LogMw 对 Kav 作

    图得标准曲线。同样测出 ATBB22 的保留时

    · 834 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 1997 ,32(6)∶ 438～441

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.间 ,求出 Kav ,从标准曲线上即可求出其分子

    量。ATBB22 的分子量用此法测定为 213 ×

    105。

    糖组分分析[ 9]

    取 ATBB22 10 mg 溶于 2

    mol· L - 1

    的 TFA 3 ml 中 ,封管后在 110 ℃水解

    3 h ,取出后除尽 TFA。用纤维素板检测水解产

    物 ,剩余的样品室温下用 NaBH4 还原 2 h ,然后

    用酸性 MeOH 除尽硼酸根 ,样品在放有 P2O5

    的干燥器中干燥 4 h 后 ,加醋酐 3 ml 于 100 ℃

    反应 1 h ,减压除去未反应的醋酐 ,即得乙酰化

    的衍生物 ,溶于 CHCl3 中进行 GC分析。

    甲基 化 反 应[ 10]

    ATBB22 按 改 良 的

    Hakomori 法[13 ]

    进行甲基化 , IR检测样品 ,确证

    样品已完全甲基化后 ,先用 90 %的 HCOOH水

    解 6 h ,然后用 2 mol· L - 1

    TFA 再水解 6 h ,按

    糖组分分析中的乙酰化方法对水解产物进行乙

    酰化 ,衍生物溶于 CHCl3 中进行 GC分析。

    高碘酸氧化2Smith 降解反应 按文献[11 ]

    方法 ,取 ATBB22 20 mg 进行氧化反应 ,用 UV

    监测反应情况 ,待氧化反应完全后 ,按文献[12 ]

    方法处理上述样品 ,所得样品完全酸水解后还

    原、乙酰化 ,然后进行 GC分析。

    糖醛酸的还原 取 ATBB22 50 mg 按文

    献[13 ]

    方法对样品中的糖醛酸进行还原 ,还原后

    样品命名为ATBB222R。

    单糖绝对构型的测定 取 ATBB22 10 mg

    按糖组份分析的条件把样品完全酸水解 ,然后

    将样品按文献[14 ]

    方法转化成各糖残基的乙酰

    化2( + )222辛基糖苷后进行 GC分析。

    部分酸水解[ 15]

    取 ATBB22 200 mg 溶于

    014 mol· L - 1

    TFA 125 ml ,于 100 ℃封管水解 2

    h ,减压蒸干 ,加 MeOH 再蒸干 ,重复 3 次。水

    解后的样品装入透析袋内对重蒸水透析。透析

    袋外的溶液浓缩后进行 Sephadex G 215 柱层

    析 ,用水作洗脱剂共得四个峰。按保留时间从

    大到小的顺序依次命名为 I2121 , I2122 , I2123 , I2

    12 4 ,透析袋内的样品冷冻干燥后溶于 014

    mol· L - 1

    TFA 125 ml 中 ,100 ℃再水解 8 h ,按

    上述同样方法操作 ,透析袋外的溶液浓缩后上

    柱 ,共得五个峰 ,分别命名为 I2221 , I2222 , I2223 ,I2 224 , I2225。袋内样品冷冻干燥后命名为

    ATBB222Phe。

    1

    H,13

    C 谱的测定 取多糖样品 ATBB22

    50 mg 溶于 D2O 015 ml 中 ,在 Bruker Modle

    AC2400 仪器上测其光谱 ......