不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响

    刘振丽3

    , 宋志前, 张 玲, 李淑莉

    (中国中医研究院 基础理论研究所 , 北京 100700)

    [摘要] 目的:考察炮制工艺和炮制时间对何首乌中大黄素、大黄素甲醚、 2 ,3 ,5 ,4′ 2四羟基二苯乙烯222O2β 2D2

    葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷) 、鞣质含量的影响。方法:何首乌分别采用黑豆汁蒸、黑豆汁炖、清蒸、黑豆汁高压蒸和

    黑豆汁屉上蒸的工艺炮制12 h和 32 h ,采用黑豆汁炖 12 ,24 ,36 ,48 h。HPLC测定炮制饮片中二苯乙烯苷、蒽醌含

    量。皮粉法测定鞣质含量。结果:不同炮制工艺炮制一定时间 ,二苯乙烯苷含量:生片 >黑豆汁高压蒸片 >黑豆汁

    炖片 >黑豆汁蒸片 >清蒸片 >黑豆汁屉上蒸片;总游离蒽醌含量:黑豆汁高压蒸片 >黑豆汁蒸片 >黑豆汁炖片 >

    清蒸片 >黑豆汁屉上蒸片 >生片;总蒽醌含量:生片 >黑豆汁高压蒸片 >黑豆汁蒸片 >黑豆汁炖片 >清蒸片 >黑

    豆汁屉上蒸片。采用黑豆汁炖制 ,随炮制时间的延长 ,二苯乙烯苷含量逐渐下降 ,至 48 h约为生品含量的 17 %;总

    游离蒽醌含量先上升后下降 ,32 h > 36 h > 24 h > 48 h > 12 h > 0 h ;总蒽醌含量和结合蒽醌逐渐下降。鞣质含量随炮

    制时间的延长逐渐下降。结论:应规范何首乌饮片的炮制工艺。

    [关键词] 蒽醌;二苯乙烯苷;何首乌;炮制;鞣质

    [中图分类号] R 283 ;R 284121 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2005) 0520336205

    [收稿日期] 2004203206

    [基金项目] 科技部中央级科研院所科技基础性工作专项

    (20012DEA220010)

    [通讯作者] 3

    刘振丽,Tel : (010) 6401441122592 , E 2mail :zhenli

    liu @sina. com. cn

    何首乌为蓼科植物何首乌 Polygonum multif lo2

    rum Thunb1 的干燥块根。其炮制方法起源于唐

    代[1 ]。历代本草中记载其炮制方法有所不同 ,主要

    体现在原药材的净制方法、加热方式、辅料的种类

    等。《中国药典》 [2 ]

    和《全国中药炮制规范》 [3 ]

    中 ,何

    首乌的炮制方法为黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸。经

    对全国20个省市的炮制规范总结 ,另有黑豆汁高压

    蒸[4 ]

    、黑豆同煮[5 ]

    、黑豆汁黄酒蒸[6 ]

    等。炮制时间相

    差很大 ,从 3 h 至 40 h 不等。何首乌具有解毒、消

    痈、润肠通便之功效。经炮制后为制何首乌 ,具有补

    肝肾 ,益精血 ,乌须发等功效[2 ]。何首乌所含二苯乙

    烯类成分具有保肝作用[7 ]

    ,在何首乌中的含量较高。

    结合蒽醌具泻下作用 ,何首乌炮制后药性改变的部

    分原因即为结合蒽醌转变为无泻下作用的游离蒽

    醌[8 ]。炮制后毒性的降低可能为鞣质含量的变

    化[9 ]。尽管对炮制前后何首乌中成分的含量变化有

    一些报道 ,但对不同工艺以及炮制时间的影响缺乏

    系统的研究 ,且某些报道的结论相反。目前对炮制

    工艺缺乏规范统一的工艺技术参数。因此 ,系统研

    究不同炮制工艺以及炮制时间对何首乌中成分含量

    的影响 ,对于确定最佳炮制工艺以保证何首乌饮片

    的质量具有重要意义。

    1 仪器、材料与试剂

    超声波清洗器(上海超声波仪器厂) ;HP1100 高

    效液相色谱仪 G1322A 脱气机、 G1311A 四元泵、G1316A恒温箱、 G1314A VWD 检测器、 HP化学工作

    站;实验室试验用何首乌药材产自广东省德庆县德

    城镇 ,经中国中医研究院中药研究所谢宗万研究员

    鉴定为蓼科植物何首乌 P1 multif lorum 的干燥块根 ,实验样品为自制生饮片和经黑豆汁蒸、黑豆汁炖、清

    蒸[2 ]

    、黑豆汁高压蒸[4 ]

    、黑豆汁屉上蒸(传统炮制方

    法)的饮片。中试药材来自广东、贵州、掌南和四川 ,生片和制片为在饮片厂生产饮片。2 ,3 ,5 ,4′ 2四羟基

    二苯乙烯222O2 β 2D2葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷 ,批号

    08442200003 ,供含量测定用) 、大黄素 (批号 07562

    200110 ,供含量测定用) 、大黄素甲醚 (批号 7582

    20000S ,供鉴别用) ,由中国药品生物制品检定所提

    供。乙腈为色谱纯 ,皮粉为分析纯 ,水为超纯水。

    2 二苯乙烯苷的含量测定

    211 色谱条件 Waters Novapak C18 (319 mm ×150

    mm ,5μm)色谱柱 ,流动相乙腈2水(13∶ 87) ;流速 110

    mL· min - 1;检测波长322 nm;柱温40 ℃。

    212 对照品溶液的制备和线性关系的考察 取二

    · 633 ·

    第30卷第5期

    2005年3月 中 国 中 药 杂 志

    China Journal of Chinese Materia Medica

    Vol130 ,Issue 5

    March ,2005

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.苯乙烯苷对照品 ,精密称定 ,于棕色量瓶中 ,用甲醇

    配制成每 1 mL 含 0103 mg的对照品溶液。分别吸

    取1 , 3 , 5 , 7 , 9μ L ,注入液相色谱仪 ,按上述色谱条

    件测定峰面积 ,以测得的峰面积积分值为纵坐标 ,进

    样量(μg)为横坐标绘制标准曲线 ,计算回归方程 ,Y = - 8156 + 3 00417 X , r = 01999 9。表明二苯乙烯

    苷在0103～0127μg具有良好的线性关系。

    213 供试品溶液的制备 按药典法进行[3 ]。取各

    何首乌饮片粗粉(过 4 号筛) 011 g ,精密称定 ,置锥

    形瓶中 ,精密加入50 %乙醇25 mL ,称定重量。加热

    回流30 min ,放冷 ,再称重 ,用 50 %乙醇补足减失的

    重量 ,摇匀 ,适当稀释 ,上清液用 0145μm微孔滤膜

    滤过 ,取续滤液得供试品溶液。

    214 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液重复

    进样 5 次 ,二苯乙烯苷峰面积积分值的 RSD 为

    112 %。

    215 重复性试验 精密称取同一样品 5 份 ,按供试

    品溶液处理 ,进行含量测定 ,测得的二苯乙烯苷含量

    的 RSD为118 %。

    216 回收率试验 精密称取同一样品 5 份 ,分别精

    密加入二苯乙烯苷对照品 ,按供试品溶液处理 ,进行

    含量测定 ,计算回收率为9916 % ,RSD为215 %。

    217 供试品含量测定 精密吸取供试品溶液 10μ L

    注入液相色谱仪 ,测定峰面积 ,计算样品中二苯乙烯

    苷含量。HPLC图谱见图 1。不同炮制方法炮制 12

    h及32 h 后 ,二苯乙烯苷含量测定结果见表 1。采

    用豆汁炖不同时间 ,饮片中二苯乙烯苷的含量测定

    结果见表2。10个批次何首乌饮片采用黑豆汁炖32

    h后 ,饮片中二苯乙烯苷的含量测定结果见表3。

    图1 何首乌中二苯乙烯苷 HPLC图 ......