HPLC测定黄芪甲苷概况.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(119KB，3页)。
[综 述 ]
HPLC测定黄芪甲苷概况
张莲珠
(吉林天药科技股份有限公司天然药物研究所 ,吉林 长春 130012)
收稿日期: 20042 102 12
作者简介:张莲珠 ( 1971～) ,女,吉林省长春市人,主管药师,医学硕士。一直从事中药新药研究工作。电话: 04312 5541874, E2 mail : zlz@
tianyao . com cn zlzcyt0@163. com
关键词:黄芪甲苷; 定量方法; HPLC; 综述
中图分类号: R284 . 1 文献标识码: B 文章编号: 10012 1528 (2005) 052 05872 02
黄芪甲苷 (Astragal oside Ⅳ)是中药黄芪中的特征性成
分 ,目前黄芪药材以及含黄芪的单方及复方中药制剂大多以
黄芪甲苷为质量评价指标 ,由于黄芪甲苷只在紫外末端有吸
收 ,以往文献报道以薄层扫描方法居多 ,近年来 ,通过 HPLC
方法测定黄芪甲苷以其在准确性、 重现性、 灵敏度等方面的
优势而逐渐为人们广泛使用 ,本文对近五年来 HPLC法测定
黄芪药材及制剂中黄芪甲苷的前处理方法及色谱条件两方
面综述如下。
1 前处理
1 . 1 提取纯化 黄芪本身含有多种成分 ,复方中药成分更
加复杂 ,而黄芪甲苷的含量相对较低 ,在药材中最高含量不
到 0 . 2%[ 1 ]
,因此在 HPLC测定前进行适当有效的前处理对
于保护色谱柱和提高供试液中黄芪甲苷含量都非常必要。
1 . 1 . 1 样品[ 2 ]
(合剂 ) 置分液漏斗中 ,乙醚提取 ,弃去乙
醚液 (乙醚脱脂 ) ,水层用水饱和正丁醇提取 ,合并正丁醇提
取液 (正丁醇提取 ) , 1%氢氧化钠溶液洗涤正丁醇液 ,再用
正丁醇饱和的水洗至中性 ( 1%氢氧化钠处理 ) ,蒸干 ,残渣
用甲醇溶解定容。
1 . 1 . 2 样品[ 3 ]
(黄芪口服液 ) 正丁醇提取 , 1%氢氧化钠
处理 ,蒸干 ,残渣加水溶解后上 D101大孔吸附树脂柱 ,先后用
水和 30%乙醇洗脱 ,弃去洗脱液 ,用 70%乙醇洗脱 ,收集洗
脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 3 样品[ 4 ]
(黄芪注射液 ) 加氢氧化钾 ,振摇使溶解 ,正丁醇提取 , 1%磷酸二氢钠水溶液洗涤 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 4 样品[ 5 ]
(复方口服液 ) 正丁醇提取 , 1%氢氧化钠
处理 ,蒸干 ,残渣用水溶解 ,上大孔树脂柱 ,先用水洗 ,再以
75%乙醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 5 样品[ 6 ]
(黄芪药材 ) 粉碎 ,乙醚脱脂。将药材置索
氏提取器中 ,加甲醇提取 ,回收甲醇 ,提取液蒸干 (甲醇索氏
提取 ) ,残渣用水饱和正丁醇溶解 ,转入分液漏斗中 , 1%氢氧
化钠处理 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 6 样品[ 7 ]
(颗粒剂 ) 研细 ,甲醇索氏提取 ,残渣加水
溶解 ,乙醚脱脂 ,水层正丁醇提取 ,加 1%磷酸二氢钾水溶液
洗涤 ,正丁醇层减压浓缩至干。残渣用水溶解 ,乙醚洗涤 ,水
层蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 7 样品[ 8 ]
(颗粒剂 ) 研细 ,甲醇索氏提取 ,残渣加水 ,微热使溶解 ,正丁醇提取 ,氨试液洗涤 ,正丁醇液蒸干 ,残渣
加水使溶解 ,通过 D101型大孔树脂 ,先后以水、 40%乙醇、70%乙醇洗脱 ,收集 70%乙醇洗脱液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶
解 ,加于中性氧化铝柱上 ,先后用甲醇、 40%甲醇洗脱 ,收集
40%甲醇洗脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 8 样品[ 9 ]
(黄芪提取物 ) 加水溶解后上 D101大孔树脂
柱 ,收集 70%乙醇洗脱液 ,挥去乙醇后 ,转移至分液漏斗中 ,正丁醇提取 ,氨试液洗涤 ,正丁醇层蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 9 样品[ 10 ]
(黄芪药材 ) 水提取 ,提取液加甲醇醇沉多
糖 ,滤过 ,回收甲醇至干 ,残渣加少量水使溶解 ,乙醚脱脂 ,正
丁醇提取 ,正丁醇液蒸干 ,残渣加少量乙醇溶解 ,均匀洒在装
有干燥 Al 2O3∶Mg O (36∶9)混合物的 G3漏斗中 ,用 75%乙
醇洗脱 ,洗脱液回收乙醇 ,蒸干 ,残渣用 95%乙醇溶解 ,乙醇
液中加入大量乙醚 ,抽滤 ,滤渣自然挥干乙醚 ,将滤纸浸于甲
醇中使滤渣充分溶解 ,弃去滤纸 ,定容。
综合上述样品提取纯化方法 ,制定基本纯化流程如下 ,如果样品中干扰仍较大 ,则可以参考前述通过大孔树脂柱或
氧化铝柱的处理方法:
Fi g . 1 Extracti on process of a straga loside Ⅳ i n s ample
785
2005年 5月
第 27卷 第 5期
中 成 药
Chinese Traditi onal PatentMedicine
May 2005
Vol . 27 No . 5
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.1 . 2 衍生化 由于黄芪甲苷只在紫外末端有最大吸收 (结
构见 Fig . 2) ,而且含量一般比较低 ,含量测定时影响准确性
及检出限 ,采取适当的方法对其进行衍生化加以改善。
Fi g . 2 Structure of Astraga loside Ⅳ
1 . 2 . 1 姚美村[ 1 ]
等以吡啶 2 苯甲酰氯 (2 . 5∶1)为衍生化
试剂 ,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化 ,样品经甲醇
索氏提取 ,提取液减压蒸干 ,残渣加水饱和正丁醇溶解 , 1%
氢氧化钠提取 3次 ,正丁醇层用正丁醇饱和的水洗 2次 ,正
丁醇层蒸干 ,残渣加吡啶溶解 ,加入氯仿 ,在冰浴下加入苯甲
酰氯 ,摇匀后冰箱放置 24 h,挥干溶剂 ,残渣加入内标储液 ,用甲醇溶解并定容。
1 . 2 . 2 样品[ 11 ]
(胶囊剂 ) 经 1%醇制氢氧化钾回流 ,提取
液水浴蒸干 ,残渣用水溶解 ,水溶液经乙醚脱脂后 ,用水饱和
正丁醇提取 ,合并正丁醇提取液 ,以 1%磷酸二氢钾洗涤 ,正
丁醇层蒸干 ,残渣用 90%甲醇溶解并定容。或者样品[ 12 ]
(黄芪及制剂 )加 2%氢氧化钾的甲醇溶液回流提取 3次 ,提
取液蒸干 ,残渣用水溶解 ,置分液漏斗中 ,加氯仿 2 正丁醇 (2
∶1)提取 4次 ,提取液蒸干 ,残渣甲醇溶解定容 ......
HPLC测定黄芪甲苷概况
张莲珠
(吉林天药科技股份有限公司天然药物研究所 ,吉林 长春 130012)
收稿日期: 20042 102 12
作者简介:张莲珠 ( 1971～) ,女,吉林省长春市人,主管药师,医学硕士。一直从事中药新药研究工作。电话: 04312 5541874, E2 mail : zlz@
tianyao . com cn zlzcyt0@163. com
关键词:黄芪甲苷; 定量方法; HPLC; 综述
中图分类号: R284 . 1 文献标识码: B 文章编号: 10012 1528 (2005) 052 05872 02
黄芪甲苷 (Astragal oside Ⅳ)是中药黄芪中的特征性成
分 ,目前黄芪药材以及含黄芪的单方及复方中药制剂大多以
黄芪甲苷为质量评价指标 ,由于黄芪甲苷只在紫外末端有吸
收 ,以往文献报道以薄层扫描方法居多 ,近年来 ,通过 HPLC
方法测定黄芪甲苷以其在准确性、 重现性、 灵敏度等方面的
优势而逐渐为人们广泛使用 ,本文对近五年来 HPLC法测定
黄芪药材及制剂中黄芪甲苷的前处理方法及色谱条件两方
面综述如下。
1 前处理
1 . 1 提取纯化 黄芪本身含有多种成分 ,复方中药成分更
加复杂 ,而黄芪甲苷的含量相对较低 ,在药材中最高含量不
到 0 . 2%[ 1 ]
,因此在 HPLC测定前进行适当有效的前处理对
于保护色谱柱和提高供试液中黄芪甲苷含量都非常必要。
1 . 1 . 1 样品[ 2 ]
(合剂 ) 置分液漏斗中 ,乙醚提取 ,弃去乙
醚液 (乙醚脱脂 ) ,水层用水饱和正丁醇提取 ,合并正丁醇提
取液 (正丁醇提取 ) , 1%氢氧化钠溶液洗涤正丁醇液 ,再用
正丁醇饱和的水洗至中性 ( 1%氢氧化钠处理 ) ,蒸干 ,残渣
用甲醇溶解定容。
1 . 1 . 2 样品[ 3 ]
(黄芪口服液 ) 正丁醇提取 , 1%氢氧化钠
处理 ,蒸干 ,残渣加水溶解后上 D101大孔吸附树脂柱 ,先后用
水和 30%乙醇洗脱 ,弃去洗脱液 ,用 70%乙醇洗脱 ,收集洗
脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 3 样品[ 4 ]
(黄芪注射液 ) 加氢氧化钾 ,振摇使溶解 ,正丁醇提取 , 1%磷酸二氢钠水溶液洗涤 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 4 样品[ 5 ]
(复方口服液 ) 正丁醇提取 , 1%氢氧化钠
处理 ,蒸干 ,残渣用水溶解 ,上大孔树脂柱 ,先用水洗 ,再以
75%乙醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 5 样品[ 6 ]
(黄芪药材 ) 粉碎 ,乙醚脱脂。将药材置索
氏提取器中 ,加甲醇提取 ,回收甲醇 ,提取液蒸干 (甲醇索氏
提取 ) ,残渣用水饱和正丁醇溶解 ,转入分液漏斗中 , 1%氢氧
化钠处理 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 6 样品[ 7 ]
(颗粒剂 ) 研细 ,甲醇索氏提取 ,残渣加水
溶解 ,乙醚脱脂 ,水层正丁醇提取 ,加 1%磷酸二氢钾水溶液
洗涤 ,正丁醇层减压浓缩至干。残渣用水溶解 ,乙醚洗涤 ,水
层蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 7 样品[ 8 ]
(颗粒剂 ) 研细 ,甲醇索氏提取 ,残渣加水 ,微热使溶解 ,正丁醇提取 ,氨试液洗涤 ,正丁醇液蒸干 ,残渣
加水使溶解 ,通过 D101型大孔树脂 ,先后以水、 40%乙醇、70%乙醇洗脱 ,收集 70%乙醇洗脱液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶
解 ,加于中性氧化铝柱上 ,先后用甲醇、 40%甲醇洗脱 ,收集
40%甲醇洗脱液 ,蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 8 样品[ 9 ]
(黄芪提取物 ) 加水溶解后上 D101大孔树脂
柱 ,收集 70%乙醇洗脱液 ,挥去乙醇后 ,转移至分液漏斗中 ,正丁醇提取 ,氨试液洗涤 ,正丁醇层蒸干 ,甲醇定容。
1 . 1 . 9 样品[ 10 ]
(黄芪药材 ) 水提取 ,提取液加甲醇醇沉多
糖 ,滤过 ,回收甲醇至干 ,残渣加少量水使溶解 ,乙醚脱脂 ,正
丁醇提取 ,正丁醇液蒸干 ,残渣加少量乙醇溶解 ,均匀洒在装
有干燥 Al 2O3∶Mg O (36∶9)混合物的 G3漏斗中 ,用 75%乙
醇洗脱 ,洗脱液回收乙醇 ,蒸干 ,残渣用 95%乙醇溶解 ,乙醇
液中加入大量乙醚 ,抽滤 ,滤渣自然挥干乙醚 ,将滤纸浸于甲
醇中使滤渣充分溶解 ,弃去滤纸 ,定容。
综合上述样品提取纯化方法 ,制定基本纯化流程如下 ,如果样品中干扰仍较大 ,则可以参考前述通过大孔树脂柱或
氧化铝柱的处理方法:
Fi g . 1 Extracti on process of a straga loside Ⅳ i n s ample
785
2005年 5月
第 27卷 第 5期
中 成 药
Chinese Traditi onal PatentMedicine
May 2005
Vol . 27 No . 5
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.1 . 2 衍生化 由于黄芪甲苷只在紫外末端有最大吸收 (结
构见 Fig . 2) ,而且含量一般比较低 ,含量测定时影响准确性
及检出限 ,采取适当的方法对其进行衍生化加以改善。
Fi g . 2 Structure of Astraga loside Ⅳ
1 . 2 . 1 姚美村[ 1 ]
等以吡啶 2 苯甲酰氯 (2 . 5∶1)为衍生化
试剂 ,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化 ,样品经甲醇
索氏提取 ,提取液减压蒸干 ,残渣加水饱和正丁醇溶解 , 1%
氢氧化钠提取 3次 ,正丁醇层用正丁醇饱和的水洗 2次 ,正
丁醇层蒸干 ,残渣加吡啶溶解 ,加入氯仿 ,在冰浴下加入苯甲
酰氯 ,摇匀后冰箱放置 24 h,挥干溶剂 ,残渣加入内标储液 ,用甲醇溶解并定容。
1 . 2 . 2 样品[ 11 ]
(胶囊剂 ) 经 1%醇制氢氧化钾回流 ,提取
液水浴蒸干 ,残渣用水溶解 ,水溶液经乙醚脱脂后 ,用水饱和
正丁醇提取 ,合并正丁醇提取液 ,以 1%磷酸二氢钾洗涤 ,正
丁醇层蒸干 ,残渣用 90%甲醇溶解并定容。或者样品[ 12 ]
(黄芪及制剂 )加 2%氢氧化钾的甲醇溶液回流提取 3次 ,提
取液蒸干 ,残渣用水溶解 ,置分液漏斗中 ,加氯仿 2 正丁醇 (2
∶1)提取 4次 ,提取液蒸干 ,残渣甲醇溶解定容 ......
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