第 l 7卷 第 1 期

    2 0 0 4 年 3月

    海南师范学院学报( 自然科学版) J O U RN A L OF H AI NA N N O RMAL U N Wr R s r r y( N A T U R AL S C W ~C E} V 0 1 . 1 7 N o . 1 M a r .砌

    文章编号： 1 6 7 1 — 8 7 4 7 { 2 0 0 4 } 0 1 —0 0 5 0 —0 9

    不同海南粗榧种群核型及其变异研究

    王峻玉 ， 杜道林 ， 符 碧 ， 符文英 ， 付永川 ， 董卫军

    ( 1海南师范学院 生物系， 海南 海1 2 5 7 1 1 5 8 ；

    2海南大学 农学与生命科学院， 海南 海口5 7 0 2 2 8 ；

    3西南师范大学 生命科学学院， 重庆 4 0 0 7 1 5 )

    摘 要： 采用核型分析和巢式方差等级分析等技术对分布于海南的海南粗榧 5个种群染色体

    水平遗传多样性进行了研究， 结果表明： 1 ) 坝王岭种群、 尖峰岭种群、 卡法岭种群、 黎母岭种群和吊

    罗山种群核型公式分别为： 2 n=2 x =2 4=1 6 m+6 n r s m+2 s m( 2 S A T ) 、 2 n =2 x：2 4 =1 6 m+6 m s m+2 s m

    ( 2 S A T ) 、 2 n=2 x =2 4：1 8 m+4 ms m+2 s m( 2 S A T ) 、 2 n=2 x+2 4=2 0 m+2 m s m+2 s m( 2 S AT )和 2 n：2 x=

    2 4=1 8 m+4 m s m+2 s m； 2 ) ~对长度变异最高的为第5对染色体( 9 0 . 3 5 %) ， 最低的为第 l 0对染色体

    ( 2 4 . 5 4 %) ； 臂比变异最高的为第4对染色体( 8 6 . 5 4 %) ， 变异最低的为第 l 2对染色体( 4 o . 2 2 8 %) ；

    3 ) 虽然海南粗榧不同种群核型表现 出一定差异， 但是其间差异不显著， 都为较原始的2 A型； 4 ) 无

    论是相对长度还是臂比， 种群内的变异量总是远远超过种群间的变异量： 其 中坝王岭种群和 吊罗

    山种群间的变异其相对长度和臂比都是最高的， 坝王岭和卡法岭种群、 卡法岭和吊罗山种群的变

    异最低； 5个地点海南粗榧种群间的 值平均为 1 0 %， 即在常规染色体的遗传变异 中， 平均只有

    1 0 %的变异来 自于种群间， 而大部分变异( 约 9 0 %) 来 自于种群内的个体和细胞间. 这样的分化 系

    数表明在海南粗榧种群间进行着频繁的基因交换.

    关键词： 海南粗榧( C e p h , a o t o . ~ m a ~ m i H o o k f ) ； 核型； 巢式方差等级分析； 遗传多样性

    中图分类号： Q 9 4 3 文献标识码 ： A

    对遗传多样性的研究， 可以揭示物种或种群的进化历史， 也能为进一步分析其进化潜力和

    未来的命运提供重要资料…， 尤其有助于物种稀有或濒危原因及过程的探讨l 2 ] . 与形态学变异

    不同， 染色体变异必然导致遗传变异的发生， 是生物遗传变异的重要来源， 在生物的进化过程

    中起作十分重要的作用. 而目前对于天然种群核型多样性方面的研究报道很少.

    海南粗榧( C e p h a l o t a x u s m a n n i i H o o k f ) 是尖杉科( C e p h a l o t a x a c e a e ) 尖杉属一种残遗常绿乔

    木， 因含具有抗癌活性生物碱而遭到过度采伐利用， 种群数量急剧下降， 已呈典型零星分布， 陷

    入濒临灭绝边缘， 为国家二级重点保护植物 一. 本文采用核型分析对海南粗榧种群进行遗传

    多样性研究， 以揭示其遗传适应性和进化潜能.

    1 研究方法

    1 . 1 取样

    本研究地点位于海南岛( N 1 8 。 1 0 ～2 ( 】 。 1 0 ， E 1 0 8 。 3 7 ～1 1 l O 3 ) 5个林区： 坝王岭( P 1 ) 、 尖峰

    收稿日期： 2 0 0 3—1 2—1 5 一

    资助项目： 国家自然科学基金项 目( 3 9 6 6 0 0 1 8 ； 3 0 2 6 0 0 2 4 )

    作者简介： 王峻玉( 1 9 7 5一) ， 女， 海南琼海人， 助理实验师， 主要从事植物学方面的科研和教学工作； 通讯作者： 杜

    道林( 1 9 70一) ， 男， 四川万源人， 教授， 研究员， 博士后， 主要从事生态学和生物技术等方面的教学和科研工作.

    维普资讯 http:www.cqvip.com 第 1 期 王峻玉等： 不同海南粗榧种群核型及其变异研究 5 1

    岭( P 2 ) 、 卡法岭( P 3 ) 、 黎母岭( P 4 ) 、 吊罗山( P 5 ) ( 见表 1 ) . 在自然环境中， 海南粗榧数量极少， 呈

    典型零星分布， 在海南仅见于上述少数几个地区. 本文按地理分布将其分别当作不同种群进行

    分析. ，表 1 样地环境概况

    注： 样地环境资料参考许士杰l 5 J 、 蒋有绪等人 J 及海南气象局资料. 除尖峰岭外， 其余各地为就近县市气象资料

    1 . 2 实验方法

    每一种群随机取5个个体， 每一个体观察 5个细胞， 共统计完好有丝分裂中期分裂相 1 2 5

    个. 采用去壁低渗法进行染色体制片 j . 取材时选择晴好天气于上午 9 ： 3 0 ： 0 0 ， 尽量取相同部位

    幼叶， 用饱和对二氯苯水溶液常温( 2 o o c) 预处理5 . 5 h ， 用 =9 5 %的乙醇与冰乙酸( 3 ： 1 ) 混合

    固定液于4 ~ C 固定至少 2 4 h ， 然后转入 =7 0 %酒精中保存于4 ~ C冰箱中备用. 取叶基用 =

    5 %的混合酶液( 等体积的 =5 %纤维素酶和 =5 %果胶酶) 在 3 2 ~ C下处理 3 h ， 转入蒸馏

    H 2 O中后低渗 1 0 m i n ， 用前述固定液涂片， 火焰干燥， 用 =5 %的G i e m s a ( p H 7 . 2 ) 染色 3 0 m i n ，水洗后风干. 镜检， 用 L e i t z e 显微镜摄影.

    1 . 3 分析方法

    核型分析按李懋学等提出的程序 ， 染色体类型划分按 L e v a n等的方法随 ] ， 核型类型根据

    S t e b b i n s 的分类标准 9 ， 核型不对称系数( A s . K. ( %) ) 按 A 砌。的方法_ l 引； 染色体相对长度系数

    ( I . R. L . ) 的计算用 K u o 等的方法¨ .

    数据统计按常规统计学方法“ . 变异程度采用系统分组方差分析( 套分析或巢式分

    析) 引. 将每对染色体的相对长度、 臂比采用系统分组设计方差分析， 模型为

    y l= +s + +尺( 1 ^+5 ( i j k ) 1 .

    式中各参数的含义分别为： 一第 i 个种群第 个个体第k个细胞第 1 次观测值； 一总体平

    均值； S i 一第 i 个种群的效应( 固定) ； 一第 i 个种群第 个个体的效应( 随机) ； R ( 小一第 i

    个种群第. 个个体第k个细胞的效应( 随机) ； e ， 一试验误差.

    2 结果与分析

    2 . 1 海南粗榧核型分析

    本文共研究了5个海南粗榧种群， 每个种群统计 2 5个具良好中期分裂相细胞， 染色体参

    数取统计平均值.

    2 . 1 . 1 坝王岭种群( 见图1 ( b ) ......