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    文 章 编 号 ： l m6 7 8 l 7 一 ( 2 0 0 1 ) n 3 — 03 l 5 0 5

    LN 保存处理后苦槠种子的膜透性

    郑 郁 善 ，陈 礼 光 .王 舒 风 .董 林 水 ，陈 卓 梅

    ( 福 建农 林 大学杯 学院 . 福 建 南平 3 5 3 0 0 ] )

    摘要 ：研 究 r苦 储种 子和 离 体肛 在 超低 温 悍存 过 程 中 古水 、 冷 陈 方 式 、 解 冻 方式 以 及离 悼肛 冰冻 惮 护 荆 埘

    电导 率 的影 响. 结 果 表 明 ： 含水 堤 屉超 低 温保 存 成功 的 关键 . 适 度脱 水可大 幅度 降 低苦 槠 种子 和 离 体胚 超 低 温

    保 存 过 程 中 的质 膜 伤 害 ； 随着 含水 量 的 降低 ， 其 电 导率 的 变 化里 先 降 后 升 ， 1 j 含 水 量的 电解 盾 外 渗 率 最 低 ；

    而 在 冰 冻 保护 剂作 用 下 ， 离体 J 匪保 存最 佳 古水 慷 为 1 o 。 其 质 膜所 受 的 伤 害 览 较 轻 电解 质 外 渗 址较 小 ， 膜 修

    复 能 力 强

    关键 词 ：苦槠 ：I !保 存 ；质腥 连 性

    中 图分 类号 ：s? 2 2】 文献 标 识码 ：A

    种质 超低温 保 存是 近 年来发 展起 来 的一项 新技 术， 近 5 O a来 ， 由于超 低 温保 存技 术 的建

    立 和 发 展 ， 已有 多 种 植 物 的细 胞 、 组 织 和 器 官 实 现 了 超 低 温 冰 冻 保 存 ，已有 研 究 表 明 . 在 超

    低温 ( 通常 指液 态氮温 度 ， 即一1 9 6 C) 条 件下 ， 细胞 一切 的生理 代谢 和 分裂 活动基 本上 都处于

    静 止状态 ， 因而 可 以保持 种质 的遗 传 稳定性 . 并 可长期 保存. 超 低 温保存 植物 种 子如小 麦 、水 稻 ， 以及 甘蔗 愈 伤组织 3 a后 . 其存 活 率与保 存 l 一2 d的基本 相 同， 但此娄 研 究 尚存在 很

    大 局 限性 ， 仅 限 于。 部 分 经 济 价 值 较 高 的 农 作 物 和 经 济 怍 物 . 有 关 林 术 种 子 超 低 温 保 存 研 究 极

    少 ，苦 槠 ( C T a s e a u , ps L r s c - e r o p ) 是 我 国亚 热 带 闫 叶森 林 群 落 常 见 的建 群 种 之～ ， 材 质 坚

    硬 ， 材性 良好 ， 近年 来阔 叶林 面积锐减严 重 危及其天 然林的保 存， 苦槠种 子具蔼拗 性 ， 在 常规 条

    件 下保存 期短 且 对零下 低 揣和脱 水敏感.目前 尚无 有关 苦槠 长期 贮存 的成 功报 道. 本 文通 过

    苦 槠种子 及其离 体胚 超低 温保 存试验 ， 采 用不 同的含 水量 水平 ， 不 同的防 冻剂 预处理 及 冷冻 、解菱方式， 探捌在保存过程中电导率随各因素和水半坐化的内在规律 ， 旨在实现苦槠种子长期

    收 稿 日期 . 2 0 01 _ l 2

    基金 项 目 束 自然 科 金 助项 I ： lI 9 B 70 ： 一 8)

    者 简 介 ： ”l 、， ∞ ) . 救授 研 究力 阳 抖 ^

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    3 1 6· 塑壁垒 芏望亟 兰 - 曼肇 . 墨

    贮藏 ， 满 足林业生 产 对苫槠种 子的需 求 ， 也为顽拗 性林 木种 子 的长期保 存提供 科 学依据 .

    1 材 料 和方 法

    1 1 材 料

    选择 大小均 匀、 颗粒饱满 无损伤 的苦槠种 子及 其离体胚 . 在 3 0 C、 无菌风 及 硅胶存 在 的

    条件 下 ， 使 苦 槠 种 子 失 水 ， 相 对 含 水 量 分 别 达 到 2 5 、 2 0 、 1 5 、 1 0 、 5 ， 不 失 水 的 为 自然

    含 水 量 ， 不 经 液 态 氦 处 理 的 为 对 照 ( CK ) .

    在苦槠 种子 离体胚 的种胚部 不受 伤 的情 况下 ， 切 取约 3 n 1 n 1 ×3[ i 2 r l l × ( 3 —5 )[ I 2 I i [ 1大 小 的

    胚方 ， 在上述 条件下 使其 失水至 相 对含水 量为 2 、 2 0 l 5 、 1 0 、 5 ， 不失 水 的为 1 3然含

    水量 . 不 经 液 态 氮 处 理 的 为 对 照 ( CK ) .

    1 . 2 冷 冻及 解冻处 理的程序

    不 同 冷 冻 处 理 和 解 冻 处 理 的 流 程 如 下 ：

    O h 0 h

    快 冻 处 理 ： 冰 箱 ( j | C) 停 留一 冷 藏 柜 ( 1 8 C) 停 留一 液 态 氨 【 5 d) .

    0 5 h l h

    缓 冻处理 ： 冰箱 ( j C) 停 留一 冷藏柜 ( 1 8 C) 停 留一 液态氨 ( 5 d) .

    0 5 h 4 h

    慢 冻 处 理 ： 冰 箱 ( j C) 停 留一 冷 藏 柜 ( 1 8 C) 停 留一 液 态 氮 ( 5 d) .

    0 h f J h

    快 解 处 理 ： 液 态 氮 一 冷 藏 柜 ( 一 1 8 C) 停 留 一 冰 箱 ( 5 C) 停 留一 4 0 C温 度 解 冻 .

    O h 0 h

    缓 解处 理 ： 液态氮 冷藏柜 ( 一 1 8℃) 停留一 冰箱 ( 5 C) 停 留一 室温.

    1 h l h

    慢 解处 理 ： 液态氮 冷藏柜 ( 1 8 C) 停 留一 冰箱 ( 5 C) 停 留一 室 温.

    1 . 3 正 交 试 验

    离 体 胚经 过冰 冻保 护剂 预处 理 后 ， 按 I ( 4 。 ×2 ) 正 交试 验设计 表 i s ] ( 表 1 ) 进行 超低 温 保

    存 ， 因索水平 安排见表 2 .

    表 1 I ( 4 X 2 ) 正 交 试 验 设计 表 2 因 子水 平

    丁ab k l Or t ho go na l e x pe r i me n d e s i g n of Ll E “ x 2 ) Tab l e 2 Ar r a n ge me nt。 f f a c t o r s a n d l e v e l s

    试螗 号 l ： 4 5 6 7 试 验 号 l 2 3 4

    1 . 4 电导 率的测定

    对 经上述 不 同冷冻 和解冻 程序处 理 的种子 或种胚进 行称重 ， 用 蒸馏 水 冲洗 数次后 ， 用 滤纸

    嗳干浮 水 ， 装^烧杯 ， 加 入 5 0或 1 0 0mT 重蒸 水浸泡. 用 DDS 1 1 A 型 电导率 仪每 隔 2 h测 1次

    电导值 ......