冬 虫 夏 草 的 分 离 及 培 养 技 术 研 究3

    郭永红 , 刘 蓓 , 朱 萍 , 桂明英 (中华全国供销总社昆明食用菌研究所, 昆明 650223)

    摘要: 实验通过对云南中甸采集的新鲜冬虫夏草全

    株进行菌种的分离、纯化, 并与云南丽江采集分离的冬

    虫夏草进行比较。该实验成功分离出冬虫夏草的优良菌

    种, 并获得冬虫夏草的子座。

    关键词: 冬虫夏草; 分离; 子座

    中图分类号: S64619 文献标识码: B

    文章编号: 1003 - 8310 (2003) 02 - 0022 - 02

    冬虫夏草 Coudyceps sinensis (Berkely) sacc. 是

    某种真菌寄生于高山蝙蝠蛾 ( Hepialus Armorieanus)

    幼虫体内 , 真菌菌丝体在幼虫体内生长繁殖后 , 占

    据整个虫体 , 形成僵虫 , 于 5～6 月份由虫体的头

    部长出子座 , 形成子囊孢子〔 1〕。冬虫夏草营养丰

    富 , 含有17～19种氨基酸 , 多种肽类 , 及甘露醇、多糖等物质 , 对增强人体免疫力、抗肿瘤、延缓衰

    老等有较好的作用〔 2〕。本文采用无性型菌株进行菌

    丝体培养 , 成功分离出冬虫夏草的优良菌种 , 已产

    生冬虫夏草的子座。

    1 材料与方法

    111 供试材料 云南中甸新鲜冬虫夏草 , 编号为

    Z- 虫; 云南丽江冬虫夏草分离的菌种 (经鉴定为

    拟青霉) 编号为L - 虫。

    112 试验仪器 无菌操作台 , 恒温振荡器 , 恒温

    培养箱 , 高倍显微操作器等。

    113 选用培养基 ①PDA 培养基 , ②PDA 加富培

    养基 , ③米饭培养基。

    114 试验方法 第一步: 多次清除虫体表面的杂

    质 →无菌水多次冲洗 →解剖刀剖开虫体及子座 →挑

    取上中下三个部位的组织放在已灭菌的培养基斜面

    上 →置于22℃恒温培养箱中培养 →每天观察记录。

    第二步: 对已萌发的组织进行纯化培养 →接入

    液体培养基 →振荡培养 →观察记录 →接入固体培养

    基 →变温培养 →形成子座 →菌种鉴定。

    2 结果与讨论

    211 菌种分离结果 对冬虫夏草不同部位进行了

    三次分离 , 分离结果见表。由表中可看出 , 从冬虫

    夏草子座分离的组织块较易萌发 , 而虫体分离的组

    织块萌发率很低; 冬虫夏草贮藏一段时间后 , 更容

    易分离成功。

    212 两种冬虫夏草菌种的比较及液体培养 (1)

    将L - 虫 , Z- 虫转管纯化、活化培养 , L - 虫气生

    菌丝旺盛 , 浓白 , 培养基变黄; Z- 虫气生菌丝稀 ,多为粉孢子 , 在斜面上易产生白色子座 , 培养基变

    黄。(2) 将L - 虫 , Z - 虫进行液体 (PDA培养基)

    振荡培养 , 温度 24℃, 转速 120r min , 培养 3d , L

    - 虫培养液深黄色 , 液体浓稠: Z - 虫培养液浅黄

    色 , 菌丝较少; 培养8d , L - 虫培养液深黄色 , 液

    体变清 , 有小菌球 , Z - 虫培养液浅黄色 , 液体浓

    稠。对比实验表明: L - 虫比 Z - 虫生长快 3～4d。

    (3) 将液体菌种静置在室内 , 7d 后 , Z - 虫在液体

    表面及瓶壁上形成大量子座 , 镜检多为粉孢子。而

    L - 虫则有大量气生菌丝 , 无子座形成。

    213 冬虫夏草的固体培养 将液体菌种接入固体

    培养基中 , 10d后培养基表面长满了浓白菌丝 , 20d

    后 , Z- 虫培养基表面长满了 3cm左右的子座 , 而

    L - 虫菌丝倒状 , 出水 ......