杜仲树皮cDNA文库的构建与分析3

    X

    周明兵1

    ,侯 磊2

    ,朱冬雪1

    ,裴 炎2

    ,赵德刚1

    (1.贵州大学 农业生物工程重点实验室 , 贵州 贵阳 550025 ;

    2.西南农业大学生物工程中心 , 重庆 400716)

    摘 要:以杜仲 Eucommia ulmoides Olive五六月份的幼嫩树皮为材料 ,提取总 RNA ,采用 RT- PCR技术(逆转录 —

    聚合酶链式反应)合成 cDNA双链 ,以Uni - ZAP XR vector为载体 ,构建了杜仲树皮的 cDNA文库 ,其文库的滴度

    为3. 4× 1010

    pfu· mL - 1

    ,含插入片段的频率是99 % ,插入片段的分子长为400～2 500bp ,为进一步研究杜种特有的

    药用成分合成途径及杜仲胶合成途径的关键酶基因奠定了基础。

    关键词:杜仲;树皮;cDNA文库

    中图分类号:Q949. 751. 506 文献标识码:A 文章编号:1008 - 0457(2004) 01 - 0058 - 02

    Construction and analysis of a cDNA library in Eucommia ulmoides Olive

    ZHOU Ming2bing1

    , HOU Lei

    2

    , ZHU Dong2xue

    1

    , PEI Yan2

    , ZHAO De2gang1

    (1. Guizhou Key Laboratory of Agricultural

    Biotechnology , Guizhou Univer sity , Guizhou Guiyang 550025 , China ; 2. Biotechnological Center of Southwest Agricultural

    Univer sity , Chongqing 400716 , China)

    Abstract : The total RNA from the new barks of Eucommia ulmoides Olive in May or June were extracted ,A cDNA library were

    constructed from Eucommia ulmoides Olive barks by RT- PCR techniques(reverse transcription polymerase chain reaction ) and

    Uni - ZAP XR vector. The library consisted of 314× 1010

    pfu· mL - 1

    ,in which 99 % of the phages were recombinant . Insert sizes

    ranging from 400bp to 2 500bp were obtained ,which would found the base to further study the key enzymes of the biosynthetic

    pathway of medical constituents and the rubber in Eucommia ulmoides Olive.

    Key words : Eucommia ulmoides Olive ;barks ;cDNA library

    杜仲树皮不仅富含各种有效的药用成分 ,而且又是杜仲胶主要的积累器官。本文通过提取树皮

    RNA ,采用 RT - PCR技术成功地构建了杜仲树皮cDNA文库 ,为进一步研究杜仲特有药用成分合成途径及

    杜仲胶合成途径的关键酶基因奠定了基础。

    1 材料与方法

    1. 1 材 料

    杜仲树皮取自西南师范大学植物园。

    1. 2 试 剂

    cDNA Synthesis Kit、 ZAP - cDNA Synthesis Kit 和 ZAP - cDNA GigapackⅢ均购自Stratagene 公司 ,其他试剂

    均购自上海生工生物工程公司。

    1. 3 方 法

    1. 3. 1 总 RNA的提取 取5g杜仲幼嫩树皮 ,加液氮研磨 ,至粉状后 ,转移至50mL 离心管中 ,加入 65 ℃预

    热的提取缓冲液[质量浓度20g· L - 1

    CTAB ,20g· L - 1

    PVP ,100mmol· L - 1

    Tris - HCl (pH810) ,25mmol· L - 1

    EDTA ,X 收稿日期:2003 - 01 - 07 ;修回日期:2003 - 03 - 05

    基金项目:农业生物技术国家重点实验室(中国农业大学)开放课题资助项目(991004 - 2) ;教育部优秀教师科研基金及贵州省省长基金资助

    项目

    作者简介:周明兵(1975 - ) ,男,河南信阳人,贵州大学农业生物工程重点实验室硕士研究生,从事杜仲基因工程方面的研究 ......