天然产物研究与开发

    2002 Vo1. 14 No. 6 NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT

    杜仲药用有效成分提取方法研究

    刘辉琳 唐明林 安莲英 殷辉安 (成都理工大学化学工程与制药工程系 成都 610059)

    摘 要 为优选杜仲的提取工艺条件 ,本实验以杜仲提取液中氯原酸的含量和浸膏得率为指标 ,采用四

    因素三水平正交设计法 ,筛选影响杜仲提取工艺的因素 ,探索最优的提取工艺条件。实验证明合理的提

    取方法为:12 倍 60 %的乙醇回流 3 次 ,每次 2 小时;所得杜仲提取物中氯原酸含量为 8172 mg g生药 ,浸

    膏得率为 20168 %。

    关键词 杜仲;氯原酸;正交实验;提取工艺

    杜仲( Eucom mia ulmoides Oliv. )为杜仲科杜仲

    属落叶乔木 ,是我国特有的珍稀保护树种和传统名

    贵中药。杜仲主要含木脂素及其甙类、环烯醚萜类 ,有机酸类及氨基酸、杜仲胶、微量元素等 ,其中氯原

    酸是杜仲重要有效成分之一。现代药理已证明杜仲

    具有抗癌、抗衰老、降血压、降血脂、抗疲劳、抗菌、抗

    炎、抗病毒、愈伤和增强机体免疫功能等多种药理作

    用 ,引起国内外医药界广泛关注[1 ,2 ]。传统的杜仲

    提取方法提取时间长 ,加热温度高 ,有效成分损失严

    重 ,因此研究和推广高效的杜仲提取工艺十分必要

    和迫切。为更好地开发利用杜仲 ,保证杜仲提取物

    的质量 ,本文以氯原酸和干浸膏得率为指标 ,对杜仲

    提取方法进行考察 ,采用四因素三水平正交设计法

    筛选影响杜仲提取工艺的因素 ,探索科学、经济的杜

    仲提取工艺。

    1 实验材料

    111 仪器与试剂

    仪器:可见2紫外分光光度计(日本岛津 ,UV2

    1201) ;ZF2Ⅰ型三用紫外分析仪(上海顾村仪器厂) ;

    微量进样器(上海安亭微量进样器厂) ;超声波清洁

    器(AS23120)

    试剂:乙醇(分析纯) ,氯原酸对照品(中国药品

    生物制品检定所提供) ,层析滤纸

    112 供试品

    杜仲购自四川江油 ,经鉴定为杜仲科植物杜仲

    ( Eucom mia ulmoides Oliv. )的干燥树皮。

    2 方法与结果

    211 氯原酸含量测定

    21111 氯原酸标准曲线测定[3 ]

    精密称取氯原酸对照品适量 ,用乙醇(未指明浓

    度皆指分析纯 ,下同)配成 1. 7 mg ml 的溶液 ,用微

    量注射器分别量取 10、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、100 ul ,点于滤纸上 ,成 6 cm 条斑 ,以蒸馏水展开约

    10 cm ,取出 ,热风吹干 ,置 60 ℃±2 ℃烘箱中烘半

    个小时 ,使滤纸均匀干燥 ,将其置于 365 nm 紫外分

    析仪下观察 ,剪下亮蓝色荧光条斑及相同面积的空

    白滤纸 ,剪成细条状 ,分别置于具塞试管中 ,精确加

    入乙醇10 ml。静置过夜 ,超声处理15 分钟 ,取上清

    液用1 cm石英比色皿 ,于325 nm处测定吸收度 ,结

    果填于表 1。以吸光度(A) 为纵坐标 ,氯原酸浓度

    (C)为横坐标绘制标准曲线( Fig. 1) 。经统计处理 ,得回归方程为A = 0. 0028 + 0. 0128C ,相关系数 r =

    0. 9989。

    表 1 氯原酸标准品吸光度

    Table 1 Absorption capacity of standard chlorogenic acid

    体积 Volume (ul) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

    氯原酸浓度

    Chlorogenic acid

    concent ration (ug ml)

    1. 7 3. 4 5. 1 6. 8 8. 5 10. 2 11. 9 13. 6 15. 3 17

    吸光度Absorption 0. 028 0. 048 0. 065 0. 085 0. 108 0. 136 0. 158 0. 182 0. 200 0. 215

    收稿日期:2002208215 修回日期:2002209223

    74

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.图 1 氯原酸标准曲线

    Fig. 1 The standard curve of chlorogenic acid

    21112 供试品中氯原酸含量测定

    用微量进样器吸取供试品 50 ul ,点于滤纸上 ,使成 6 cm条斑 ,以蒸馏水展开约 10 cm ,取出 ,热风

    吹干 ,置 60 ℃±2 ℃烘箱中烘半个小时 ,使滤纸均

    匀干燥 ,将其置于 365 nm 紫外分析仪下观察 ,剪下

    亮蓝色荧光条斑及相同面积的空白滤纸 ,剪成细条

    状 ,分别置于具塞试管中 ,精密加乙醇 10 ml ,静置

    过夜 ,超声处理 15 分钟 ,取上清液用 1 cm石英比色

    皿 ,于 325 nm处测定供试品的吸收度 ,以回归方程

    计算氯原酸的含量。

    212 浸出物含量测定

    取相同投料量杜仲(20 g)提取后所得的供试品

    溶液 ,置恒重的蒸发皿中(X0) ,水浴挥干 ,于 105 ℃

    烘箱中放置 3 h ,取出 ,置干燥器中放置 30 min ,称

    重(X) 。按下式计算浸出物总量:

    [ (X - X0) 投料量] ×100 %

    213 杜仲提取方法的考察

    杜仲中所含的药用有效成分为松脂醇二葡萄糖

    甙、桃叶珊瑚甙、氯原酸等 ,均易溶于甲醇、乙醇 ,故

    本实验选用乙醇为溶媒 ,对杜仲进行渗漉法、冷浸

    法、回流提取法和超声波提取法的考察。

    21311 渗漉法 取杜仲 20 克(过 7 毫米筛)装于渗

    漉筒中 ,加 50 ml 95 %乙醇浸泡 24 小时后 ,加 400

    ml 95 %乙醇进行渗漉 ,将所得渗漉液抽滤 ,滤液减

    压回收乙醇 ,至渗漉液总体积不大于 30 ml ,置于量

    瓶中 ,用 10 ml 95 %的乙醇分次洗涤烧瓶 ,洗涤液并

    入同一量瓶中 ,加 95 %乙醇定容至 40 ml ,得供试品

    1。

    21312 冷浸法 取杜仲 20 克(过 7 毫米筛)置于

    300 ml 锥形瓶中 ,加 95 % 250 ml 乙醇浸泡 24 小时

    后抽滤 ,滤液保留 ,药渣加 95 % 200 ml 乙醇浸泡 12

    小时 ,抽滤 ,两次滤液合并 ,滤液减压回收乙醇 ,至冷

    浸液总体积不大于 30 ml ,置于量瓶中 ,用 10 ml

    95 %的乙醇分次洗涤烧瓶 ,洗涤液并入同一量瓶中 ,加 95 %乙醇定容至 40 ml ,得供试品 2。

    21313 回流法 取杜仲 20 克(过 7 毫米筛)置于

    500 ml 烧瓶中 ,加入 250 ml 95 %乙醇 ,加热回流

    215 h ,抽滤 ,滤液保留 ,药渣加 200 ml 95 %乙醇继

    续回流215 h ,抽滤 ,两次滤液合并 ,滤液减压回收乙

    醇 ,至回流液总体积不大于 30 ml ,置于量瓶中 ,用

    10 ml 95 %的乙醇分次洗涤烧瓶 ,洗涤液并入同一

    量瓶中 ,加 95 %乙醇定容至 40 ml ,得供试品 3 ......