第 32 卷 第 6 期 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vo l . 32 No. 6

    2004 年 6 月 Jour . of No r thw est Sci2Tech U niv . of A gr i . and Fo r . (N at . Sci . Ed . ) June 2004

    杜仲组培快繁的研究X

    李 琰1

    , 张 靖2

    , 辛转霞2

    , 王雅君3

    (1 西北农林科技大学 生命科学学院, 陕西 杨凌 712100; 2 西北农林科技大学 林学院, 陕西 杨凌 712100;

    3 渭南市农技推广中心, 陕西 渭南 714000)

    [摘 要] 研究了植物生长调节剂、基本培养基、采样时间对杜仲腋芽诱导和生长的影响, 并对丛芽增殖培养

    基中植物生长调节剂浓度和生根培养基类型进行了筛选。结果表明, 最佳取材时间为 4 月中旬至 6 月下旬; 以M S

    为基本培养基, 在添加 0. 05 mg? L NAA + 0. 5 mg? L BA 或者 0. 1 mg? L IBA + 0. 5 mg? L BA 的培养基中, 腋芽的

    诱导和生长较好; 继代增殖培养以M S+ 0. 5 mg? L BA + 0. 01mg? L NAA 的培养基丛芽数量最多, 增殖系数最高;

    在W h ite 培养基上生根率可达 57. 5%。

    [关键词] 杜仲; 组织培养; 快繁技术

    [中图分类号] Q 943. 1 [文献标识码] A [文章编号] 167129387 (2004) 0620079204

    杜仲(E ucomm ia u lm oid es O liv . )是杜仲科单属

    单种植物, 为我国特有的名贵药用植物, 具有补肾壮

    腰和抑制肿瘤生长等作用, 特别是对血压有双向调

    节功能[ 1～ 3 ]。杜仲还是一种胶源植物, 杜仲胶具有良

    好的绝缘性、抗酸碱性、热塑性和形状记忆等特点,因而受到世人的普遍重视[ 4 ]。杜仲一般采用种子繁

    殖, 但种子发芽率不高, 而且实生后代个体间药用有

    效成分和杜仲胶含量差异显著, 不利于新选育出的

    高药高胶型杜仲优系的推广[ 5 ]。对杜仲进行组培快

    繁研究, 可在较短时间内获得大量遗传性状一致的

    优良种苗, 不仅有利于优良品种的推广, 保证药用及

    工业原料供应, 还对保护野生种质资源具有重要意

    义。本试验主要研究植物生长调节剂、基本培养基、采样时间等对杜仲腋芽萌发率和芽苗生长的影响,并进行继代增殖培养基和生根培养基的筛选研究,以期为杜仲快繁体系的建立提供理论依据。

    1 材料与方法

    1. 1 初代培养

    采集西北农林科技大学杜仲优树资源圃 4～ 6

    年生高药型品种科大 3 号的当年生枝条, 带回实验

    室切成带 2～ 3 个腋芽的小段, 用 10 mL? L 洗洁精

    洗涤并用自来水反复清洗后, 流水冲洗 2 h, 体积分

    数 70%酒精消毒 40 s, 无菌水冲洗 4 次, 1 g? L Hg2

    Cl2 消毒 4～ 8 m in, 再用无菌水冲洗 4 次后, 把茎段

    切成只带一个腋芽的小段备用。将带腋芽的茎段分

    别接种在BA 质量浓度为 0. 0, 0. 1, 0. 3, 0. 5, 1. 0,2. 0 m g? L 的M S 培养基上, 进行细胞分裂素对腋芽

    的诱导试验; 在M S+ 0. 5 m g? L BA 的培养基上再

    加入NAA 或 IBA , 浓度均依次设为 0. 01, 0. 03,0. 05, 0. 10, 0. 20, 0. 50 m g? L , 进行生长素浓度对腋

    芽的诱导试验; 分别采用M S,B5, H 和W h ite 4 种基

    本培养基, 均附加 0. 05 m g? L NAA + 0. 5 m g? L

    BA , 进行基本培养基对杜仲腋芽诱导的试验; 在附

    加0. 05 m g? L NAA + 0. 5 m g? L BA 的M S 培养基

    上, 进行采样时间对杜仲腋芽的诱导试验。将带腋芽

    的茎段形态学上端向上插入培养基, 每瓶接种2 个,每个处理接种 20 瓶, 定期观察腋芽萌发情况, 30 d

    时统计不同处理中萌发腋芽的生长情况。

    1. 2 继代增殖培养

    在添加 0. 5 m g? L BA 的M S 培养基上依次附

    加浓度为 0. 00, 0. 01, 0. 03, 0. 05, 0. 10 m g? L 的

    NAA , 以初代培养中M S+ 0. 5 m g? L BA + 0. 05

    m g? L NAA 培养基上诱导的腋芽萌发芽苗为材料,切成每段带 1 个腋芽的茎段, 进行NAA 对腋芽增

    殖的影响试验。

    1. 3 生根培养

    以增殖培养中添加 0. 01 m g? L NAA 的无菌短

    枝为材料, 参照N akazaw a 等[ 6 ]

    的生根方法, 将无菌

    短枝基部用100 m g? L NAA 浸蘸3～ 5 s, 然后扦插

    X [收稿日期] 2003212224

    [基金项目] 国家林业局948 项目(9924223) ; 西北农林科技大学青年科研专项部分内容

    [作者简介] 李 琰(1971- ) , 女, 河南洛阳人, 讲师, 主要从事植物学及药用植物学研究。

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.在无激素的M S,B5, H,W h ite 4 种基本培养基上, 进

    行不同培养基对试管苗的生根试验。

    2 结果与分析

    2. 1 植物生长调节剂对腋芽萌发和生长的影响

    2. 1. 1 BA 对腋芽萌发和生长的影响 接种 6 d

    后, 杜仲茎段部分腋芽已开始生长, 10 d 时已长出 1

    cm 左右。由表 1 知, 低浓度的BA 对腋芽的萌动和

    生长有利, 在 0. 0～ 0. 5 m g? L 时, 随着BA 浓度的

    升高, 萌芽率和芽的高度都逐渐增加。在BA 浓度为

    0. 5 m g? L 时, 不仅外植体腋芽萌芽率高, 而且增高

    生长比较明显, 基部形成愈伤也比较小。高浓度BA

    对外植体腋芽的萌动及腋芽的生长均产生一定的抑

    制作用, BA 浓度为 2. 0 m g? L 时, 仅有 5%左右的

    腋芽萌发, 且萌芽后逐渐玻璃化, 生长很快停止。不

    加激素时, 腋芽不能萌芽。

    表 1 BA 对杜仲茎段腋芽诱导和生长的影响

    Table 1 Effects of BA on axillary bud induct ion and grow th of E. u lm oid es O liv . stem

    BA? (mg·L - 1)

    接种外植体数

    No. of

    exp lants

    inoculat ion

    萌发数

    No. of

    bud

    萌芽率? %

    Rate

    of budding

    芽苗高? cm

    Heigh t

    of bud

    基部形成 愈伤情况

    Callus fo rm ing

    status on base

    0 . 0 36 0 0 . 00 0 -

    0 . 1 38 12 31 . 58 2 . 80 +

    0 . 3 40 16 40 . 00 3 . 14 + +

    0 . 5 36 19 52 . 78 4 . 79 +

    1 . 0 34 10 29 . 41 2 . 10 +

    2 . 0 38 2 5 . 26 1 . 14 -

    注: - . 无愈伤组织; + . 愈伤组织量极少; + + . 愈伤组织量少; + + + . 愈伤组织量多 ......