利用正交试验优化丹参愈伤组织培养

    客绍英 石洪凌 马作东 柴凤瑞

    (唐山师范学院生物科学技术系 ,河北唐山 063000)

    摘要 以丹参的茎、 叶为外值体 ,利用正交试验筛选丹参愈伤组织培养的培养基最佳成分及生长条件。结果

    表明丹参茎段接种于 MS + 2, 42 D 510 ml L +NAA 012 mgL + 62 BA 110 mgL易形成愈伤组织 ,生长速度快 ,并在温

    度 25℃、 pH518条件下 ,最适宜试管苗增殖。

    关键词 丹参;愈伤组织;生长条件

    丹参 Salvia m iltiorrhiza Bge根中含有丹参酮 Ⅱ

    A、 隐丹参酮等菲醌类化合物及其它生物活性物质 ,有扩张冠状动脉 ,增加血流量及较强的抗菌消炎作

    用〔 1〕,被广泛用于治疗冠心病、 心绞痛、 心肌梗塞、心动过速、 月经不调等症。作为医药工业的主要原

    料 ,需求量不断增加。因此丹参的种植和栽培受到

    人们普遍重视。利用组织培养快速繁殖和再生研究

    已有报道〔 2～4〕。本研究利用正交试验进一步优化丹

    参愈伤组织诱导的培养基配比 ,同时考查不同温度

    和 pH值对诱导的影响。

    1 材料和方法

    111 试验材料 丹参种子由中国医学科学院药用

    植物研究所胡炳义先生提供。

    112 试验方法 丹参种子按常规方法种植 ,在生

    长第二年春季从生长健壮、 无病虫害的植株上切取

    叶片及带顶芽茎段 (长约 015～115 cm,粗 011～015

    cm,除去叶片 ) ,在烧杯中用自来水冲洗 30 min,在

    超静工作台上用 75%乙醇溶液浸泡 30 s,无菌水冲

    洗 1次 , 0115%升汞溶液浸泡 3～10 min (浸泡过程

    注意叶色的变化 ,如变色马上取出 ) ,无菌水冲洗 3

    ～5次 ,消毒纸巾吸干表面水分后 ,截取 015 cm茎

    尖 ,接种于预先经过高压消毒的不同配比成分的培

    养基上。试验采用 L9 (3)

    4

    正交试验设计 (表 1)

    〔 5〕,叶片切成 015 ×015 cm2

    接种于 MS + 110 62 BA +

    011 NAA培养基上 ,并设不同的温度 ( 15℃、 25℃、35℃)和 pH值 (410、 518、 710)处理。

    2 结果与讨论

    211 不同培养基成分对丹参愈伤组织生长的影响

    根据观察 , 9种不同的培养基成分组合,对丹参愈

    伤组织鲜重影响较大 (见表 2) , 1、 2、 3、 4、 5、 6、 8、 9

    号形成的愈伤组织初期为淡黄色 , 20～35天后 ,形

    成黄绿色; 7号形成的愈伤组织质地较疏松 ,呈黄绿

    色 ,随愈伤组织的增殖 ,其颜色逐渐变为深绿色 ,表

    面有小突起 ,部分呈瘤状。对 9种组合 ,按愈伤组织

    细胞块鲜重进行方差分析 ,结果 B因素达到极显著

    水平 ,而 C因素接近显著水平 , D因素不显著 (表

    3)。

    表 1 培养基试验因素水平

    因子 A

    MS

    B

    2, 42 D

    (mg l)

    C

    NAA

    (mgL)

    D

    62 BA

    (mg l)

    水平一 MS 1 011 011

    水平二 1 2MS 5 012 015

    水平三 1 3MS 10 013 110

    表 2 不同培养基成分对愈伤组织的影响

    培养基 编号

    因素

    A B C D

    接种 块数 愈伤组 织块数

    组织块 鲜重 ( g)

    诱导率 (% )

    1 1 1 1 2 50 45 41233 90

    2 1 2 2 3 50 49 51765 98

    3 1 3 3 1 50 44 41060 88

    4 2 1 2 1 50 45 41566 90

    5 2 2 3 2 50 43 51630 86

    6 2 3 1 3 50 43 31970 86

    7 3 1 3 3 50 46 31876 92

    8 3 2 1 1 50 45 51874 90

    9 3 3 2 2 50 46 41694 92

    培养温度: 25℃,光照: 1500Lx、 12 h d

    表 3 正交试验方差分析表

    来源 df SS MS F F0105 F0101

    B 2 416407 213203 1731805

    3 3

    1910 9910

    C 2 013656 011818 131618

    D 2 011878 010939 71033

    A (误差 ) 2 010267 010133

    212 不同培养基成分对丹参愈伤组织诱导的影响

    在 9种培养基组合上接种外植体茎芽 , 115～2周

    后 ,腋芽均产生了黄绿色的愈伤组织 ,但不同的成分

    组合对诱导茎芽产生的愈伤组织的量不同 ......