黄连上清片质量标准研究.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(22KB，2页)。
黄连上清片质量标准研究
长沙市药品检验所(410004) 龙海燕 潘震宇
主题词 大黄素分析 大黄酚分析 黄芩甙分析 色谱法 ,高压液相
黄连上清片具有清热通便、散风止痛的功效 ,是临床常
用药品 ,共质量标准收载于卫生部标准中 ,其鉴别主要为理
化鉴别 ,故考虑增加两项 TLC来增加其鉴别反应的专属性 ,建立 HPLC方法 ,以测定其大黄素、大黄酚含量。
1 实验材料
黄连上清片(市售) 、大黄对照药材、大黄素、大黄酚、黄
芩苷对照品均为中国生物药品检定所提供;聚乙酰胺薄膜、硅胶 H板(青岛海洋试剂化工厂) ; HP - 1100 高效液相色谱
仪:AE - 240 电子天平 ,Lichrospher - ODS 柱 ,MeoH (色谱
纯) ,其余试剂为分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 大黄、大黄素的薄层鉴别 (1)供试品溶液的制备:取
本品 10 片 ,去糖衣研碎 ,加乙醇回流 30min ,过滤 ,取滤液蒸
干 ,残渣加 1 %HCl10ml ,水浴加热 1h ,放冷 ,加乙醚萃取 2
次 ,每次 20ml ,合并乙醚 ,蒸干 ,加乙醚 1ml ,即得。(2)对照
药材液制备:取大黄对照药材 0. 1g ,同上法制备。(3)对照品
制备:取大黄素加乙醇制成每 ml 含 1mg的溶液。(4)薄层色
谱条件与结果:吸取上述对照药材、对照品及供试品溶液各
5ul ,分别点于同一硅胶 G板上 ,以石油醚(30～60 ℃) - 甲酸
乙酯 - 甲酸(15∶ 5∶ 1)的上层液为展开剂 ,展开 ,晾干 ,置紫外
光灯(365nm)下检视。供试品色谱中 ,在与对照药材相应的
位置上 ,显相同的 5 个橙黄色荧光斑点。在与对照品色谱相
应位置上 ,显相同的橙黄色荧光斑点。氨气薰后 ,日光下检
视 ,斑点变红色。
2. 2 黄芩苷的薄层鉴别 (1)供试品溶液的制备:取本品 4
片 ,去糖衣 ,研细 ,加 70 %乙醇 5ml ,超声处理 30min ,过滤 ,取
滤液即得。(2)对照品溶液的制备:取黄芩苷加乙醇制成每
ml含黄芩苷 1mg的溶液。(3)薄层条件与结果:吸取上述对
照品及供试品溶液各 2ul ,分别点于同一聚酰胺薄膜上 ,以醋
酸为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应位置上 ,显相同的棕色
荧光斑点。
3 大黄素、大黄酚的含量测定
3. 1 色谱条件与系统适应性研究 用十八烷基硅烷键合硅
胶为填充剂 ,甲醇 - 0. 1 %磷酸(85∶ 15)为流动相 ,检测波长:
254nm;理论塔板数按大黄素峰计算 ,应不低于 2000。
3. 2 溶液的配制 (1)对照品溶液的制备:分别精密称取大
黄素、大黄酚对照品适量 ,各用甲醇配制成每 ml 含 25ug 的
储备液 ,再配制成大黄素、大黄酚分别为每 ml2ug、 4ug 的混
合溶液。(2)供试品溶液的制备:取本品 10 片 ,去糖衣 ,精密
称定 ,研细 ,精密称取 1 片的重量 ,置圆底烧瓶中 ,精密加甲
醇 20ml ,称重 ,回流 1h ,放冷 ,用甲醇补足重量 ,过滤 ,精密量
取续滤液 10ml ,置圆底烧瓶中挥干甲醇 ,加 2. 5mol L 硫酸
30ml ,水浴回流 1h ,放冷 ,加氯仿 30ml ,回流 0. 5h ,放冷 ,取氯
仿层;酸液再加氯仿萃取 ,每次 30ml ;合并氯仿液 ,挥干 ,残渣
加甲醇转移至 100ml量瓶中 ,并稀释至刻度 ,即得。
3. 3 标准曲线的制备 (1)大黄素标准曲线的制备:配制 5
种浓度的大黄素对照品溶液 ,依次进样 ,每次 10ul ,测定峰面
积 ,以对照品浓度对峰面积进行线性回归。回归方程: y =
28. 71559X + 4. 79657e - 1 , r = 0. 99999。其线性试验结果
为:当 Amount (ug、 ml)为2. 022、 4. 044、 7. 583、 10. 110、 15. 165
时 ,Area 则分别为59. 36、 116. 46、 217. 45、 291. 59、 435. 74。
结果表明 ,在 2～15ug 范围内线性关系良好。(2)大黄酚标
准曲线的制备:配制 5 种浓度的大黄酚对照品溶液 ,依次进
样 ,每次 10ul ,测定峰面积 ,以对照品浓度对峰面积进行线性
回归。回归方程: y = 26. 87X + 7. 189e - 1 , r = 0. 99999 ......
长沙市药品检验所(410004) 龙海燕 潘震宇
主题词 大黄素分析 大黄酚分析 黄芩甙分析 色谱法 ,高压液相
黄连上清片具有清热通便、散风止痛的功效 ,是临床常
用药品 ,共质量标准收载于卫生部标准中 ,其鉴别主要为理
化鉴别 ,故考虑增加两项 TLC来增加其鉴别反应的专属性 ,建立 HPLC方法 ,以测定其大黄素、大黄酚含量。
1 实验材料
黄连上清片(市售) 、大黄对照药材、大黄素、大黄酚、黄
芩苷对照品均为中国生物药品检定所提供;聚乙酰胺薄膜、硅胶 H板(青岛海洋试剂化工厂) ; HP - 1100 高效液相色谱
仪:AE - 240 电子天平 ,Lichrospher - ODS 柱 ,MeoH (色谱
纯) ,其余试剂为分析纯。
2 实验方法与结果
2. 1 大黄、大黄素的薄层鉴别 (1)供试品溶液的制备:取
本品 10 片 ,去糖衣研碎 ,加乙醇回流 30min ,过滤 ,取滤液蒸
干 ,残渣加 1 %HCl10ml ,水浴加热 1h ,放冷 ,加乙醚萃取 2
次 ,每次 20ml ,合并乙醚 ,蒸干 ,加乙醚 1ml ,即得。(2)对照
药材液制备:取大黄对照药材 0. 1g ,同上法制备。(3)对照品
制备:取大黄素加乙醇制成每 ml 含 1mg的溶液。(4)薄层色
谱条件与结果:吸取上述对照药材、对照品及供试品溶液各
5ul ,分别点于同一硅胶 G板上 ,以石油醚(30～60 ℃) - 甲酸
乙酯 - 甲酸(15∶ 5∶ 1)的上层液为展开剂 ,展开 ,晾干 ,置紫外
光灯(365nm)下检视。供试品色谱中 ,在与对照药材相应的
位置上 ,显相同的 5 个橙黄色荧光斑点。在与对照品色谱相
应位置上 ,显相同的橙黄色荧光斑点。氨气薰后 ,日光下检
视 ,斑点变红色。
2. 2 黄芩苷的薄层鉴别 (1)供试品溶液的制备:取本品 4
片 ,去糖衣 ,研细 ,加 70 %乙醇 5ml ,超声处理 30min ,过滤 ,取
滤液即得。(2)对照品溶液的制备:取黄芩苷加乙醇制成每
ml含黄芩苷 1mg的溶液。(3)薄层条件与结果:吸取上述对
照品及供试品溶液各 2ul ,分别点于同一聚酰胺薄膜上 ,以醋
酸为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应位置上 ,显相同的棕色
荧光斑点。
3 大黄素、大黄酚的含量测定
3. 1 色谱条件与系统适应性研究 用十八烷基硅烷键合硅
胶为填充剂 ,甲醇 - 0. 1 %磷酸(85∶ 15)为流动相 ,检测波长:
254nm;理论塔板数按大黄素峰计算 ,应不低于 2000。
3. 2 溶液的配制 (1)对照品溶液的制备:分别精密称取大
黄素、大黄酚对照品适量 ,各用甲醇配制成每 ml 含 25ug 的
储备液 ,再配制成大黄素、大黄酚分别为每 ml2ug、 4ug 的混
合溶液。(2)供试品溶液的制备:取本品 10 片 ,去糖衣 ,精密
称定 ,研细 ,精密称取 1 片的重量 ,置圆底烧瓶中 ,精密加甲
醇 20ml ,称重 ,回流 1h ,放冷 ,用甲醇补足重量 ,过滤 ,精密量
取续滤液 10ml ,置圆底烧瓶中挥干甲醇 ,加 2. 5mol L 硫酸
30ml ,水浴回流 1h ,放冷 ,加氯仿 30ml ,回流 0. 5h ,放冷 ,取氯
仿层;酸液再加氯仿萃取 ,每次 30ml ;合并氯仿液 ,挥干 ,残渣
加甲醇转移至 100ml量瓶中 ,并稀释至刻度 ,即得。
3. 3 标准曲线的制备 (1)大黄素标准曲线的制备:配制 5
种浓度的大黄素对照品溶液 ,依次进样 ,每次 10ul ,测定峰面
积 ,以对照品浓度对峰面积进行线性回归。回归方程: y =
28. 71559X + 4. 79657e - 1 , r = 0. 99999。其线性试验结果
为:当 Amount (ug、 ml)为2. 022、 4. 044、 7. 583、 10. 110、 15. 165
时 ,Area 则分别为59. 36、 116. 46、 217. 45、 291. 59、 435. 74。
结果表明 ,在 2～15ug 范围内线性关系良好。(2)大黄酚标
准曲线的制备:配制 5 种浓度的大黄酚对照品溶液 ,依次进
样 ,每次 10ul ,测定峰面积 ,以对照品浓度对峰面积进行线性
回归。回归方程: y = 26. 87X + 7. 189e - 1 , r = 0. 99999 ......
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