第 3 1 卷 第 2 期

    2 O O 5年 2月 1 7 0—1 7 6页

    作 物 学 报

    ACTA AGRONOMI CA s I NI CA

    Vo 1 . 31.No. 2

    p P .1 7 0—1 7 6 F e b. ，2 0 0 5

    农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究

    李桂兰 乔亚科 杨少辉 靳朝霞 李明刚

    ( 河北科技师范学院， 河北昌黎 0 6 6 6 0 0 ； 南开大学分子生物学研究所 ， 天津 3 0 0 0 7 1 )

    摘 要： 直接以农杆菌转化系统为平台， 以栽培大豆( G l y c i n e L . )吉林 3 5 、 中黄 2 8 、 南农 、 铁丰 2 9 、 铁丰 3 O和开育 1 2

    的子叶节为外植体 ， 用 L B A 4 4 0 4农杆菌( 含 p P C . K S A质粒) 研究了影响大豆子叶节转化的因素。结果表明， 大豆品种之间

    转化存在着差异 ， 吉林 3 5转化率最高， 平均转化率为 2 . 1 6 %， 单次最高转化率达 6 . 1 2 %； 中黄 2 8次之， 平均转化率为

    1 . 9 %。 单次最高转化率达 3 . 3 3 %； 南农转化率为 1 . 0 5 %； 铁丰 2 9居第 4位， 转化率为 0 . 9 5 %； 铁丰 3 0和开育 1 2无转化植

    株。用4 d 苗龄的子叶节 ， 农杆菌浸染3 0 r a i n ， 共培养3 d比较合适。萌发培养基和不定芽诱导培养基对转化率的影响存

    在交互作用， 对于吉林 3 5 来说， 大豆萌发培养基( G ) 和不定芽诱导培养基( Y) 的最佳组配方式为 G 2+Y 1 ( 转化率 6 . 1 2 %)

    和 G 1 +Y 2组合( 转化率 5 . 2 6 %) 。农杆菌介导的转化系统 中， 转化植株的筛选方式对转化率影响很大， 筛选培养初期，采用比较低的筛选浓度 ， 在继代培养过程中逐次提高筛选压力 ， 可以获得较好的转化效果。

    关t词：大豆；根癌农杆菌 ； 子叶节； 转化

    中圈分类号 ： s 5 6 5 ， Q T S

    S t u d y o f t h e Ag r o b a c wr i u m- me d i a t e d Tr a n s f o r ma t i o n

    d o n a r y No d e

    L I Gu i . L a n 。 . _ 。 Q I A O Y a . K e 。 ，Y AN G S h a o . H u i 2 ，J I N Z h a o . ) 【 i a 2 ，L I Mi n g - G a n g ~

    ( H t b t N t mn a l U n l mr s i t y o f＆ ＆T e c h n o o g y，C h a n g O 6 6 6 0 O， e a t , ； I n s t ~ u t e o fMo k o d a r B o o f f ，N a n k a “呐Ⅻ嘶 ，T a n j n 3 0 0 0 7 1 ，C h n a)

    Ahs I 嘣 ：S u i t a b l e s o y b e a n g e n e t ic t r a n s f o r ma t i o n s y s t e m h a s n o t b e e n e s t a b l i s h e d b y n o w.T h e f a c t o r s i n f l u e n c i n g

    Ag r a b a ~ r u m- me d i a t e d s o y b ea n c o t y l e d o n a r y n o d e t r a n s f o r ma t i o n we I e s t u d ie d i n t h i s r e s e a r c h S O a s t o i mp r o v e t h e t r a n s -

    f o r ma t i o n f r e q u e n c y o f s o y b e a n.T h e r e s u l t s s h o we d t h a t t h e t r a n sf o r ma t i o n f r e q u e n c y w a s d i f fe r en t a mo n g c u lt i v a r s o f s oy -

    b e a n .J i l i n 3 5 w 8 s t he h i g h e s t i n t r a n s f o r m a t i o n r at e . Z h o n g h u a n g 2 8 W a g t he s e c o n d a n d f o l l o w e d b y N a n n o n g a n d T i e f e n g

    2 9 ，a nd t h e r e w a s n o t I l t I ~o r n l e d p l a n t i n T i e f e n g 3 0 a nd K a i y u 1 2 .T he a v e r a g e a nd t he h i g he s t t r a n s f o r m a t i o n r at e w e r e

    2 . 1 6 % a nd6. 1 2 % f o r J i l i n 3 5， a n d 1 . 9 % a nd 3 . 3 3 % f o r Z h o n gh u a n g 2 8 ， r es p e c t i v e l y( T a b l e 1 ) . T he s u it a b l e s e e d l i n g

    a g e w 8 8 a b o u t 4 d a y s - o l d( F i g . 5 )a n d t he a p p r o p r i a t e d u r a t i o n o f i n f e c t i o n a nd C O — c u lt u r e w i t h A g r o b a c t e r i u m w e r e a b o u t 3 0

    m i n u t e s a nd 3 d ay s r es p e c t i v e l y( F i g . 4 ) .T he r e w a s a n i n t e r ac t i o n b et w e e n t he g e r m i n a t i o n me d iu m a n d s h o o t s r e g e n e r a.

    t i o n~ d i u l n f or t r an s f o r ma t i o n f r eq ue n c y .T h e b et t e r c o mb i n at i o n p a t t e r n o f g e r mi n at io n me d i u m a n d s h o o t s r eg e n e r at i o n

    me d i 啪 w e r e G 2+Y 1( t r a n s f o r m a t i o n r at e w a s 6 . 1 2 %)a nd G1+Y 2( t r a n s f o r m a t i o n r at e w a g 5 . 2 6 %)i n t h i s r es e a r c h ......