美味牛肝菌多糖最佳提取工艺研究

    李志洲 ,邓百万 ,杨海涛 ,王 军 ,尹永江

    (陕西理工学院化学系 ,汉中 723001)

    摘要: 对美味牛肝菌( Boletus edulis Bull)子实体多糖提取最佳工艺条件进行了研究。通过实验既探讨了温度、 pH值、时

    间、料液比及浸提级数对提取效果的影响 ,也探讨了酶法、三氯乙酸 —正丁醇法及复合法去除蛋白的工艺条件。结果表明:蛋

    白质去除最佳工艺为酶法和三氯乙酸 —正丁醇复合法 ,美味牛肝菌多糖提取最佳工艺为加水 20 倍 ,80℃,pH 8 时浸提 1h ,多

    糖浸提率可达7. 37 %。

    关键词:美味牛肝菌;多糖;提取;分离

    中图分类号:Q53 文献标识码:A 文章编号:1006 - 8376(2003) 03 - 0027 - 03

    食用菌因具有高蛋白、低脂肪 ,一定量的纤维素

    和矿物质等特点而越来越被人们重视 ,国内外已逐

    步把食用菌抽提物广泛应用到保健食品、调味品等

    食品行业中。现有资料表明食用菌中的多糖物质具

    有增强人体免疫功能 ,抗衰老 ,抗肿瘤 ,抗疲劳作用。

    目前 ,我国已有食用菌多糖药品在临床上运用。对

    多糖提取多见于金针菇、香菇等 ,但对美味牛肝菌却

    不多见。美味牛肝菌( Boletus edulis Bull ) 又名大脚

    菇、白牛肝菌。牛肝菌科。菌盖直径 4～15cm。扁

    半球形或稍平展 ,不粘 ,光滑 ,边缘钝 ,黄褐色 ,土褐

    色 ,赤褐色。分布于河南、台湾、黑龙江、四川、贵州、云南、西藏、内蒙古、福建等地。属优质野生食用菌 ,其菌肉厚而细软 ,味道鲜美 ,可药用。是“疏筋丸”的

    成分之一 ,可治腰腿疼痛 ,手足麻木 ,筋骨不舒四肢

    抽搐。该菌子实体的水提取物对小白鼠肉瘤 180 的

    抑制率为100 % ,对艾氏腹水癌的抑制率为 90 %[1 ]。

    本实验就牛肝菌的多糖提取工艺及粗多糖的蛋白质

    去除方法进行了探讨。

    1 材料与方法

    1. 1 材料

    市售美味牛肝菌(产地:陕西镇巴 )

    1. 2 试剂

    胰蛋白酶 Tkypsin 1 :250 (上海化学试剂采购供

    应站分袋厂) , 葡萄糖、苯酚、浓硫酸、氢氧化钠等均

    为分析纯。牛血清蛋白、考马斯亮蓝 G- 250。

    1. 3 主要仪器

    收稿日期:2003 - 06 - 11

    作者简介:李志洲,男(1969 - ) ,讲师,主要从事天然植物有效成份的

    提取与研究。

    722分光光度计(上海第三分析仪器厂) TDL -

    400离心机(上海安亭科学仪器厂) 格兰仕微波炉

    (格兰仕电器有限公司) 。

    1. 4 分析方法[2 - 6 ]

    1. 4. 1 多糖的测定

    苯酚 —硫酸法 ,以葡萄糖作标准曲线。分别取

    标准糖溶液(质量浓度为100 mg· L - 1) 0. 1、 0. 2、 0. 3、0. 4、 0. 5、 0. 6、 0. 7mL 依次加水 ,使最终体积均为

    1mL。另取 H2O1mL 作空白 ,每支试管加l5 %苯酚溶

    液 1mL ,摇匀。用移液管向每支试管中加浓硫酸

    5mL ,直接冲击液面 ,将试管摇匀 10min 后 ,放入

    25 ℃水浴中20min。在490nm下比色测定 ,以糖的质

    量浓度为横坐标 ,以吸光度为纵坐标 ,绘制标准曲

    线 ,得直线方程为A = 8. 8x + 0. 078。

    1. 4. 2 蛋白质含量的测定

    考马斯亮蓝 G- 250法 ,以牛血清蛋白作标准曲

    线。分别吸取牛血清蛋白标准溶液(质量浓度为 0、200、 400、 600、 800、 1000 mg· L - 1) 0. 1mL ,每个样品放

    入10mL 具塞试管中 ,加入考马斯亮蓝 G- 250 蛋白

    染色剂 5mL ,将试管中溶液混合后静置 2min ,用

    10mm厚的比色皿在 595nm下读取吸光度。制作通

    过原点的直线为其标准曲线 ,得方程为 A = 0.

    0067x。

    1. 5 脱蛋白方法[6 ]

    1. 5. 1 酶法

    1. 5. 2 三氯乙酸 ———正丁醇法

    1. 5. 3 酶法和三氯乙酸 ———正丁醇相结合法

    1. 6 工艺流程

    牛肝菌 →烘干 →粉碎 →水浸提 →上清液 →乙醇

    沉淀 →复溶 →去除蛋白 →较纯多糖

    · 72 · 氨基酸和生物资源

    Amino Acids Biotic Resources 2003 ,25(3) :27～29

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.2 结果

    2. 1 多糖提取工艺条件确定

    选用表1所示 A～D 四个因素 ,每个因素选三

    个水平 ,作L9 (3

    4)正交试验。

    表1 多糖浸提实验条件

    水平 A B C D

    1 70 1 10 4

    2 80 2 20 6

    3 90 3 30 8

    A:浸提温度( ℃) B :浸提时间(h) C:加水倍数 D:pH值

    表2 实验结果

    序号 A B C D E F G

    1 1 1 1 1 58 4. 00 2. 32

    2 1 2 2 2 154 1. 46 2. 25

    3 1 3 3 3 218 0. 44 0. 95

    4 2 1 2 3 121 6. 10 7. 37

    5 2 2 3 1 219 1. 11 2. 44

    6 2 3 1 2 50 12. 35 6. 19

    7 3 1 3 2 251 1. 66 4. 18

    8 3 2 2 3 51 5. 21 2. 66

    9 3 3 1 1 141 1. 31 1. 60

    I 5. 52 13. 87 11. 16 6. 35

    II 16 7. 35 11. 22 12. 61

    III 8. 43 8. 73 7. 57 10. 98

    IP 3 1. 84 4. 62 3. 72 2. 12

    IIP 3 5. 33 2. 45 3. 73 4. 20

    IIIP 3 2. 81 2. 91 2. 52 3. 66

    Rj 3. 49 2. 17 1. 21 2. 08

    A:浸提温度( ℃) B :浸提时间(h) C:加水倍数 D:pH值 E:浸提液体

    积(mL) F :多糖质量浓度(mg mL) G:浸提率( %)

    由表2数据分析可知 ,影响浸提率因素顺序为:温

    度〉浸提时间〉酸度〉加水倍数。最佳参数为加水 20

    倍 ,80℃浸提1h ,酸度pH = 8。在此工艺下浸提率为

    7. 37 %。

    2. 2 浸提级数的确定

    在选取最佳条件下浸提三次 ,其结果为第一次

    浸提后浸提率为7. 44 % ,第二次浸提后浸提率为 1.

    04 % ,第三次浸提后浸提率为 0. 27 % ......