第 4 0卷 第 6期

    2 0 0 4年 1 1月

    林 业 科 学

    SC1 ENTI A S 1 LVAE S 1 N1 CAE

    Vo 1 . 4 0.No. 6

    No v.，2 0 0 4

    马尾松表达序列标签多态性初步分析

    尹佟明 李 东 陈 颖 黄敏仁 王明庥

    ( 南京林业大学林木遗传与基因工程开放研究实验室 南京 2 l o 0 3 7 )

    关键词： 单链构象多态性( S S C P ) ， 表达序列标签( E S T ) ，马尾松，遗传图谱

    中圈分类号： 7 1 8 . 4 6； Q 9 4 3 . 2 文献标识码 ： A 文章编号： 1 0 0 1 —7 4 8 8 ( 2 0 0 4 ) 0 6—0 1 7 6—0 5

    Pr e l i mi n a r y De t e c t i o n o f Po l y mo r ph i s ms o f Ex pr e s s e d S e qu e n c e Ta g

    i n Pi nu s ma s s o ni a n a

    Yi n To n g mi n g L i Do n g Ch e n Yi n g Hu a n g Mi n r e n Wa n g Mi n g x i u

    ( T h e K e y L a b o r a l o O o fF o r e s t G e n e t i c s a n d G en e ， n ee r i n g.N a n f i n g F o r e s t 0 U n i v e r s i t y N a ~ ' n g 2 1 0 0 3 7 )

    Ab s t r a c t ： We r e p o r t e d o u r p r el i m i n a r y s t u d y o n ma p p i n g o f t h e e x p r es s e d s e q u e n c e t a g( E S T)u s i n g s i n g l e — s t r a n d e d DN A

    c o n f o r ma t i o n p ol y m o r p h i s m ( S S C P)o n p ol y me b a s e c h a i n r ea c t i o n( P C R)p r o d u c t .F i v e E S T s p r i me r p a i r s，d e v e l o p e d f r o m

    n u c l e a r g e n e s i n c l u d i n g C AD( c i n n a m y l — a l c o h o l d e h y d r g e n a s e )，C H S( c h a lc o n e s y n t h a s e ) ，N I R( n i t r i t e r ed u c t a s e ) ，AR A 5 5 4

    ( c D N A e x p r es s e d i n d i f f e r en t i a t i n g x y l e m i n P n u s t a e d a e)a n d G S( g l u t a mi n e s y n t h e t a s e ) ，w e r e s e l e c t e d t o o p t i mi z e t h e

    e x p e r ime n t a l p r ot o c o l a n d g e n e r at e ma p p i n g ma r k e r s i n t h e me g a g e mt o p h y t e s f r o m a s i n g l e t r ee o f P n u s mⅡ 5 o 。， . Ou r

    u l t i ma t e g o a l wa s t o u s e S S CP a p p r oa c h t o c o n s t r u c t a t r an s c r i p t i o n a l ma p f o r c o mp a r at i v e ma p p i n g s t u d i e s i n P.m, o . . ~o 1 a a.

    T h e e f i q c i e n c y t o c o n st r uc t a t r an s c r ip t i o n a l ma p i n P.ma s s o n i a n a b a s e d o n t h e p u b l i s h e d ES T p r ime r p a i r s d e r iv e d f r o m o t h e r

    p i n e s p ec i e s c r i t i c a ll y d e p en d e d o n t h e s u c c e s s f u l a mp l i f i c a t i o n o f ES T f r ag me n t s a n d t h e r at i o o f t h e h e t e r oz y g o u s l o ci r ev e a le d i n

    P. ， n 侧 。 口 ， .I n t h i s s t u d y ，3( 6 0 %)o u t o f 5 t e s t e d E S T p r i m e r p a i r s w e r e s u c c e e d e d i n a mp l i f i c a t i o n ，h o w e v e r ，o n l y 1

    ( 2 0 %)g e n e w a s h e t e r oz y g o u s i n t h e t e s t e d t r ee . ， I 1 h e r at i o o f h e t e r oz y g o u s l o c i d e t e c t e d i n t h i s s t u d y w a s s i m il a r t o t h a t r ev e a le d

    b y a n o n y mo u s ma r k e r i n P. t a e d a.T h e r ef o r e，a l o w e f i q c i e n c y wo u l d b e e x p e c t e d i f t h e ma p w o u ld b e c o n s t r uc t e d u s i n g s i n g l e

    p e d i g r ee.， I 1 h e s e g r eg a t i o n r a t i o o f l o c i r ev e a le d b y p r i me r p a i r s w o u l d b e h i g h e r i f mu l t i p l e p e d i g r e e s wo u l d b e u s e d. We

    p r op o s e d t h a t c o n s e n s u s ma p p i n g a p p r oa c h b a s e d o n mu l t i p l e — p e d i g r ee s h o u l d b e u s e d f or ES T m a p p i n g a n d t h e r ef o r e t o i n c r ea se

    t h e e f i q c i e n c y o f E S T ma p p i n g.

    Ke y wo r d s ： S i n g l e — s t r an d c o n fo r ma t i o n p ol y mo r p h i s m( S S C P ) ......